清化消瘀方对糖尿病合并动脉粥样硬化患者糖基化过程影响的研究

邓 鸣，张炜宁，蔡智刚，唐新征

湖南中医药大学附属深圳市福田中医院内一科，广东深圳 518034

随着社会人口老龄化及生活方式的改变，糖尿病作为一种常见的慢性病，患病率逐年上升趋势，动脉粥样硬化是糖尿病患者中最多见的并发症。因此，对于糖尿病合并动脉粥样硬化防治的研究有着非常现实的意义。清化消瘀方是我院多年来临床长期运用于治疗糖尿病的复方中药制剂，前期临床研究报道该药能明显降低糖尿病患者血糖，调整脂代谢紊乱，改善临床症状，是治疗该类疾病的有效中药制剂[1]。本实验观察清化消瘀方对2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者糖基化过程的影响，以探讨该复方制剂的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 病例来源

全部病例来自深圳市福田区中医院内科住院病房及门急诊2009年7月～2011年3月间的患者60例，并取30例健康人为正常组，其中，男15例，女15例；年龄75.1岁。患者按住院门诊号采用随机排列表法分组，将60例分为治疗组、对照组，其中治疗组30例中，男18例，女12例；年龄74.7岁；病程6.7年；均为2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者。对照组30例中，男17例，女13例；年龄75.3岁；病程6.4年；均为2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者。两组患者一般临床资料经统计学处理差异无统计学意义，具有可比性。

1.1.2 诊断与排除标准

1.1.2.1 诊断标准

糖尿病诊断标准 （参照2010年ADA专家咨询报告）：①糖化血红蛋白（HbA1c）≥6.5%。②空腹血糖（FPG）≥7.0mmol/L，空腹定义为至少8 h内无热量摄入。③口服糖耐量试验时2 h血糖≥11.1 mmol/L。④伴有典型的高血糖或高血糖危象症状患者随机血糖≥11.1 mmol/L。在无明确高血糖时，应通过重复检测来证实标准①～③。

动脉粥样硬化诊断标准：当动脉内膜-中膜厚度（IMT）＞1.2 mm即可诊断为动脉粥样硬化斑块形成。

1.1.2.2 排除标准

①年龄在60岁以下或90岁以上。②不符合西医诊断标准者。③动脉超声显示管腔内斑块导致严重血流阻塞或完全无斑块形成者。④合并严重心脑血管、肺、肝、肾等原发疾病及动脉粥样硬化已行手术治疗者。⑤有出血倾向者。⑥过敏体质及对药物过敏者。⑦肿瘤、感染性疾病、结缔组织疾病以及其他自身免疫性疾病患者。⑧近1个月内有糖尿病酮症酸中毒等急性代谢紊乱以及合并感染者。⑨近1个月服用过抗氧化剂者。

1.2 方法

对照组：西药常规治疗，西药只使用降糖药物（磺脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂任选一种单独运用）及降血脂药物（他汀类、苯氧丁酯类，依照TC、TG升高程度不同选用一种单独运用）。治疗组：清化消瘀方（黄芪20 g、党参15 g、山楂 10 g、黄芩 10 g、马齿苋 15 g、虎杖 10 g、生何首乌 15 g、泽泻 10 g、青蒿 10 g、酒制大黄 5 g、丹参 8 g、白术 10 g）每日1剂，水煎，分2次服用，加西药常规治疗（具体方法同对照组）。30 d为1个疗程。

1.3 观察指标

1.3.1 AGEs：清晨空腹采取静脉血，及时分离血清置于-70℃冻存，集中测定AGEs，AGEs测定应用竞争性ELISA法。该法的原理为将纯化的AGEs与小牛血清白蛋白结合成AGEBSA，用以包被酶标板，又以AGE-RNase为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。测定时将血清加人酶标板内，与AGE-BSA竞争地结合限量的抗体（抗AGE-RNase）。洗板后，加入碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG，洗板后加底物对硝基酚磷酸盐，此底物经磷酸酶水解而使对硝基酚游离，用美国RDIMDDEI-3350型酶标仪于405irm测光密度值（OD），用一系列标准物（AGE-BAS）制成标准线。OD值与标本中的AGE含量呈负相关。

1.3.2 血清hs-CRP、IL-6、TNF-α测定：清晨空腹采取静脉血，3 000 r／min 离心 10 min，分离血清，-70℃保存，采用 EIISA法测定血清含量。试剂盒购自深圳晶美公司。试验严格按试剂盒说明操作。

1.4 统计学方法

应用SPSS 11.5医用统计软件包进行数据资料的统计学处理，结果以均数±标准差（±s）表示；采用ANOAV方差分析并行方差齐性检验，方差齐采用配对t检验，否则采用秩和t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

两组治疗前后各指标测定见表1。

表1 两组治疗前后各指标测定（ ±s）

表1 两组治疗前后各指标测定（ ±s）

注：组内治疗前后比较，﹠P＜0.05；与正常组比较，﹟P＞0.05，△P＜0.05；与对照组治疗后比较，※P＜0.05

组别 n 30 30 30 AGEs （U/ml）治疗前 治疗后hs-CRP（mg/L）治疗前 治疗后IL-6 （mg/L）治疗前 治疗后TNF-α（μg/L）治疗前 治疗后正常组对照组治疗组33.50±7.37 65.92±11.40△64.46±12.10△----63.64±12.20△37.30±5.75﹟﹠※0.76±1.02 5.59±6.32△5.47±5.96△4.68±6.93△1.24±0.57﹟﹠※2.22±0.51 2.65±0.62△2.53±0.57△2.25±0.73△2.19±0.63﹟﹠※1.84±0.26 2.27±0.71△2.31±0.67△2.04±0.84△1.96±0.42﹟﹠※

3 讨论

糖尿病是一种常见的、严重威胁人类健康的慢性代谢性疾病。据WHO尚未完全估计2002年全球糖尿病总人口为17 000万，预期到2030年这个数字将达到36 600万。在糖尿病患者中，动脉粥样硬化性疾病引起的死亡占糖尿病总死亡率的80%，动脉粥样硬化是糖尿病最多见的并发症，也是导致大血管并发症如冠心病等的主要原因，糖尿病患者动脉粥样硬化的风险是非糖尿病的2～6倍，因此，对于糖尿病合并动脉粥样硬化防治的研究有着非常现实的意义。

目前研究表明，糖尿病患者持续高血糖引起机体多种蛋白质非酶糖基化及由此形成的晚期糖基化终产物（advanced glycation end products，AGEs）在糖尿病动脉粥样硬化的发病机制中起重要作用。持续高血糖可引起循环蛋白发生非酶糖基化反应，高血糖的葡萄糖分子在非酶促条件下通过Schiff碱基反应，经一系列的脱水、浓缩、裂解、氧化、环化反应，形成一种复杂稳定的分子结构，即AGEs[2]。AGEs的形成是导致糖尿病性动脉粥样硬化的主要环境因素。AGEs可直接捕获蛋白质，引起蛋白质之间发生交联，影响其结构和功能；AGEs发挥作用的另一途径是通过与细胞表面受体结合发挥作用，后者是AGEs发挥生物学作用的主要和关键途径。AGEs与RAGE结合后，一方面用来降解AGEs，另一方可以激活信号转导通路，诱导氧化应激，调控黏附分子、组织因子及炎症因子的表达[3-4]，转录因子、血管细胞黏附分子的产生，血管细胞黏附分子介导的细胞黏附启动了炎症细胞进入内膜下过程[5]，介导动脉硬化事件的启动。可溶性的AGE与ARGE结合能够对单核细胞产生趋化作用。单核巨噬细胞与AGE的相互作用还会导致一些炎性介质如IL-6、TNF-α和趋化因子的产生，它们在粥样硬化的发病机制中起着重要的作用，以上因素交互作用促使动脉粥样硬化发生发展。正常人体内AGEs水平随年龄增长而缓慢增加，而糖尿病机体内长期高血糖状态，可导致糖基化反应及AGEs生成加速。已有研究表明，AGEs是糖尿病动脉在粥样硬化的关键调节因素，活体内给予外源性AGEs能促进动脉粥样硬化，动物模型中AGEs的化学降解或者抑制AGEs的生成可以减少糖尿病动脉粥样硬化病变[6-7]。传统医学中糖尿病动脉粥样硬化属于消渴病合并脉络嘓范畴，消渴病阴虚燥热为本，痰湿瘀血为标，日久痰火凝聚，结于血脉是动脉粥样硬化的关键病机，因痰致瘀，痰瘀互结，沉积血脉是动脉粥样硬化病情发展的必然趋势。糖尿病合并动脉粥样硬化与中医“湿热为病，胶着互结，难解难分，蕴蒸合化，缠绵难愈”的湿热证特点高度吻合。因此调整和改善湿热体质就是从整体上综合把握了AS的内在原因和病理机制。清热化湿消瘀法通过分消“湿热瘀互结”之湿热证达到防治动脉粥样硬化的效果，是清热化湿消瘀法干预动脉粥样硬化的重要药理作用机制。因此，临床上我们运用中医方法从整体出发，多环节、多靶点综合作用，主张清热化痰、活血祛瘀为法，使用清化消瘀方治疗本病收到良好疗效[1]。清化消瘀方是我科已应用于临床多年，能有效防治糖尿病动脉粥样硬化的中药制剂，由黄芪、党参、山楂、黄芩、马齿苋、虎杖、生首乌、泽泻等药组成，功能活血祛瘀、清热化痰，能够标本兼顾、虚实并治。我们已经进行大量前期临床及实验研究证实，该方具有抑制血小板聚集、黏附，抑制血浆ET水平、抗血栓，能明显改善血液流变学、凝血功能等微观血瘀证指标，稳定、消退动脉斑块，从而有效降低糖尿病合并高血脂症患者血糖水平，调整脂质代谢紊乱[8-9]。本研究进一步证实本方能有效降低糖尿病合并动脉粥样硬化患者血清中AGEs、hs-CRP、IL-6、TNF-α 含量， 说明清化消瘀方能阻断糖基化进程，减少晚期糖基化终产物以及相关炎性因子的形成，从而抑制糖尿病患者动脉粥样硬化形成和发展，对治疗该病有积极意义，值得临床进一步推广。

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