HPLC法测定天王补心丸（浓缩丸）中丹酚酸B的含量

孙 裕，王莲萍，杨玉华

（兰州佛慈制药股份有限公司，甘肃 兰州 730046）

HPLC法测定天王补心丸（浓缩丸）中丹酚酸B的含量

孙 裕，王莲萍，杨玉华

（兰州佛慈制药股份有限公司，甘肃 兰州 730046）

目的 建立测定天王补心丸（浓缩丸）中丹酚酸B的含量测定方法。方法 HPLC法。色谱柱：phenomenex Luna C18150×4.60 mm，5 μm。流动相：甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）；流速为：1.0 ml/min；检测波长为270 nm。结果 丹酚酸 B 在 0.3 μg～3.0 μg呈良好的线性关系，r为0.9998，平均回收率为96.6%。结论 本法测定天王补心丸（浓缩丸）中丹酚酸B的含量，方法简单、快速、结果准确，重复性好。

HPLC；天王补心丸（浓缩丸）；丹酚酸B；含量测定

天王补心丸（浓缩丸）原收载于部颁标准中药成方制剂第8册[1]，是由当归、丹参、党参、茯苓、桔梗等16味中药组成的复方制剂，具有滋阴、养血、补心安神的作用。用于心阴不足，心悸健忘，失眠多梦，大便干燥。原标准无含量测定项，为了更好地控制该产品的质量，本实验采用高效液相色谱，测定该制剂中丹酚酸B的含量，方法准确、重复性好，为该制剂的质量控制提供试验依据。

1 仪器与试药

仪器：SCL-10AVP高效液相色谱仪，日本岛津制作所生产；SK250HP超声清洗器，上海科导超声仪器有限公司生产。

试剂：乙腈、甲醇为色谱用试剂；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

对照品：丹酚酸B，由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：111562-200605。

供试品：天王补心丸，由兰州佛慈制药股份有限公司、兰州太宝制药有限公司提供。

2 色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱选用phenomenex Luna C18150×4.60 mm，5 μm；流动相：甲醇 - 乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）；检测波长为270 nm；柱温30℃；流速为1.0 ml/min；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。

3 方法与结果

3.1 对照品溶液的制备[2]

参考（中国药典2005年版一部）丹参药材中丹酚酸B含量测定项下的方法，使用75%甲醇作为溶媒。精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 ml含0.14 mg的溶液，即得。

3.2 检测波长的选择

取丹酚酸B对照品溶液，使用二极管阵列检测器，检测得到的丹酚酸B紫外全波长扫描图谱，光谱图上可见，丹酚酸B在270 nm处有最大吸收，故确定丹酚酸B的检测波长为270 nm。

丹酚酸B紫外全波长扫描图谱见图1。

3.3 供试品溶液的制备[2～3]

图1 丹酚酸B紫外全波长扫描图谱

取本品，研细（过3号筛），取约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率53 kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

参考（中国药典2005年版一部）丹参药材中丹酚酸B含量测定项下的提取方法，结合本品情况，经比较同批次样品（200818），用75%甲醇溶液加热回流30 min、加热回流60 min、超声20 min、超声30 min和超声60 min进行比较，除超声20 min提取不完全外，其余提取效果相差不大（见表1）。因此选用超声30 min作为提取方法，操作简便，快捷。

表1 提取方法的考察

3.4 阴性对照溶液的制备

取不含丹参的处方药材，按天王补心丸（浓缩丸）制备工艺制成阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

3.5 专属性试验

分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图（图 2～4）。由图 2～4 可见，供试品色谱中，在与丹酚酸B对照品相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，丹参阴性样品与丹酚酸B峰相同保留时间处无杂质峰干扰。

图2 丹酚酸B对照品HPLC图

图3 天王补心丸（浓缩丸）样品HPLC图

图4 天王补心丸（浓缩丸）阴性样品HPLC图

3.6 线性范围考察

取丹酚酸 B对照品溶液（0.3 mg/ml），精密量取 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置于5 ml量瓶中，各加75%甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别进样，进样量为10μl，测定峰面积，结果见表2。

表2 丹酚醇B峰面积值

3.7 精密度试验

按上述供试品溶液的制备方法及色谱条件，平行测定同一批天王补心丸（批号：200818）6次，RSD为1%，结果见表3。

表3 精密度试验结果

3.8 稳定性试验

取天王补心丸（浓缩丸）样品（批号：200818），制备供试品溶液，分别于 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 小时进样测定，进样量为10 μl，测定丹酚酸B峰面积，RSD为0.83%，结果见表4。

表4 供试品溶液的稳定性试验

3.9 重复性试验

取丹酚酸B对照品溶液（0.148 mg/ml），连续进样5次，每次进样量10μl，RSD为0.34%，结果见表5。试验表明，本法的重复性较好，能满足定量分析要求。

表5 重复性试验结果

3.10 加样回收试验

取天王补心丸（批号:200818，丹酚酸B含量为1.7189 mg/g）约1.0 g，共取6份，精密称定，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（浓度为0.0688 mg/ml）25 ml，摇匀，再分别精密加入75%的甲醇25 ml，按照供试品溶液的制备方法制取，过滤，取续滤液，按含量测定方法中色谱条件进行测定，按下式计算回收率，回收率（%）=[（测得丹酚酸B的量－样品中丹酚酸B的量）/添加的丹酚酸B的量]×100%。结果见表6。

表6 回收率测定结果

3.11 10批样品中丹酚酸B含量测定结果

取10批天王补心丸（浓缩丸）样品，按上述供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，依上述色谱条件测定，结果见表7。

4 讨论

4.1 其他变动因素耐用性研究

“中药质量标准分析方法验证指导原则”（中国药典2005年版一部附录ⅩⅧA）中指出，液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和PH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。因此，我们针对这些因素进行了方法耐用性研究，结果表明变动因素的较小差异对其结果的影响较小。

4.2 流动相的选择[2～3]

表7 10批产品的检测结果

结合本品实际，实验采用了①甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；②[甲醇 - 乙腈 - 甲酸（30：10：1）]- 水（38：62）③ 甲醇-乙腈-0.5%甲酸（30：9：61）。研究表明，选择用③为流动相，使所测成分丹酚酸B与杂质达到基线分离，分离度＞1.5，达到分析要求，故选择用甲醇-乙腈-0.5%甲酸溶液（30：9：61）为流动相。用①②流动相不能使分离效果和保留时间同时达到较好的效果。

本法以丹参中有效成分丹酚酸B为含量测定指标，采用高效液相色谱法进行测定，方法简便准确，重现性好，专属性强，可有效控制天王补心丸的质量。

[1]中华人民共和国药典会编.《卫生部药品标准》（中药成方制剂第8册）[M].

[2]中华人民共和国药典会编.《中国药典》[M].北京：化学工业出版社，2005.

[3]陈献，王艳红，陈琨凤.HPLC法测定睡安胶囊中丹酚酸B的含量[J].中成药，2007，29（10）：1549～1551.

G424.31

B

1671-1246（2010）22-0091-03