Galectin-3在胎膜早破孕妇胎膜中的表达及意义

荣卫灵 ，王 南

1.湖南省东安县人民医院妇产科，湖南东安 425900；2.中南大学湘雅三医院，湖南长沙 410100

胎膜早破（premature rupture of fetal membranes，PROM）是临产前胎膜发生破裂，分为足月前胎膜早破（preterm premature rupture of fetal membranes，PPROM）和足月胎膜早破（term premature rupture of membranes，TPROM）。在所有妊娠中PROM发生率为2.0%～3.5%，早产合并PROM占30%～40%，但其发病原因尚不完全明了[1]。宫内感染（IAI）是其发病的最主要原因，占PPROM孕妇的25%～39%[2]。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族成员之一，广泛分布于多种组织，在调节细胞增殖、黏附、凋亡方面起重要作用，并参与免疫调节[3]。Galectin-3在生殖领域的研究已逐渐被人们重视，但对于Galectin-3在绒毛膜羊膜炎及PROM中所发挥的作用尚无报道。本研究通过检测Galectin-3在正常分娩孕妇胎膜及PROM孕妇胎膜中的表达及其变化，探讨Galectin-3在PROM中所发挥的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

胎膜早破组：选取湖南省东安县人民医院妇产科2009年1月～2010年6月住院分娩的胎膜早破组50例，平均年龄（27.8.±3.1）岁；孕周 31+4～36+6周；其中，足月胎膜早破 26例（足月胎膜早破组），足月前胎膜早破24例（足月前胎膜早破组）。经产后病理学检测分为绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组。对照组：选择同期在湖南省东安县人民医院住院因社会因素剖宫产分娩的非胎膜早破的孕妇30例作为对照组，平均年龄（25.7±2.9）岁，孕 37～41 周。 所有病例均为初产妇，单胎，无内外科合并症及产科并发症，近期无外伤和性交等诱因，年龄及孕次差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 诊断标准

1.2.1 胎膜早破诊断标准[4]主诉阴道流液，pH试纸碱性变色，对可疑病例消毒后放窥阴器检查见后穹隆有液体或手触见宫颈口有羊水流出。

1.2.2 组织学绒毛膜羊膜炎[5]绒毛膜板及羊膜上白细胞呈弥散性聚集，白细胞浸润呈极性分布，中性粒细胞浸润每高倍视野5～10个为轻度，11～30个为中度，＞30个为重度。

1.3 标本收集及处理

所有产妇在胎盘胎膜娩出后立即直视下剪取距胎膜破口＞2 cm处的全层胎膜组织2块，大小1 cm×1 cm，生理盐水清洗表面羊水和血迹，固定于10%福尔马林中，石蜡包埋，切片备用。

1.4 免疫组化

兔抗人Galectin-3多克隆抗体、免疫组化染色试剂盒SP-9000购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡切片脱蜡，蒸馏水冲洗3次，3%H2O2覆盖10 min，灭活内源性过氧化物酶，PBS漂洗5 min×3次，用枸橼酸钠进行抗原修复20 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加10%正常山羊血清孵育30 min，封闭非特异性抗原，滴加兔抗人 Galectin-3抗体（1∶50）37℃孵育2 h，PBS漂洗5 min×3次。滴加羊抗兔二抗37℃孵育15 min，滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃孵育15 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加DAB显色剂显色，应用苏木素复染2 min，冲洗，封片。显微镜下观察，照相。

1.5 结果判断标准

观察阳性反应采用双盲法，行半定量分析[6]。以光镜下细胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性。按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；按阳性细胞所占百分比评分：阴性为0分，阳性细胞数≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为 4分。 染色强度与阳性百分比的乘积＞3为免疫反应阳性。并按乘积分数分为 4 个等级：-（0，1，2 分）；+（3，4 分）；++（6，8 分）；+++（9，12分），根据两位有经验的病理科医师双盲计数统计，将“-”、“+”判定为阴性，将“++”、“+++”判定为阳性。

1.6 统计学方法

实验结果均应用统计软件SPSS 16.0处理，进行χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Galectin-3的表达情况

Galectin-3蛋白的阳性表达主要集中在绒毛膜滋养层胞质及胞核中，以胞浆为主，呈棕色或黄色，在羊膜层和蜕膜层亦有少量表达，其在胎膜早破组表达明显增强（图1～2）。

在胎膜早破组与对照组比较，Galectin-3的表达差异有统计学意义（P＜0.05）；Galectin-3在足月前胎膜早破组与足月胎膜早破组均有表达，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 Galectin-3表达与绒毛膜羊膜炎的关系

产后对全体孕妇行胎膜病理检查，其中重度绒毛膜羊膜炎者16例，占20.0%，中度绒毛膜羊膜炎者14例，占17.5%，中重度绒毛膜羊膜炎患者均见于胎膜早破组；轻度绒毛膜羊膜炎者13例，占16.3%，其中胎膜早破组 11例（13.8%），对照组仅有2例（2.5%）。见表2。

与非绒毛膜羊膜炎组比较，Galectin-3在绒毛膜羊膜炎组绒毛膜滋养层、羊膜层和蜕膜层的表达明显增加（图3～4）。同时，随着绒毛膜羊膜炎的病理分级不同，Galectin-3的表达的阳性率也不同，且随着病理炎症程度的增加，其表达的阳性率也增加。见表3。

表1 各组Galectin-3的表达情况

表2 两组病理检查结果比较（例）

3 讨论

胎膜早破的发病机制至今尚未完全明确，一般认为是多因素造成的[7-8]，但在胎膜早破中胎膜局部最基本的病理变化是炎症和胎膜本身结构改变，炎性反应在胎膜早破发生中的作用越来越受到重视。

Galectin-3是一种β-半乳糖结合蛋白，主要存在于细胞质中，但也可以在细胞核、细胞表面或者细胞外，其功能具有多样性[9]。现已证实Galectin-3参与许多生理和病理过程，包括细胞生长、细胞黏附、炎症反应、免疫调节、肿瘤转化转移及细胞凋亡。近来的研究表明其在急性炎症反应及固有性免疫的调节中作为一种细胞因子发挥着重要的作用[10-11]。

表3 Galectin-3的表达与绒毛膜羊膜炎的关系

本实验采用免疫组化的方法检测胎膜早破组和对照组胎膜中Galectin-3的表达情况，结果表明Galectin-3在PROM组胎膜中的表达明显高于对照组。且Galectin-3的表达与绒毛膜羊膜炎有关，炎症程度越高，Galectin-3的表达阳性率越高，表明PROM与绒毛膜羊膜炎密切相关。

多项研究表明PROM与感染有关[12]，而Galectin-3正是在免疫调节、炎性反应中发挥了重要作用。Galectin-3被认为是一种促炎因子，在炎症的急性期，Galectin-3可能发挥着减弱细胞间黏附、促坏死细胞脱落的作用；而到炎症晚期，Galectin-3高表达时，它将促进细胞间细胞-基质间黏附。在炎症反应中，Galectin-3主要在两个方面扮演了重要的角色：①存在于细胞质和细胞核的Galectin-3呈现强大的促炎作用，促进炎性细胞活化，抑制免疫细胞凋亡，促进炎症反应[13]。②在细胞核高表达的Galectin-3促进细胞增殖，加速细胞的损伤修复[14]。

目前国内外尚无有关Galectin-3表达与PROM相关的报道，但笔者通过本实验证实Galectin-3的阳性表达与PROM存在一定的相关性，且Galectin-3的阳性表达率随PROM患者绒毛膜羊膜炎炎症程度的增加而增加。我们推测PROM患者胎膜中Galectin-3表达增加与白介素、IFN-γ释放相关，且Galectin-3表达的增加促进了细胞间细胞-基质间的黏附，促进基质金属蛋白酶的合成，从而降解细胞外基质，使胎膜变薄，导致胎膜破裂的发生。

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