HPLC法测定银星养脑片中阿魏酸的含量

2011-02-10孔娟

中国现代药物应用 2011年21期

孔娟

银星养脑片是由我院多年使用证明临床疗效确切的验方。主要用于中风、心痛的治疗及预防。方中银杏叶为君药，具活血止痛的功效。川芎、太子参、熟地为臣药，起到增强银杏叶功效的作用。我们采用HPLC法对川芎中的有效成分阿魏酸进行含量测定，作为银星养脑片的含量检测指标。[1]

1 仪器与试药

1.1 仪器设备安捷伦高效液相色谱仪及色谱工作站，UV检测器，Kromasil C18柱，精密分析天平，UV光度计，自动控温电加热水浴锅。

1.2 试药试剂色谱级甲醇，自制蒸馏水，冰醋酸等试剂为AR级;阿魏酸对照品;银星养脑片(本院自制:批号:(100628、100820、101101、110107、110203、110309)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasil C18柱(4.6 m/n×250 mm，5μm)，流动相1%冰醋酸-甲醇(70∶30)，流速1 ml/min，检测波长321 nm，进样量10μl，理论塔板数以阿魏酸计大于4000，分离度大于2。

2.2 制备供试品溶液将5粒银星养脑片捣碎，精密称定碎片约1.5 g，加入适量硅藻土混合研细，将细粉置于带塞的锥形瓶中，精密加入70%的甲醇溶液50 ml，加塞，称定重量，于水浴上加热回流30 min，放冷至室温再称重，加入70%甲醇溶液补足至原重量，摇匀，静置10 min后，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品。

2.3 制备对照品溶液取阿魏酸对照品约3 mg，精密称定，置于25 ml棕色量瓶中，加约20 ml70%的甲醇溶液超声助溶10 min后，加70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照品储备液，分别取储备液 1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml加入到10 ml棕色容量瓶中，用70%甲醇溶液稀释至10 ml，即成阿魏酸含量为 12.2、24.4、48.8、73.2、97.6 μg/ml的系列对照品溶液。

2.4 线性关系考察分别吸取上述对照品溶液各10.0μl，按确定的色谱条件测定各对照液中阿魏酸的峰面积值。计算回归方程为:Y=2512.3X+27.380，r=0.9998，说明阿魏酸含量在12.2～97.6μg/ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度考察同一供试品溶液连续进样5次，每次10.0μl，对其所得 5次峰面积进行精密度计算，RSD为0.98%。

2.6 稳定性考察同一样品液分别于0 h，1 h，2 h，4 h，6 h，8 h进样测定，每次10.0μl，对其所得6次峰面积进行精密度计算，RSD为2.24%，表明样品中的阿魏酸在8 h内稳定。

2.7 重复性试验取同一批号的银星养脑片25粒，研磨后，按照对角分样原则分成5份，将每一份样品按照供试品溶液制备方法制备样品液，并进行含量测定，根据线性关系计算含量，样品中阿魏酸的平均含量为1.1 mg/片，RSD为1.48%。

2.8 回收率试验分别精密称取5份含量已知的银星养脑片，每份约1.0 g，将其按照样品溶液制备方法进行制备后，分别加入到5份相同浓度的阿魏酸对照品溶液(0.122 mg/ml)中，按照含量测定项下的方法测定含量，同时计算回收率。结果测得的阿魏酸的平均回收率为98.12%，RSD=0.76%。

2.9 样品测定取6个批号的银星养脑片，按照供试品溶液的制备方法制备样品液，分别量取对照品溶液与供试品溶液各 10.0 μl，进样检测含量。批号:(100628、100820、101101、110107、110203、110309)，含量:0.13、0.14、0.13、0.14、0.13、0.12。