毛冬青分散片制备工艺研究

2010-11-02捷刘宗河

中国医药指南 2010年34期

关键词：分散片黄酮处方

王捷刘宗河

毛冬青分散片制备工艺研究

王捷1刘宗河2

正交实验优选毛冬青总黄酮提取工艺和毛冬青分散片制剂工艺处方，所得分散片的分散均匀度符合《中国药典》2010年版分散片标准，溶出度明显优于普通糖衣片。本文毛冬青分散片制备工艺简便易行，稳定可靠。

毛冬青分散片；毛冬青总黄酮；正交实验；制备工艺

毛冬青radix ilicis pubescentis.为冬青科植物，别名毛栋子等，药用部位为其干燥根，为我国南方省区民间常用药。《广西中草药》记载：“毛冬青根清热解毒、消肿止痛、利小便。治刀枪打伤、肺热喘咳、外感风热、防流脑”。功能凉血、活血、通脉、消炎解毒，国内外学者重视研究。广西医科大学制药厂毛冬青糖衣片（每片含总黄酮0.1g，国药字Z45021018），心血管疾病药，有扩张血管及抗菌消炎作用，主治血栓闭塞性脉管炎、冠状动脉硬化性心脏病、血栓闭塞性脉管炎、中心性视网膜炎。长期临床应用中发现，每次4～5片，药量较大，老幼龄、吞咽困难者难接受，且有效成分溶出慢，生物利用度低。毛冬青分散片由毛冬青单味组成，由毛冬青糖衣片改剂型而得，综合片剂和液体制剂优点，克服二者不足，适合老幼龄、吞咽困难者，崩解、溶出加快，生物利用度提高，对提高疗效、扩大临床应用很有意义。本文用正交实验优选毛冬青药材醇提取工艺和制剂工艺处方，并考察干膏毛冬青总黄酮含量、分散均匀度和溶出度。

1 仪器和试药

1.1 仪器

UV-2100双光束紫外分光光度计：北京瑞利分析仪器公司；FW100高速粉碎机：青州市精诚机械公司；JC30324A电热箱：上海嘉程仪器厂；BP211D电子天平：Sartorius，0.01mg，德国；ZDY-8压片机：上海远东制药机械厂；ZB21C智能崩解仪：天津大学精密仪器厂；ZRS-8G智能溶出仪：天大天发科技公司。

1.2 试药

芦丁对照品：中国药品生物制品检定所，98.7%；毛冬青药材：南宁药材站，广西医科大学制药厂鉴定为正品；交联聚乙烯吡咯烷酮（PPVP）：上海其福青材料科技公司；低取代羟丙基纤维素（L-HPC）：湖州展望药业公司；微晶纤维素（MCC）：湖州展望药业公司；羧甲基淀粉钠（CMS-Na）：武汉祥和精细化工公司；其他试剂分析纯。

2 方法和结果

2.1 毛冬青分散片制法

毛冬青药材适宜条件下提取，提取液合并，过滤，滤液回收乙醇后浓缩至稠膏，干燥成干膏（总黄酮30%），粉碎，过80目筛，备用；处方量PPVP、MCC过80目筛，混匀，与干膏粉混匀，5%淀粉浆为粘合剂，35目筛制粒，干燥，35目筛整粒，干颗粒加入处方量L-HPC、甜菊素、硬脂酸镁混匀，压片（调节压力控制片硬度6～7kg）。

2.2 提取工艺优选

单因素法考察提取方法、提取溶媒、提取次数、药材溶媒比例、提取控制温度、提取所用时间等因素对含量的影响，正交实验优化提取工艺。

2.2.1 提取方法

提取黄酮类化合物一般使用超声震荡法、回流法两种，前者能耗低、省时、特别适合小规模小批量实验室研究等优点，但大多数植物提取率低于回流法，未普及规模生产。回流、超声及索氏提取三法提取，毛冬青总黄酮含量分别为1.3%、0.99%、0.43%，故用回流法。

2.2.2 提取溶媒

黄酮类化合物易溶解在甲醇、乙醇、丙酮等极性较大的有机溶剂。以甲醇、醋酸乙酯、无水乙醇、65%乙醇、40%乙醇、纯化水回流提取，毛冬青总黄酮含量分别为0.16%、0.27%、0.23%、0.96%、1.03%、0.82%，故用40%乙醇溶液作提取溶媒。

2.2.3 提取控制温度

考察不同提取温度对毛冬青总黄酮含量的影响，结果显示出温度适度升高则毛冬青总黄酮在乙醇的溶解度随之增大，同时温度适度升高，提取溶液稠度下降，溶质成分扩散系数加大，浸提速度加快，提取效率提高，但提取控制温度过高容易促进黄酮成分发生氧化反应，超过70℃时毛冬青总黄酮含量反而下降，因此提取控制温度宜选定60℃。

2.2.4 药材溶媒比例

考察不同提取药媒比对毛冬青总黄酮含量的影响。结果显示出药媒比1:20时最好，故选此比例。

2.2.5 提取所用时间

考察不同提取所用时间和毛冬青总黄酮含量的关系，结果显示最初毛冬青总黄酮含量随提取所用时间延长而提高，60min后提高减缓，考虑联系实际条件下生产应用中生产过程周期缩短和生产投入成本降低的要求，故选择60min。

2.2.6 提取次数

考察不同提取次数对毛冬青总黄酮含量的影响，结果显示出提取3次后已提取出毛冬青总黄酮含量的85%～90%，故用3次。

2.2.7 正交实验

根据单因素考察结果，选取提取控制温度、提取所用时间、药媒比、提取次数为4个主要因素，L9（34）正交实验确定最佳提取条件。因素水平见表1，正交实验结果见表2，方差分析结果见表3。从表3可知，提取次数（D）对毛冬青总黄酮含量影响最大，提取温度（A）的影响次之；再次提取时间（B）；而料液比（C）对毛冬青总黄酮提取的影响不大，最佳提取方案：A2B2C2D3。

表1 因素水平表

表2 正交实验结果

表3 方差分析

2.3 毛冬青总黄酮含测

2.3.1 芦丁对照品溶液

精密称定无水芦丁对照品10mg，用40%乙醇溶解和稀释定容于50mL容量瓶，摇匀，便得浓度为0.2mg/mL的无水芦丁对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液

精密称取毛冬青50g，在不同条件下提取后，滤过，滤液浓缩至一定量，用其提取溶剂定容于50mL量瓶，摇匀，即得。

2.3.3 标准曲线

精密吸取芦丁对照品溶液0.1、0.5、1、2、3、4、5mL，分别置10mL量瓶中，加5%NaNO2溶液0.3mL，摇匀，6min后加10%Al（NO3）3溶液0.3mL，充分摇匀，6min后加4%NaOH溶液4mL，充分摇匀，静置10min，用40%乙醇稀释定容，同法制备其空白对照，510nm处测其吸光度，以浓度C（mg/mL）为纵坐标（X），以吸光度A为横坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程:A=0.5C+0.0057，r=0.9999。结果显示:在2～100mg/mL范围内，浓度与吸光度间呈现良好线性关系。

2.3.4 加样回收率

精密称取毛冬青0.25、3.5、7.5g ，分别精密加入“2.3.1”项芦丁对照品溶液0.5、5、10mL，按“2.3.2”项制备低、中、高3组浓度提取液（n=3），测得回收率分别为100.2%、99.7%、101.2%，RSD分别为1.6%、0.8%、1.4%。

2.3.5 样品中毛冬青总黄酮含测

精密量取样品供试品溶液1mL，按“2.3.3”项测定，计算毛冬青总黄酮含量。

2.4 提取工艺验证

按A2B2C2D3，即在提取控制温度60℃、40%乙醇溶液作提取溶媒、提取60min、药媒比1:20、提取3次的最佳条件下重复性实验3批。检测3批提取物，毛冬青总黄酮含量分别是1.73%、1.82%和1.75%，RSD分别为1.1%、0.9%和1.2%，即所选提取工艺稳定可行。

2.5 处方优化

预试验显示分散片制剂中，崩解剂品种和使用量、粘合剂浓度、填充剂使用量对崩解时间影响较大[1]，故分别单因素实验，用正交实验处方优化。

2.5.1 崩解剂

常用PVPP、L-HPC、CMS-Na等[2,3]。按崩解剂∶干膏为1∶2，填充剂MCC实验，记下崩解时间，见表4。

表4 崩解剂品种选用

结果：PVPP崩解时间最短，L-HPC次之，CMS-Na崩解时间不符合《中国药典》2010版＜3min要求。但PVPP价格较高，崩解剂联合应用效果更佳[4]。内加法从片芯内部崩解，崩解后微粒细，生物利用度比外加法高；外加法从片微粒间开始崩解，崩解较内加法快，但崩解后微粒较内加法粗，分散均匀度稍差。再考察崩解剂联合应用。

2.5.2 联合应用

按崩解剂∶干膏为1∶2，填充剂MCC实验，考察PVPP与L-HPC按不同比例混合的崩解时间，见表5。

表5 崩解剂联合应用

PVPP∶L-HPC的比例为1∶1时，崩解时间符合《中国药典》2010版要求，且成本低廉。故明确联合崩解剂PVPP∶L-HPC（1∶1）。2.5.3 正交实验

影响分散片崩解因素还有崩解剂不同加入方法，分外加法和内加法。考察崩解剂不同加入方法。在预试验基础上，L9（34）正交实验，考察因素:崩解剂不同加入方法、填充剂使用量、粘合剂浓度，见表6～8。

表6 因素水平表

表7 正交实验结果

表8 方差分析

结果：崩解时间短为宜，由表6～表8，因素A影响最显著，取A3；因素B影响较显著，取B3；因素C影响不显著，取C1，故最佳方案A3B3C2，即PVPP∶L-HPC比例为2∶1，填充剂50%，10%淀粉浆。

2.6 分散均匀度

按优选出最佳提取方案A2B2C2D3和最佳制剂方案A3B3C2，即药材用40%乙醇溶液在60℃提60min，药媒比（1:20），提3次，提取液合并，过滤，滤液回收乙醇后浓缩至稠膏，干燥成干膏（总黄酮30%），粉碎，过80目筛，备用；处方量PPVP、50%MCC过80目筛，充分混匀，与干膏粉混匀，10%淀粉浆为粘合剂，35目筛制粒，干燥，35目筛整粒，干颗粒加入L-HPC（相当于1/2PPVP处方量）、1.5%甜菊素、0.5%硬脂酸镁混匀，压片（压力控制硬度6～7kg），制分散片3批。质量评价主要考察所制分散片的分散均匀度。分别取两片，置于100mL（20±1）℃纯化水中，震摇，3min内全部崩解，混悬液完全通过2号筛，符合《中国药典》2010版分散片标准。