HPLC测定肾石通颗粒中延胡索乙素含量

2010-09-19文才华涂文升

中国医药指南 2010年34期

文才华涂文升

广西医科大学附属肿瘤医院（530021）

肾石通颗粒由金钱草、王不留行（炒）、萹蓄、延胡索（醋制）、丹参、鸡内金（烫）等10味中药组成的复方制剂，具有清热利湿，活血止痛，化石、排石功效。用于治疗肾结石，肾盂结石，膀胱结石，输尿管结石。据文献报道[1-3]该制剂的含量检测为槲皮素，另有文献报道[4]测定丹参素，但尚未见有有关测定延胡索乙素的报道。为进一步及更全面控制肾石通颗粒的质量，本文初步建立了HPLC测定肾石通颗粒中延胡索乙素含量的方法，结果表明该方法分离效果好、灵敏、准确，可用于肾石通颗粒中延胡索乙素含量的测定及质量控制。

1 仪器与试剂

岛津LC-10AVP高效液相色谱仪、SPD-10AVP紫外外-可见检测器、WML-2010色谱工作站，甲醇（高效液相色谱醇；上海国药集团化学试剂有限公司）、磷酸（分析纯）。

延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110726-200409）；肾石通颗粒为XX药业有限公司产品（批号：100401N、091012N、100506N）

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Shim-pack ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55∶45V/V）为流动相，流速0.8mL/min；检测波长280nm，柱温40℃。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取延胡索乙素对照品9.3mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（93mg/L）。

2.3 供试品溶液的制备

取肾石通颗粒，研磨，精密称取1.0g至50mL具塞三角烧瓶中，加入1.0mL三乙胺，加70%乙醇20.0mL，超声提取60min，过滤，取续滤液1.0mL，离心15min（15000r/min），上清液即为供试品溶液。

2.4 阴性干扰实验

按处方比例取处方中除延胡索以外的药材，制备缺少延胡索的阴性样品，按2.3项下方法制备阴性对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液、阴性样品溶液及供试品溶液各10.0μL，注入到高效液相色谱仪中。结果可见，在阴性样品溶液色谱图中与对照品溶液色谱图相应处无吸收峰，在供试品溶液色谱图中延胡索乙素的峰与其他成分峰达到基线分离（图1）。

图1-A 延胡索乙素标准品HPLC色谱图

图1-B 肾石通颗粒HPLC色谱图

图1-C 缺延胡索的HPLC图谱

2.5 标准曲线考察

精密吸取延胡索乙素对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μL，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程（Y=2.80×106+7.9×104Cr=0.999 5 n=7），结果表明延胡索乙素，在23.25～162.75ng的线性范围线性关系良好，最低检出限为23.25ng。

2.6 精密度实验

取同一对照品溶液，分别精密吸取7.5μL，注入到高效液相色谱仪中，进样6次。结果RSD值为0.54%，提示所使用仪器的精密度良好。

2.7 稳定性实验

取同一供试品溶液，每隔2h进样1次，连续6次，RSD为1.40%，表明供试品溶液在12h 内稳定性良好。

2.8 回收率实验

取已知延胡索乙素含量为39.8μg/g的样品适量，研磨，精密称取1.0g，共9份，分别加入标准品溶液0.10mL、0.20mL、0.30mL，按2.3项下方法进行提取，进样测定，计算回收率。结果示平均回收率为99.81%，RSD值为0.66%，见表1。