血管外膜炎症大鼠核转录因子NF-κB、白介素-6、白介素-10的表达及通心络的干预研究

2011-01-30鲁叶弘曾定尹

中国医药导报 2011年16期

鲁叶弘，付强，曾定尹

中国医科大学附属第一临床学院心内科，辽宁沈阳 110001

近来，大多数学者肯定动脉粥样硬化（AS）的炎症学说[1]，在该过程中血管外膜的作用日益受到重视，并逐渐被深入研究。故本研究采用硅胶管包裹大鼠颈动脉诱导血管外膜炎症致动脉粥样硬化样改变的动物模型，观察各组大鼠颈动脉血管信号转录因子活化和循环血细胞因子表达情况。中医传统通络方药通心络超微粉剂具有化瘀通络和搜风解痉之功效，本研究通过其抑制IL-6、IL-10的表达及其抑制核转录因子NF-κB活化，进一步证实其抑制动脉粥样硬化的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

由石家庄以岭药业公司提供通心络超微粉；大鼠IL-6、IL-10 ELISA检测试剂盒购于美国R&D公司；大鼠NF-κB P65免疫组化试剂盒购于美国ZYMED公司。

1.2 动物及分组

健康Wistar大鼠30只，购于中国医科大学实验动物部。造模成功喂养1周后随随机选取20只随机分为两组：①外膜组，10 只，给予生理盐水 400 mg/（kg·d）灌胃，1 周；②通心络组，10 只，给予通心络超微粉 400 mg/（kg·d）灌胃，1 周。

1.3 方法

1.3.1 动物模型制作：用10%水合氯醛液，按照30 mg/kg体重腹腔注射麻醉大鼠后，术区碘伏消毒。切开颈前正中线皮肤，钝性分离出左颈总动脉，用硅胶管（内径1.0 mm、长10 mm纵向剖开后）包裹左颈总动脉，创口缝合，术后给予适量青霉素注射5 d，预防感染，饲养1周。

1.3.2 1 周后用水合氯醛液腹腔注射麻醉动物后，处死动物，处死前从左心室采血10 ml，取血清备检。留取包裹硅胶管处的血管段检测核转录因子NF-κB的表达。

1.3.3测定血清IL-6，IL-10水平：采用酶联免疫吸附法测定，严格按说明书操作。

1.3.4 包管段切片核转录因子NF-κB p65的表达：采用免疫组化法进行测定。一抗为核因子-κB p65（1∶250） PBS 缓冲液代替一抗作为空白对照，根据ABC法试剂盒进行操作，DAB显色。400倍显微镜下观察，阳性表达呈棕黄色。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；等级资料组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验进行分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 白介素-6、白介素-10（ng/L）的表达

见表1。

表1 术后1周各组白介素-6、白介素-10的表达（±s,ng/L,n=10）

注：与外膜组比较，▲P＜0.01

外膜组TXL组组别 IL-6 147.40±4.65 143.85±2.66▲IL-10 44.78±1.27 42.35±2.31▲

2.2 通心络对炎症病变血管外膜核转录因子NF-κB表达的比较

见表2。

表2 术后1周各组核转录因子NF-κB在各组中的表达比较（例）

镜下可见：NF-κB p65活化后进入核内，呈棕黄色颗粒，胞核几乎无染色。外膜组血管壁细胞较多棕黄色细胞核（图1A）；通心络组只见极少的棕黄色细胞核（图1B），同外膜组比较明显减少，差异有统计学意义（U=2.88,P＜0.005）。结果判断标准采用半定量积分分析法。

3 讨论

NF-κB是目前发现的最为重要的核转录因子之一，NF-κB的活化在炎症反应中起关键作用。严重创伤后，通过自分泌或旁分泌等途径产生的IL-6等因子严重影响伤后组织器官的修复[2-3]，而产生的中心环节是NF-κB的活化[4]。IL-6在炎症反应中起核心调节作用，是参与机体各种调节的重要细胞因子。由于单一抑炎因子IL-10能抑制多数促炎因子，所以在AS进展中受极大关注。无论是促炎因子IL-6，还是抑炎因子IL-10的活化表达均与核转录因子NF-κB的活化密不可分的。通心络主要有人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、蝉蜕、土鳖虫、赤芍和冰片等成分，对血管病均具有明显的药理作用，而合剂有协同增强作用。本实验观察到外膜组血管壁NF-κB p65和血清中炎症细胞表达明显增多，给予通心络治疗后均可使其表达明显减少，且观察到通心络可使IL-10的表达减少，可能部分与阻断NF-κB信号通路诱导IL-10抗炎基因的表达有关。实验证明，通心络通过稳定易损斑块，降低斑块内脂质含量及炎症因子斑块局部的表达而发挥作用[5]。本研究结果显示，通心络具有阻断炎症反应减轻AS病变的作用，但其机制还有待进一步研究。