目安眼膏治疗兔单纯疱疹病毒性角膜炎的研究

谭涵宇，张湘晖 ，张明亮 *，何 群 ，伍参荣 ，张 健 ，王霜玲

（1.湖南中医药大学中医眼科学重点学科，湖南 长沙 410208；2.湖南中医药大学第一附属医院眼科，湖南 长沙 410007；3.上海市眼病防治中心，上海 200040）

单疱病毒性角膜炎 (herpes simplex keratitis，HSK)大部份为HSV-Ⅰ型感染所引起，其发病率和致盲率均占角膜病的首位。根据目前治疗HSK现状，阿昔洛韦是治疗该病的首选药物，但对角膜修复、愈合及再生作用欠佳，而蜂蜜能增强机体的免疫功能，对创面具有收敛、保护及愈合等作用。蜂蜜与ACV配伍制成的目安眼膏，既能增强治疗HSK的药效，又能提高角膜修复、愈合及再生能力，但药效与蜂蜜浓度有密切关系[1-2]，本实验采用不同浓度目安眼膏和3%ACV眼膏、卡波姆凝胶基质眼膏治疗实验性兔单纯疱疹病毒性角膜炎，用裂隙灯观察角膜病变并进行Trouzdale评分，现将实验方法及结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 新西兰大白兔20只（40只眼）由湖南中医药大学动物实验室提供，体质量2.0～2.5kg，雌雄各半，经检查无眼疾。动物合格证号：医动字20-003。

1.1.2 药物 目安眼膏I号蜂蜜为5 g，目安眼膏Ⅱ号蜂蜜为10 g，分别加ACV 3 g入卡波姆凝胶基质中至100 g，卡波姆凝胶基质（卡波姆-940、吐温-80、尼泊金乙醋、甘油、蒸馏水）。由湖南中医药大学药学院提供。3%阿昔洛韦眼膏（上海第九制药厂生厂，批号：050502）。阿昔洛韦原料（湖北科益药业股份有限公司生产，批号：060204）。2%荧光素钠（湖南中医药大学第一附属医院药剂科生产，批号：050607）。紫云英蜂蜜（湖南省药材公司生产，经我校周日宝教授鉴定符合《中华人民共和国药典》2005版一部规定）；0.4%Benoxil溶液（日本参天制药株式会社生产）。

1.1.3 仪器 手持裂隙灯，NIKON FX照相机，裂隙灯日本TOPCON公司生产。

1.2 方法

1.2.1 单疱病毒性角膜炎模型的制作 参照角膜环钻法以及上皮划痕法[3-4]。0.4%Benoxil溶液（日本Saten参天制药有限公司）3次表面麻醉，6 mm环钻在角膜中央作一压痕，并用30-gauge针在其压痕内作“#”划痕，微量取样品25μL病毒悬液滴入兔双眼结膜囊内，轻合眼睑按摩1 min，接种24 h出现畏光，流泪裂隙灯下提示造模成功。

1.2.2 分组和给药方法 模型兔随机分4组，每组5只(10眼)。I组：目安眼膏 I号；Ⅱ组：目安眼膏Ⅱ号；Ⅲ组：ACV组(阳性对照组)；IV组：凝胶基质眼膏(阴性对照组)。涂眼药 3次/d，每次给药 0.1 g，间隔 4 h(8 am、12 nm、4 pm)，双眼接受同样治疗14 d。

1.2.3 裂隙灯观察 于接种病毒后 1、2、4、6、8、10、12、14 d进行裂隙灯观察并行Trouzdale评分。其他评价参数包括眼睑、结膜、虹膜和房水等。角膜上皮病变面积评分标准参考有关文献[5]0分：正常的透明角膜；0.1～0.9分：点状上皮病变1～9个；1分：点状上皮病变10个以上，或小溃疡面积占角膜面积25%以下；2分：角膜溃疡面积占角膜面积25%～50%；3分：角膜溃疡面积占角膜面积50%～75%；4分：角膜溃疡面积占角膜面积＞75%。

1.3 统计学分析

2 结果

4组实验角膜接种前均无眼疾，在接种病毒后24 h出现病变，结膜充血、流泪、畏光、角膜上多为点状，短棒状及短树枝状浅层角膜上皮病变，病变首先从划痕处角膜上皮缺损部位开始形成，但各组角膜病变程度之间比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。接种2 d后病变逐渐呈典型的树枝状和地图状溃疡，第6～8天各组的角膜病变到达高峰期。各组角膜病变的情况见表1，各组并发症的情况见表 2～4。

2.1 目安眼膏I组

接种病毒后1 d角膜上皮为点状病变，从2 d开始，逐渐发展成树枝状，6～8 d病变进入高峰，树枝状及地图状典型病变出现，平均评分为1.16～1.30，基质水肿，到14 d平均分值为0.12，平均治愈天数11.2 d。结膜炎发病率为100%，虹膜炎发病率为10%，眼睑疱疹发病率为10%，前房积脓发病率为0。

2.2 目安眼膏Ⅱ组

与前组相似，接种病毒后1 d即见点状病变，随后发展成树枝状及地图状溃疡，6～8 d为病变高峰，平均评分在1.45～1.78之间，到14 d上皮病变分值为0.45。实验过程中结膜炎发病率为100%，虹膜炎发病率为20%，眼睑疱疹20%，前房积脓发病率为0。

2.3 ACV眼膏组

2 d后病变以点状病灶为主，同时有较多短棒状病灶，无溃疡形成。病变在6～8 d达高峰，基质水肿，浸润轻微，9 d上皮开始愈合。结膜炎发病率100%，虹膜炎发病率30%，眼睑疱疹发病率20%，前房积脓发病率为0。

2.4 凝胶基质眼膏组

接种后2 d，出现典型的树枝状病灶，病变面积不断扩大，6～8 d达高峰，形成地图状溃疡，基质水肿，浸润，角膜平均评分介于2.72～3.2之间，此后上皮病变呈好转趋势，但病变向基质层发展，虽然上皮病变缩小，但是基质水肿较重，上皮评分从高峰期后逐渐下降,未观察到自愈的例数。结膜炎和虹膜炎发病率为100%，前房积脓发病率40%，眼睑疱疹发病率为30%。4个处理组之间的角膜上皮病变面积比较，差异有统计学意义（P＜0.01），目安眼膏I号分别与目安眼膏Ⅱ号和ACV眼膏之间角膜病变面积比较，差异有统计学意义 （P＜0.05），目安眼膏Ⅱ号和ACV眼膏之间角膜病变面积比较，两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 目安眼膏对各组兔角膜病变不同时间段评分比较 （分，n=10，）

表1 目安眼膏对各组兔角膜病变不同时间段评分比较 （分，n=10，）

组别 1 d 2 d 3 d 4 d I组 0.84±0.05 0.88±0.03 0.96±0.08 1.01±0.14Ⅱ组 0.84±0.04 0.92±0.07 1.10±0.13 1.18±0.10Ⅲ组 0.85±0.07 0.92±0.09 1.12±0.11 1.16±0.08 IV 组 0.89±0.12 1.32±0.19 1.66±0.28 2.02±0.20 5 d 6 d 7 d 8 d 9 d 10 d 1.10±0.21 1.16±0.20 1.24±0.22 1.30±0.23 0.81±0.16 0.55±0.15 1.26±0.18 1.45±0.22 1.66±0.24 1.78±0.20 1.42±0.18 1.34±0.12 1.24±0.18 1.48±0.24 1.69±0.25 1.82±0.21 1.46±0.20 1.25±0.18 2.27±0.21 2.72±0.26 2.86±0.25 3.20±0.35 2.70±0.22 2.55±0.14

续表1

表2 各组免结膜炎发病情况

表3 各组兔眼睑疱疹发病情况

表4 各组兔虹膜炎发病情况

3 讨论

单纯疱疹病毒性角膜炎由单纯疱疹病毒Ⅰ型 （HSV-1）感染引起，属中医学“黑睛生翳”范畴。临床表现类似于“聚星障”。本病常因正虚邪留而致病情缠绵难愈、反复发作。目前，很多抗病毒的西药对本病有较好的疗效，但对角膜修复，愈合及再生作用欠佳，且易复发。如用抗病毒药物同时，合并使用能增强角膜修复，愈合及再生能力的药物，则可使HSK更易愈合，减少愈合后遗留的瘢痕，达到防盲的目的。近10多年来研究发现，不少中药对实验性单纯疱疹病毒性角膜炎有较好的疗效，如赵海滨等研究表明鱼腥草眼液具有一定抗病毒活性，对实验性单纯疱疹病毒性角膜炎有明显的疗效[6]。

目安眼膏含蜂蜜和阿昔洛韦，中医认为蜂蜜除清热解毒、润燥止痛等功效，而且是配置眼膏较理想的增强剂和防腐剂。古代眼科方剂学中，常用于眼膏基质。以炼蜜为基质制成点眼膏是中医眼科传统制剂上一大特色，蜂蜜含大量的转化酶(约62%～83%)，具有还原性,故能防止药品有效成分的氧化变质，且有很高的化学稳定性不与主药起反应，故不影响主药含量的测定[7]。同时阿昔洛韦是目前应用最广的抗HSV药物，也是现有抗HSV药物中作用较强者。其作用机理为在HSV-1胸苷酶作用下，转化为三磷酸衍生物，这种三磷酸阿昔洛韦能对HSV-1 DNA聚合酶产生强抑制作用，阻断病毒DNA合成和抑制HSV-1复制[8]。从该实验结果来看，4组兔角膜上皮病变程度差异如下：目安眼膏Ⅰ＜3%ACV眼膏≈目安眼膏Ⅱ＜基质，并表明两种浓度目安眼膏对HSV-Ⅰ在角膜组织中的繁殖、复制均有抑制作用,并因此减轻角膜病变程度。但目安眼膏Ⅱ促进角膜恢复较目安眼膏Ⅰ慢,可能是由于蜂蜜浓度较高导致其渗透压高影响角膜上皮细胞生长，而目安眼膏Ⅰ更有利于角膜上皮恢复。

[1]谭海波，张湘晖，张明亮，等.目安眼膏治疗实验性家兔单纯疱疹性角膜炎研究[J].中国中医眼科杂志，2003,13(1);12-14.

[2]倪蕊芝.蜂蜜滴眼液对角膜溃疡的疗效观察[J].中国中医眼科杂志，1997,3（2）：13.

[3]Wander A H,Centifan Y M,Kaufman H E.Strain specificity of clinical isolates of herps simplex virus[J].Arch Ophthalmol，1980,(98)：1 458-1 461.

[4]吴幼锐.实验性家兔HSV-1角膜炎的扫描电镜改变[J].眼科学报，1987,3(1)：47-51.

[5]Khardori N,Wong E,Nguyen H,et al.Effect of subinhibitory concentrations of clindamycin and trospectomycin on the adherence of staphylococcus epidermidis in an invitro model of vascular catheter colonization[J].Infect Dis,1992,（166）：108.

[6]赵海滨，彭清华，吴权龙，等.鱼腥草滴眼液治疗单纯疱疹性角膜炎的实验研究[J].中国中医眼科杂志，2002，12（3）：129-131.

[7]肖国士.蜂蜜及其在眼科制剂上的应用 [J].中国中医眼科杂志，1994,4(1)：42-43.

[8]Pramod N P， Thyagarajansp， Mohan K V.Acylovir resistance in herpes simplex virus isolates from keratitis cases：an analysis from a developing country[J].Microbiol Immunol，2000，44(4)：241-247.