中药溃结灵配合柳氮磺胺吡啶对溃疡性结肠炎患者防御素、一氧化氮及丙二醛表达的影响＊

常 东 刘子志 李 键 冯春霞 李 辉 何 方

中药溃结灵配合柳氮磺胺吡啶对溃疡性结肠炎患者防御素、一氧化氮及丙二醛表达的影响＊

常 东1刘子志2李 键3冯春霞3李 辉1何 方1

目的观察中药溃结灵煎剂对溃疡性结肠炎(UC)结肠组织HNP1－3、NO和MDA的影响，探讨其治疗机制。方法活动期UC(大肠湿热证)患者随机分为中西药结合组(予溃结灵、SASP)与柳氮磺胺吡啶组(予SASP)，检测治疗前后肠黏膜组织内HNP1－3蛋白表达情况及结肠组织NO、MDA水平。结果随着病变程度的增加，HNP1－3、NO和MDA的表达逐渐增强，三者呈明显正相关;两组治疗后HNP1－3、NO和MDA表达较治疗前明显减少，治疗组的减少程度高于对照组。结论溃结灵配合SASP治疗能使NO和MDA对组织的细胞毒性降低，从而达到治疗溃疡性结肠炎的作用。

溃疡性结肠炎 防御素 一氧化氮 丙二醛 溃结灵

1武警广东边防总队医院(深圳518029)

2广州中医药大学(广州510405)

3广东省深圳市中医院(深圳518033)

＊广东省中医药局建设中医药强省科研课题(No.2009044)

目前认为，免疫异常尤其是肠黏膜局部的免疫紊乱在溃疡性结肠炎(UC)的发病中占有非常重要的地位。近年来，随着研究的深入，防御素家族在先天免疫中的作用受到广泛关注。溃结灵是广东省名老中医劳绍贤教授治疗UC(大肠湿热证)的经验方，疗效较好[1－2]。本研究观察结肠组织中防御素(HNP1－3)、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)的表达，分析三者的相关性，探寻中药溃UC的作用机制。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 观察对象60例均为近3年武警深圳医院和深圳市中医院的住院及门诊患者，按文献[3]确诊。辨证属大肠湿热。随机分为两组各30例，另设正常组30例(健康武警部队战士)。治疗组男性19例，女性11例;年龄18～63岁，平均 (34.50±8.60)岁;病程 1～12年，平均(7.40±4.50)年;病情轻、中、重度各5、20、5例。对照组男性18例，女性12例;年龄 20～65岁，平均(33.20±7.40)岁;病程 1～13年，平均(8.40±4.20)年;病情轻、中、重度各 6、17、7例。各组资料差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法 治疗组予中药溃结灵煎剂:救必应30g，火炭母 30g，地榆 15g，三七 10g，败酱草 30g。每日1剂，煎取药汁200mL早晚分服。同时服用柳氮磺胺吡啶片(SASP)，每次1g，每次4次。对照组予SASP片，每次1g，每日4次。两组疗程均为12个月。

1.3 观察方法 患者于治疗前后常规肠道准备后行结肠镜检查，于病变处取4块组织，检测HNP1－3、NO和MDA的表达。HNP1－3检测采用免疫组化S－P法，NO检测采用硝酸还原酶法，MDA检测采用硫代巴比妥酸显色法。

2 结果

2.1 各组HNP1－3、NO和MDA的表达与UC的病理分级比较 见表1。结果 显示HNP1－3分别表达于中性粒细胞胞质、腔腺之间，呈弥漫或颗粒性分布。HNP1－3在正常组无表达或少量表达，NO和MDA在正常组有少量表达;Ⅱ级和Ⅲ级与Ⅰ级比较差异均有统计学意义(P ＜ 0.05 或 0.01)。正常组与病变组 HNP1－3、NO、MDA表达的差异有统计学意义(P＜0.01)。

表1 各组HNP1－3、NO和MDA的表达情况与UC的病理分级(±s)

表1 各组HNP1－3、NO和MDA的表达情况与UC的病理分级(±s)

与Ⅱ级比较，＊P ＜0.05;与Ⅲ级比较，△P ＜0.01;与Ⅲ级比较，▲P ＜0.05;与病变组各级比较，○P ＜0.01

n HNP1－3(IA)NO(μmol/g)MDA(mmol/g)31.134 ±5.261＊△52.886 ±10.123▲78.792 ± 14.675 18.369 ± 3.046○组别病变组Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级正常组60 15 39 6 30 183.63 ±46.41＊△278.96 ±46.35▲410.42 ± 91.83 53.73 ±15.11○19.736 ±2.972＊△34.964 ±4.356▲77.129 ± 4.854 10.795 ±2.415○

2.2 两组治疗前后HNP1－3、NO、MDA表达比较 见表2。结果 表明，两组治疗后 HNP1－3、NO、MDA 表达明显减少(P ＜0.01或0.05)，其中治疗组减少程度大于对照组。

3 讨论

研究认为，UC属免疫性疾病，发病机制复杂，天然免疫受体的表达及功能异常能在免疫性疾病的发病过程中起重要作用[4]。防御素作为机体天然防御的屏障，在宿主天然免疫中起着重要的作用。HD亚型可介导炎症反应，启动机体免疫防御系统[5]。NO是一种相对稳定的气体自由基，可引起脂质过氧化反应，产生脂质过氧化物，其中以MDA毒性作用最大，其含量反映机体脂质过氧化的速率及强度，可间接反映组织受自由基损伤的程度[6]，研究发现，NO能影响多种免疫活性物质的合成和分泌，激活和放大免疫/炎症反应，形成瀑布效应，从而加重炎症和组织损伤[7]。

表2 治疗组与对照组治疗前后HNP1－3、NO、MDA表达情况(±s)

表2 治疗组与对照组治疗前后HNP1－3、NO、MDA表达情况(±s)

与本组治疗前比较，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01;与对照组治疗后比较，★P ＜ 0.05

组别治疗组(n=30)对照组(n=30)治疗前治疗后治疗前治疗后HNP1－3(IA)291.48 ± 42.60 180.69±46.19＊＊△289.11 ± 43.53 226.27 ± 40.52＊NO(μmol/g)35.86 ±4.24 12.24 ±2.20＊＊△36.12 ±4.59 19.23 ±3.52＊MDA(μmol/g)52.14 ± 10.25 24.61 ±3.30＊＊△52.20 ± 10.13 37.11 ± 5.93＊

本研究发现，随着病变组分级程度的增高，UC患者肠黏膜HNP1－3表达逐渐增强，与NO、MDA呈明显的正相关;而正常组无表达或少量表达。由此可见，NO、MDA可作为UC病情程度的重要检测检测指标。推测UC的发生发展与NO、MDA、HNP1－3的参与有着密切的联系。HNP1－3分子具有趋化动力和趋化活性，可趋化单核细胞和淋巴细胞，刺激成纤维细胞的增生，改变细胞膜的通透性，从而引起免疫调节功能失衡，诱发免疫反应的增强，导致损伤性免疫因子的释放增加，引起肠黏膜损害。NO和MDA均具有细胞毒性作用，同时也能协同防御素的细胞毒作用。因此可以认为，HNP1－3可能在UC结肠组织炎症损伤过程中起重要作用，NO和MDA也参与了UC的发生、发展，并可能与HNP1－3协同发挥作用。

溃结灵煎剂具有清热利湿、凉血解毒、理气活祛瘀止痛之功效。本研究表明治疗组治疗后前NO和MDA表达明显减少，情况优于对照组，说明溃结灵煎剂配合SASP可明显降低NO和MDA的表达。我们认为，溃结灵配合SASP治疗很可能是使NO和MDA对组织的细胞毒性降低，继而达到治疗UC(大肠湿热证)的作用。

[1]常东，劳绍贤，樊亚巍，等.溃结灵颗粒配合柳氮磺胺吡碇治疗大肠湿热型溃疡性结肠炎30例[J].辽宁中医杂志，2007，34(11):1566 － 1567.

[2]常东，黄志新，樊亚巍，等.溃结灵颗粒对大肠湿热型溃疡性结肠炎患者Toll－like受体等指标的影响 [J].中国中医药信息杂志，2008，15(1):11 －13.

[3]中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会.溃疡性结肠炎中西医结合诊治方案(草案)[J].中国中西医结合杂志，2004，24(11):1052.

[4]Heumann D， Roger T.Initial responses to endotoxins and gramnegtive[J].Clin Chim Acta，2002，323(1):59 －72

[5]Wehkamp J， Schwind B， Herrlinger K R，et al.Innate immunity andcolonic inflammation:enhanced exp ression of ep ithelial alpha2de2fensins[J].Dig Dis Sci， 2002，47(6):1349－1355.

[6]Serra J A，Marschoff E R，Dominguez R O，et al.Comparison of thedetermination of superoxide dismutase and antioxidant capacity inneurological patients using two different procedures[J].Clin Chim Acta，2000，301(1 －2):87 － 102.

[7]Potoka D A， Nadler E P， Upperman J S， et al.Role of nitricoxide and peroxynitrite in gut barrier failure[J].World J Surg， 2002，26(7):806 － 811.

Effect of Kuijieling Decociton plus Sulfasalazine on HNP1-3，NO and MDA expressions in Ulcerative Colitis

CHANG Dong1， LIU Zi-zhi2， LI Jian3， et al
1 Shenzhen Hospital of Armed Police(Shenzhen 518029)
2 Guangzhou University of Chinese Medicine(Guangzhou 510405)
3 Shenzhen TCM Hospital，Guangdong Province(Shenzhen 518033)

Objective:To probe into the correlation among HNP1－3， NO and MDA and these expression in ulcerative colitis(UC)with colorectal damp heat syndrome and to observe the effect of Kuijieling Decoction in the above indices and to investigate the mechanism of Kuijieling Decociton on in UC.MethodsPatients of active UC with damp heat syndrome were randomly divided into the combination group with Kuijieling Decociton plus SASP and the control group with SASP.The HNP1－3protein expression was detected by S－P method.The NO and the MDA were detected by the nitrate reductase method and thiobarbituric acid (TBA)coloration.ResultsThe expression of HNP1－3was significantly correlated with that of NO and MDA.In the combination group and the control group， expressions such as HNP1－3，NO and MDA after the treatment were decreased significantly compared with those before the therapy.There was a remarkable difference between the combination group and the control group after treatment.ConclusionThe cytotoxicity with NO and MDA could be reduced by the combination therapy.Also，the rate and the intensity of perosidation could be decreased by this method.Moreover， the damage with histocyte could be reduced to the lowest degree so that the histocyte could be restored to treat the ulcerative colitis.

Ulcerative colitis;HNP1－3;NO;MDA;Kuijieling Decoction

R574.62

B

1004－745X(2010)10－1654－03

2010－07－12)