CB和CD在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

蔡东阁 陈茜 方晓荷

组织蛋白酶是近年来发现的与恶性肿瘤侵袭和转移有关的蛋白水解酶, 能够直接降解或激活纤溶酶原激活剂及其它酶类而间接降解细胞外基质成分，其活性高低可作为某些恶性肿瘤的预后指标[1]。本课题通过分析CB与CD在人类上皮性卵巢癌中的表达情况，探讨两者与上皮性卵巢癌恶性生物学行为的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

共收集2002年～2006年上皮性卵巢癌患者32例（浆液性囊腺癌20例，黏液性囊腺癌12例）作为研究对象，年龄21～72岁，术前均无化疗、放疗、免疫治疗史及毒物、放射线、烟酒等危险因素接触史，无传染性肝炎、自身免疫性疾病史等其它合并症。选择同期接受手术治疗的良性卵巢上皮性肿瘤9例（浆液性囊腺瘤5例，黏液性囊腺瘤4例）。并取同期手术中因其他良性疾病而切除的正常卵巢组织13例作为对照组，患者年龄19～73岁。

1.2 免疫组化染色方法及结果判定

表1 CB、CD表达与卵巢癌临床病理特征间的关系

兔抗人组织蛋白酶B单克隆抗体浓缩液，工作浓度1：200，购自武汉博士德生物工程有限公司。兔抗人组织蛋白酶D单克隆抗体浓缩液，工作浓度1：200，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

CB着色评估：CB阳性表达于卵巢上皮细胞，呈弥漫分布的棕黄色颗粒定位于细胞质或位于核周。综合染色强度和阳性细胞占总体细胞数的百分比进行半定量分析[2]。基本不着色0分,着色淡1分,着色适中2分,着色深3分；着色细胞占计数细胞的百分率≤5％为0分，6％～25％为1分，26％～50％为2分，≥51％为3分。将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘为其最后得分，总分≥3分者为CB阳性表达；总分＜3分者为CB阴性表达。CD为细胞浆和细胞膜染色，阳性判断标准为：凡细胞胞浆内出现棕色颗粒为阳性，双盲法随机选5个高倍视野计算阳性细胞数，阳性细胞＞75％为（+++），评3分，＞50％为（++），评2分，＞25％为（+），评1分，＜25％为（-）分，评0分。将0分和1分判断为阴性表达，2分和3分判断为阳性表达。用已知染色阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照。

1.3 统计学处理

SPSS11.5软件分析，采用x2检验和Fisher 精确检验法。P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CB及CD在正常卵巢组织及上皮性卵巢癌中的表达情况CB及CD染色阳性细胞分布于胞浆（图1），两者表达在卵巢癌组织中较正常卵巢组织中高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 CB、CD的表达与上皮性卵巢癌临床病理参数的关系，见表1。

CB、CD表达与患者年龄、病理学类型无明显关系（P＞0.05），在临床分期晚、体内有腹水或发生转移病例中其表达增高，其间有统计学差异（P＜0.05）。组织学分化程度越低，CB与CD表达增高，有统计学差异（P＜0.05）。

图1. CB及CD在上皮性卵巢癌中的表达A ：The expression of CB in serous cystadenocarcinom a（10×10倍）B：The expression of CD in serous cystadenocarcinoma（10×20倍）

3 讨论

浸润、转移是许多恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因。肿瘤细胞通过组织屏障和进入血液及淋巴管的机制并不完全清楚。已有研究表明，肿瘤细胞的浸润与转移发生在基底膜降解的基础上，穿过基底膜侵犯周围组织，进入循环系统[3]。组织蛋白酶通常是指一类裂解肽键的蛋白水解酶，具有广谱的蛋白水解活性，在肿瘤的浸润和转移过程中发挥了重要的作用。

CB广泛存在于哺乳动物的各种组织中，与多种人类肿瘤的发生发展关系密切[4-5]。肿瘤细胞可分泌CB，并能够激活酶原形成活性CB，在多种人类和动物的肿瘤中如宫颈癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等都发现CB表达水平和（或）活性高于邻近正常组织[6-8]。另有研究证实，下调或沉默CB在恶性肿瘤细胞中的表达,肿瘤细胞的侵袭能力则大大减弱[9]。CD以天冬氨酰蛋白酶原的前体形式广泛存在于人体细胞的溶酶体内,通过水解形成有催化活性的蛋白，在乳腺癌、肝癌、大肠癌患者中研究较多,并认为其与以上肿瘤的转移和预后有关,是较好的预后指标[10]。

本研究结果显示，CB和CD在正常卵巢中不表达，而在上皮性卵巢癌中呈高表达，提示CB和CD参与了上皮性卵巢癌的发生发展过程。本研究还表明，两者在卵巢癌组织中临床分期越高、组织学分化程度越低其表达越强，在发生转移及产生腹水组织中其表达程度亦增强，提示CB和CD参与了卵巢癌的侵袭、转移过程。已有证据表明CB和CD可能通过降解细胞外基质蛋白,促进肿瘤新生血管的形成等参与了恶性肿瘤的侵袭和转移过程[11]。CD除能直接降解ECM外,还可通过激活CB进一步降解ECM,促进肿瘤侵袭和转移。

综上所述，CB和CD 或许可作为上皮性卵巢癌的标志物，帮助预测肿瘤的浸润、转移情况及患者的预后。且可针对其在上皮性卵巢癌中的作用特点，寻找其相应的选择性、可逆性抑制剂用于临床疾病的治疗,也是值得人们进一步探索的热点。

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