鼻咽癌核心家系成员VCA-IgA抗体检测结果分析及家系标本库的建立▲

刘海洲 崔 英 岳惠芬 梁新强 吴冬梅 陈丽霞 朱文良 聂 龙 宛 月 丰大利

(广西医科大学附属肿瘤医院，南宁市 530021)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是影响广西地区人群健康的最主要的恶性肿瘤，在广西地区其发病率和死亡率都相对较高［1］。目前鼻咽癌的病因学研究已经深入到了分子水平，鼻咽癌核心家系相关基因的研究也逐步成为热点，但尚未见有鼻咽癌核心家系数据库及其成员血液标本库的报道。鉴于此，本研究通过建立广西254个鼻咽癌核心家系数据库及成员血液标本库，并检测EB-VCA-IgA抗体，为进一步利用以核心家系为基础的遗传关联研究，探讨相关基因多态性与鼻咽癌易感性之间的关系打下良好基础。

1 对象与方法

1.1 研究对象 以广西近年患病或发现的鼻咽癌患者为先证者;由先证者和其生物学父母构成核心家系，对照组为广西境内鼻咽癌高发区自然人群。

1.2 研究方法 由专门培训的调查员，使用统一的调查表，对每个核心家系进行保密的询问调查，主要内容包括个人基本情况、吸烟史、饮酒史、鼻咽癌病史、家族肿瘤史、个人史等。采集核心家系成员、对照组的静脉血，离心分离血清，－20℃保存，建立鼻咽癌核心家系样本库。采用酶联免疫方法检测血清EB-VCA-IgA抗体滴度。EB-VCA-IgA阳性标准为:VCA-IgA≥1∶5。

1.3 血液标本的存放和管理 每个鼻咽癌核心家系包括先证者、先证者父母3份血液样品，统一编号处理后集中存放于－20℃冰柜。研究人员对存放的鼻咽癌核心家系标本定期监测，记录入库时间、存放位置，定期送有条件的实验室进行后期研究。

1.4 统计学方法 血清学检测结果采用SPSS 13.0软件进行统计;调查资料采用EPIDATA软件录入，数据库构建采取ACCESS数据库。

2 结果

2.1 鼻咽癌核心家系标本库的初步建立 本数据库录入了254个鼻咽癌核心家系，有鼻咽癌先证者254例，其中有鼻咽癌家族史的鼻咽癌核心家系26个，占10.24%;新发现鼻咽癌3例，有1例家系先证者及父母都为鼻咽癌患者，1例家系先证者及母亲一方患有鼻咽癌。26个有鼻咽癌家族史的核心家系，其成员EB-VCA-IgA总阳性率为39.7%，先证者阳性率为84.6%，先证者父母为17.3%。数据库中还包含有鼻咽癌先证者烟酒史、临床分期及病理结果分型。

2.2 鼻咽癌核心家系数据库建立完成 本研究的核心家系数据库含有三个数据表:①先证者数据表，包含字段有先证者ID、姓名、职业、年龄、民族、籍贯、联系方式、病理分期、临床诊断等;②先证者父母亲数据表，包含字段有先证者ID、与先证者关系、姓名、职业、年龄、民族、籍贯、联系方式等;③随访结果数据表，包含字段有先证者ID、随访时间、随访次数、更新联系方式等。在数据表的基础上，含有数个检验单发布报表以及家系成员数据查询图，并含有一个数据录入界面用于后期录入数据。

2.3 EB-VCA-IgA总体情况比较 核心家系成员父母与自然人群对照组的EB-VCA-IgA总体情况比较见表1。254个鼻咽癌核心家系成员EB-VCA-IgA阳性率为40.3%，成员中先证者EB-VCA-IgA阳性率为88.2%，先证者父母为16.1%;自然人群对照组的阳性率为8.22%，先证者父母EB-VCA-IgA水平高于自然人群对照组，差异有显著性(P＜0.01)。核心家系成员中先证者父亲、母亲总的EB-VCA-IgA阳性率是自然人群的2.15倍。

表1 核心家系先证者父母及对照组的VCA-IgA情况比较 ［n(%)］

2.4 EB-VCA-IgA的具体情况比较 鼻咽癌核心家系先证者父亲、母亲分别与自然人群对照组的EB-VCA-IgA具体情况比较见表1。核心家系先证者父亲与对照组男性EB-VCA-IgA情况比较有显著性差异(P＜0.01);核心家系先证者母亲与对照组女性EB-VCA-IgA情况比较有显著性差异(P＜0.01);核心家系先证者父亲、母亲的EB-VCA-IgA阳性率分别是对照组男性、女性的2.26倍、2.00倍。

3 讨论

3.1 鼻咽癌家族的聚集现象 鼻咽癌是我国南方常见的恶性肿瘤。众所周知，EB病毒与鼻咽癌发病十分密切［2］，EB病毒抗体(VCA/IgA)阳性人群，其鼻咽癌发病率明显高于阴性人群［3］，调查表明广西鼻咽癌患者EB病毒感染率明显高于健康人群［4］。在本次研究中先证者父母的EB-VCAIgA阳性率明显高于正常对照人群，显示了鼻咽癌家族聚集现象确实存在。鼻咽癌患者及亲属EB病毒感染率明显高于健康人群，相似的生活环境、密切接触可能是此现象的基础。

3.2 建立鼻咽癌核心家系标本库存在的问题及解决方案

3.2.1 鼻咽癌数据库的建立经验 以往的基于鼻咽癌核心家系以及高发家系的研究不少，但是关于如何组织这些纷繁复杂的家系资料却未见报道。在本研究中，采集血液样品及调查人员按照统一的标准制定鼻咽癌核心家系调查表、鼻咽癌核心家系登记数据库及鼻咽癌核心家系样本库，在数据库中主要包含的一般信息(姓名、职业、年龄、民族、籍贯、联系方式等)为家系后期随访提供了先决条件;鼻咽癌核心家系样本库存储的血液样本都在核心家系数据库中有对应的详细资料，在数据库中可以通过先证者血液样本编号查询先证者临床治疗信息及联系方式，并进一步查询到先证者父母的一般信息。后期的开发还准备将家系图谱转变成数字编码存储进数据库，以完善鼻咽癌核心家系标本库的信息。

3.2.2 家系调查资料的安全性与保密性 鼻咽癌核心家系原始资料来源于区内各大医院，在调查取样的同时，应该满足被调查者的隐私需求，保证全程没有他人在场，完全由调查者独立完成，后期体检结果也由数据库系统打印，并且密封邮寄给被调查者。所获取的体检资料必须由有权限的人员来导出、存档，完全保障了人群资料的安全性、保密性。

3.2.3 鼻咽癌标本库建立的质量控制 保证标本库内样本资料的真实可靠，一定的质量控制必不可少。①鼻咽癌核心家系标本库的质量控制有别于其他的调查，首先必须要统一对调查员进行培训，以提高调查员工作调查结果的真实性，调查人员必须熟知血样保存、数据库录入以及临床诊断。②标本库的样本存放有着严格统一的标准，所以必须制定实验室标准及规范，提高实验检测人员的业务能力及熟练程度，以减少人为溶血等技术失误问题。③对象的选择必须符合纳入排除标准，以保证样本质量。④登记表格现场录入，现场核查，及时修改、补充，分析资料再经“双人双录入核查”、逻辑纠错等控制数据质量。⑤根据广西壮族自治区壮族居民较多的特点，调查取样人员需要知道一定的地方方言，以减少与研究对象因语言障碍而带来的信息偏移。⑥征得每位先证者的知情同意，并使患者充分认识到研究对其个人信息及隐私的绝对保护，以获得研究对象最大程度的配合。

3.3 鼻咽癌核心家系标本库建立的前景与展望 标本库构建完成之后，血液样本可以提供分子遗传学筛选鼻咽癌易感位点。自上个世纪30年代以来，人们逐渐意识到癌症是一种遗传性疾病［5］。近期我们对PTEN基因发点多态性与鼻咽癌的易感性进行了关联性研究［6］在一个鼻咽癌家系COX7B2基因中共发现5个新的SNP位点。因此，本研究建立的鼻咽癌核心家系标本库，通过后期采用PCR-直接测序法筛选基因，为鼻咽癌基于基因的病因学研究提供了基础。如果后期研究需要对核心家系成员进行随访及资料调查，一个规范的数据库给了实验室研究人员非常大的便利。本研究证实了血液样本库对肿瘤病因学研究的重要性，其数据库开发、质量控制、标本储藏、取样随访经验为后期针对大量鼻咽癌高危人群建立血液标本库提供了难得的经验。

综上所述，本研究建立了一个可供后期鼻咽癌分子病因学研究所需要的血液标本库，并建立完善了血液标本相关的资料数据库，在收集资料的同时我们发现核心家系先证者父母EB-VCA-IgA抗体阳性率显著高于正常对照组人群。

［1］ 赵平主编，孔灵芝.鼻咽癌［M］.中国肿瘤死亡报告－全国第三次死因调查回顾取样调查.北京:人民卫生出版社，2010:170－187.

［2］ 秦 岭，李 龄.鼻咽癌遗传易感性的分子水平研究进展［J］.医学文选，2002，21(1):82－84.

［3］ 曾 希，王承龙.鼻咽癌血清EB病毒IgA检测的临床分析［J］.中国现代医学杂志，2010，20(6):879－881.

［4］ Lo KW，To KF，Huang DP.Focus on nasopharyngeal carcinoma［J］.Cancer Cell，2004，(5):423－428.

［5］ 薛开先.癌变的体细胞突变理论回顾与挑战［J］.癌变畸变突变，2007，19(1):1－3.

［6］ 张小爱，周钢桥，崔 英，等.PTEN基因多态性的相关性研究［J］.解放军医学杂志，2008，33(8):943－946.