先天性肥厚性幽门狭窄组织蛋白酶 D的免疫组化研究

刘春义 李玉楼

先天性肥厚性幽门狭窄组织蛋白酶 D的免疫组化研究

刘春义 李玉楼

肥厚性幽门狭窄,先天性；组织蛋白酶 D；免疫组化

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院 2003至 2009年 42例 CHPS患儿为CHPS组均为足月产儿,男 38例,女 4例；年龄 16～121 d,平均年龄 29.5 d。均于幽门环肌切开术中幽门肌层 1条,包括浆膜、纵行肌、肌间及环形肌。对照组标本 10例,男 9例,女 1例；新生儿 7例,婴幼儿 3例,均为幽门部正常的术中标本,取材方法同CHPS组,新鲜标本立即固定在 10%甲醛溶液中,组织经过酒精梯度脱水,石蜡包埋成蜡块。

1.2 免疫组织化学染色 标本经 10%甲醛固定、石蜡包埋,连续切片,切片厚 4μm,行 CAD免疫组化染色。染色步骤采用非生物素两步法,用已知阳性的神经节细胞瘤作为阳性对照片,用 PBS代替一抗作为阴性对照片,DAB显色。一抗、二抗及DAB显色剂均购自上海越研生物科技有限公司。

1.3 免疫组化染色结果分析 采用盲法,半定量分析方法分析。

2 结果

2.1 2组幽门部肌层及肌间 CAD阳性细胞比较 见表 1。

表1 2组幽门部肌层及肌间 CAD阳性细胞比较

2.2 正常幽门肌病理表现 (1)对照组新生儿与婴儿标本相比较,CAD阳性细胞数量分布无明显差异,且无严重不成熟细胞。(2)肌间神经从可见大量 CAD阳性节细胞,染色较深。

2.3 CHPS患儿的幽门肌病理表现 (1)环形肌与肌间均可见CAD抗体阳性细胞,与对照组比较,有明显减少,着色较浅的不成熟细胞,无明显差异。(2)纵行肌内CAD阳性细胞与对照组比较数量差异较小。

3 讨论

CHPS是婴儿器质性呕吐的最常见原因,是一种预后较好的先天性消化道畸形。其病因也有众多学说,如遗传因素、体液控制异常、幽门神经分布异常、生长因子异常等。但它的病因至今并不十分清楚。近年来有人提出神经节细胞细胞异常与 CHPS的形成有一定关系。CAD是一种天冬氨酸酶,属于溶酶体酸性蛋白酶家族,其在细胞内蛋白质的分解代谢中起着关键作用,可催化许多神经肽的降解,如P物质、生长抑素、B脂蛋白和血管紧张素原。CAD是肠神经节细胞特异性较高的标志物,对不同成熟程度的神经节细胞表达强度不同,不仅可以特异性标记神经节细胞,而且可以判断神经节细胞的成熟程度。

本组 42例CHPS患儿幽门部环肌层、肌间及纵肌层各层间均有CAD阳性细胞,但较对照组明显减少,尤其以环肌层及肌间神经节细胞减少显著。而且未发现严重变性或明显不成熟神经节细胞。该病病理是幽门壁各层组织均肥厚增大,以环肌层为主。这是由肌纤维增粗和肌束间结缔组织增生所致。单位面积内肌纤维数目明显减少。本组观察结果提示,该病幽门部肿块大小与年龄、病程长短有关,病史越长,肿块越大。这种病理改变是可逆的,经过一定时间,肿块可逐渐消失而痊愈[1]。

主要从事幽门肠肌层神经丛的研究者发现,神经节细胞直至生后 2～4周才发育成熟,因此,许多学者认为神经细胞发育不良是引起幽门肌肉肥厚的机制,而否定过去幽门神经节细胞变性导致病变的学说,运用组织化学分析法测定幽门神经节细胞内酶的活性；但也有持不同意见者,观察到幽门狭窄的神经节细胞与胎儿并无相同之处,如神经节细胞发育不良是原因,则早产儿发病应多于足月儿,然而二者并无差异。近年研究认为肽能神经的结构改变和功能不全可能是主要病因之一,通过免疫荧光技术观察到环肌中含脑啡肽和血管活性肠肽神经纤维数量明显减少,应用放射免疫法测定组织中 P物质含量减少,由此推测这些肽类神经的变化与发病有关[2]。

本组观察到,幽门部神经节细胞在不同部位,单位面积内神经节细胞数均减少,差异显著,尤以环肌层变化更显著。未发现有神经节细胞分离、空化,等退行性改变。神经节细胞有维持节律等作用,数量明显减少,而且幽门部神经纤维明显减少,神经网络有不同程度异常。有报道卡哈尔间质细胞及神经递质、突触也有减少[3]。这些因素可能引起幽门部动力失衡。其具体作用机制有待于进一步研究。该病患儿幽门部神经节细胞明显减少,所以各种影响幽门部神经组织发育或导致神经节细胞减少的因素可能是构成肥厚性幽门狭窄的因素之一。

1 王练英,刘永煜,李正.先天性肥厚性幽门狭窄病理组织学观察.中华小儿外科杂志,2000,21:122.

2 Shen ZX,She YX,WangWC,et al.Immunohistochemical study ofpeptidergic nerves in infantile hypertrophic ptloric stenosis.Pediar Surg Int,1900,5:111-113.

3 张海兰,王练英.先天性肥厚性幽门狭窄卡哈尔间质细胞和突触的免疫组织化学研究.中华小儿外科杂志,2003,24:200-222.

R 573.6

A

1002-7386(2011)01-0100-02

10.3969/j.issn.1002-7386.2011.01.058

050031 石家庄市,河北省儿童医院

先天性肥厚性幽门狭窄(CHPS)是婴儿呕吐的常见原因,占新生儿消化道畸形的第三位,对于它的病因研究迄今已有100余年,但至今仍不十分清楚,关于肌间神经丛的神经节细胞的研究有矛盾的形态学发现,组织蛋白酶 D(CAD)是肠壁神经节特异性标记物,幽门的正常功能有赖于幽门部神经节功能的完整,通过对幽门部 CAD的研究,进一步探讨 CHPS的发病机制。

2010-08-05)