宫颈鳞癌组织中MMP-2、MMP-9的表达变化及意义

刘丽利,南云泽,林贞花,金仁顺

(1扬州市妇幼保健院,江苏扬州 225002;2延边大学附属医院;3延边大学医学院)

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,浸润和转移是宫颈癌患者晚期主要死亡原因之一。近年研究表明,肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用,在肿瘤浸润、转移中至关重要。肿瘤细胞的浸润与转移发生在基底膜降解的基础上,在降解过程中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9起着非常重要的作用[1,2],然而它们与宫颈癌的关系报道并不一致。2001年 7月 ～2009年 7月,我们应用免疫组化技术检测了MMP-2、MMP-9在宫颈鳞癌组织中的表达情况,并探讨其与宫颈癌生物学行为的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料 标本来自于延边大学附属医院妇产科住院手术切除的组织,其中宫颈鳞癌 46例(A组),患者年龄22～59岁,中位年龄42.5岁;FIGO (2000年)[3]分期Ⅰ期 35例,Ⅱ期 11例;病理类型为角化型 16例,非角化型 30例;有淋巴结转移 19例,无转移27例。宫颈原位癌34例(B组),患者年龄 25～64岁,中位年龄 39.5岁。另选取 20例同期因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈标本作为对照(C组),患者年龄 25～64岁,中位年龄 41岁。全部病例在术前均未接受放疗、化疗。

1.2 MMP-2、MMP-9检测方法 所有标本均经10%甲醛固定,常规石蜡包埋,作 4μm厚连续切片。采用免疫组织化学SP法检测,严格按试剂盒说明书进行,DAB显色,苏木素复染,封片后用光学显微镜观察。同时设置阴性对照(用PBS代替一抗),阳性对照用已知阳性切片。结果判定：MMP-2、MMP-9蛋白阳性细胞为细胞质内呈棕黄色颗粒样物质。用低倍和高倍镜观察全片,按阳性细胞所占百分比及着色程度进行结果判定[4]。按阳性细胞比例判定：阳性细胞≤10%1分,10%～50%2分,＞50%3分;按染色程度判定：阴性为 0分,淡黄色1分,中度黄色 2分,棕黄色 3分。两项相乘 ＜3为阴性,≥3为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。组间比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman等级相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组MMP-2、MMP-9表达比较 A、B、C组MMP-2阳性率分别为78.3%(36/46)、50.0%(17/ 34)、25.0%(5/20),A组与B、C组比较,P均 ＜0.01;B、C组间比较,P＞0.05。A、B、C组MMP-9阳性率分别为71.7%(33/46)、70.6%(24/34)、25.0%(5/20),A、B组与C组比较,P均＜0.01; A、B组间比较,P＞0.05。

2.2 MMP-2、MMP-9表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系 见表1。MMP-2、MMP-9蛋白表达与宫颈鳞癌淋巴结转移有关(P均＜0.05)。

2.3 宫颈鳞癌组织中MMP-2、MMP-9表达的关系Spearman等级相关分析结果显示,MMP-2和MMP-9在宫颈鳞癌中的表达呈正相关(rs=0.372,P＜0.05)

表1 MMP-2、M MP-9表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系

3 讨论

MMP-2和MMP-9可降解Ⅳ型胶原和其他细胞外基质成分,促进恶性肿瘤侵袭和转移。研究表明,多种恶性肿瘤MMP-2和(或)MMP-9表达增加,活性增强,并且其表达量及活性强弱与恶性肿瘤的侵袭能力密切相关。有关宫颈癌组织MMP-2和MMP-9表达状态的报道并不完全一致。Arguello-Ramirez等[5]将慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ和宫颈鳞癌组织在体外培养 48 h后,前三者总计分泌到培养介质中的MMP-2前体和活化的MMP-2分别为190.5 DU和13.5 DU,其中,活化的MMP-2与宫颈癌组织分泌量(6.0 DU)无明显区别,而MMP-2前体分泌量明显高于宫颈癌组织分泌量(18 DU)。宫颈癌组织分泌的MMP-9,无论是活化的,还是非活化的均明显高于慢性宫颈炎和CIN,故认为在宫颈癌演进过程中MMP-2作用可能并不重要。Giraudo等[6]用RT-PCR检测发现,CINⅢ和鳞癌组织中MMP-9的表达较CINⅠ/Ⅱ组织中显著升高,且发现MMP-9与血管内皮生长因子(VEGF)活性相关,提示MMP-9与肿瘤血管生成有关。

本研究发现,在正常宫颈上皮、原位癌和宫颈鳞癌的组织中MMP-2、MMP-9的阳性表达率依次增高,且差异有显著性,提示MMP-2、MMP-9蛋白表达可能与宫颈癌的发展过程有关。MMP-9多呈弥散性分布,而MMP-2则多为局灶性分布,尤其在癌巢边缘表达较强,提示其对周围基质成分的降解能力增加;同时检测MMP-9在原位癌及宫颈鳞癌表达均上升,但无统计学差异。可推测MMP-9在原位癌中的表达上调在宫颈鳞癌的形成过程中是关键事件,原位癌在细胞形态和表现非正常蛋白上与浸润性肿瘤相似,MMP-2和MMP-9的表达与宫颈癌的侵袭性行为密不可分。

宫颈鳞癌的转移方式主要是淋巴转移,临床上也是以有无淋巴结的转移来判断预后和指导临床治疗。何金英等[7～12]研究认为,宫颈鳞癌中 MMP-9的表达与病理分级、盆腔淋巴结转移有关,而与临床分期、病理类型无关。本研究结果表明,MMP-2、MMP-9在淋巴结转移阳性组较阴性组的阳性表达率高,差异有统计学意义,可推测MMP-2、MMP-9在宫颈鳞癌的淋巴结转移中起促进作用。本研究发现MMP-2和MMP-9呈正相关,提示二者协同作用加强了宫颈癌细胞的浸润和转移能力。

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