HPLC法测定木豆叶中牡荆苷的含量

广州市药品检验所三分所（510700）肖佳尚

木豆叶为豆科植物木豆Cajanus cajan(L.)Millsp.的干燥叶，具有清热解毒、消肿止痛功效，用于小儿水痘、痈肿疮疖[1]。木豆叶主要含以牡荆苷为主的黄酮类等有效成分[2]。本试验采用HPLC法测定木豆叶中牡荆苷的含量，以控制其药材的质量，现将结果报道如下：

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（HP1050），紫外检测器；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；牡荆苷对照品（购自Zigma公司，经面积归一化法处理含量为92.6%）；木豆叶药材购自广州致信药业中药饮片厂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Nucleodur C18Gravity（250mm×4.6mm，5μm）；流动相采用梯度洗脱：0min时甲醇-1%冰醋酸（30:70）；20min时甲醇-1%冰醋酸（40:60）；流速：1ml/min；检测波长：339nm；在上述条件下牡荆苷与其他成分分离度良好。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取牡荆苷对照品2.92mg，置100ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度。

2.3 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液4、8、12、16、20μl注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，测定结果以进样量（μg）为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝2404.628X－44.552，r=0.9999，线性范围为0.108～0.541μg。

2.4 供试品溶液的制备 取本品粉末2.5g，精密称定，精密加入50%甲醇25ml，超声处理30 min，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，峰面积积分值的RSD为0.52%。

2.6 稳定性试验 对同一供试品溶液每隔2h测定一次，结果牡荆苷在12h内较稳定。

2.7 重复性试验 取同批样品5份，按含量测定项平行试验，测得样品中牡荆苷的含量平均为0.315mg/g，RSD为2.74%。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约1.25g，精密加入牡荆苷对照品溶液（0.0792mg/ml）5ml，按供试品溶液的制备及样品测定项操作，结果见附表1。

2.9 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，按外标法计算含量，结果见附表2。

附表1 加样回收率试验结果

附表2 样品含量测定结果(mg/g，n=2)

3 讨论

牡荆苷的50%甲醇液经紫外扫描在268nm和339nm波长处有最大吸收，339nm波长的响应值大于268nm，故选择339nm作为检测波长。试验用甲醇和50%甲醇超声提取效果好。经超声处理20、30、40、50min试验，结果超声30min即可提取完全，提取时间选择30min。经试验，采用本文的梯度洗脱可将牡荆苷与其他黄酮类成分较好地分离。