HPLC法同时测定大枣中芦丁和酸枣仁皂苷B的含量

2010-09-11陈鑫刘永刚王耀欣郑丽英何希辉韩南银北京大学医学部药学院北京市009北京中医药大学中药学院北京市000

中国药房 2010年3期

陈鑫，刘永刚，王耀欣，郑丽英，何希辉，韩南银#（.北京大学医学部药学院，北京市009；北京中医药大学中药学院，北京市 000）

大枣为鼠李科植物枣Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果实，具有补中益气、养血安神之功效[1]。2005年版《中国药典》对大枣的质量控制较为简单，只有性状、薄层和灰分检查，没有含量测定项。笔者在本试验中尝试增加芦丁和酸枣仁皂苷B的含量测定，用于大枣的质量研究和评价。

1 仪器与试药

高效液相色谱（HPLC）仪、2998型二极管阵列检测器（美国Waters公司）。芦丁、酸枣仁皂苷B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200306、110814-200506）；大枣（产于山西吕梁，购自山西柳林县华安母枣公司，批号：20070203、20070204、20070205）；乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱：Agilent Extent-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：25 ℃；流速：1 mL·min-1；流动相：0.01%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），二元梯度洗脱（0.01～15 min，20%B；15～30 min，20%～35%B；30～35 min，35%～45%B；35～40 min，45%～80%B；40～60 min，80%～20%B）；检测波长：0.01～30 min、254 nm，30～40 min、210 nm，40～60 min、254 nm。理论塔板数按芦丁峰计算应不低于2 000。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液：精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的芦丁和酸枣仁皂苷B对照品各适量，加甲醇分别制成每1 mL含0.344 mg和0.112 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液：取本品8 g，加入50 mL水，混匀，用水饱和正丁醇萃取5次，每次30 mL，合并正丁醇层，用正丁醇饱和氨水溶液洗涤2次，每次20 mL，取正丁醇层蒸干，残渣用甲醇溶解，定容于5 mL量瓶中，摇匀，静置，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.3 线性关系考察

取上述芦丁对照品贮备液适量，以甲醇稀释成浓度分别为0.068 8、0.137 6、0.206 4、0.275 2 mg·mL-1的溶液；再将酸枣仁皂苷B对照品贮备液稀释成浓度分别为0.022 4、0.044 8、0.067 2、0.089 6 mg·mL-1的溶液。取上述各溶液20 μL，分别注入液相色谱仪，测定。以进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，分别得一条近似通过原点的直线，回归方程分别为Y＝46 730.81X—184.8（r＝0.999 8）和Y＝10 509.5X+128.9（r＝0.999 9）。结果表明，芦丁和酸枣仁皂苷B的进样量分别在1.38～6.88 μg和0.448～2.24 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系。