高效液相色谱法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯胶囊的含量

沈华为，易跃能，杨 华

（1.湖南省株洲市人民医院，湖南 株洲 412000； 2.湖南汉森医药研究有限公司，湖南 长沙 410008）

盐酸克林霉素棕榈酸酯是克林霉素的衍生物，体外无抗菌活性，体内经酯酶水解形成克林霉素而发挥抗菌活性，临床常用于治疗呼吸道感染、泌尿道感染、软组织感染[1-2]，并广泛用于厌氧菌引起的溃疡，对各种类型的骨髓炎有明显效果。为控制本品质量，笔者参考相关文献[3-4]建立了盐酸克林霉素棕榈酸酯胶囊的含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（安捷伦公司）；Mettler Toledo AL104电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品（上海紫爵贸易有限公司，批号为20070405）；盐酸克林霉素棕榈酸酯胶囊（湖南汉森医药研究有限公司，批号分别为20080616，20080617，20080618，20080619，20080620，20080621）；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamond C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：气溶胶（OT型）-冰醋酸 -醋酸铵 -水 -甲醇（1∶0.77∶1∶20∶480）；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样量：20μL。

2.2 溶液制备

称取60℃下减压干燥16 h的对照品适量，精密称定，置10 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为15 g/L的对照品溶液。取批号为20080616的本品20粒内容物，研细，精密称取适量（约相当于克林霉素225 mg），置25 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理20 min，加流动相至刻度，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取处方比例的辅料（约相当于主药225 mg），置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，过滤，取续滤液作为阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图1）。可见供试品溶液色谱中，盐酸克林霉素棕榈酸酯的分离度较好，理论板数大于4000，且阴性对照无干扰。

专属性试验：称取约相当于盐酸克林霉素棕榈酸酯150 mg的样品内容物细粉，共4份，分别进行热破坏（加热灼烧至褐色）、强酸破坏（加0.1 mol/L盐酸溶液10 mL，加热回流20 min，冷却，过滤，取续滤液1 mL，用氮气在40℃下吹干）、强碱破坏（加0.1 mol/L的NaOH 10 mL，加热回流10 min，冷却，过滤，取续滤液1 mL，用氮气在40℃下吹干）、氧化破坏（加1%双氧水10 mL，加热回流10 min，冷却，过滤，取续滤液1 mL，用氮气在40℃下吹干），然后分别取10 mL流动相，将残渣超声溶解后过滤，取续滤液进样20#L。结果表明，在各破坏试验条件下，相邻杂质峰与主峰间分离度均大于1.5，符合规定。

线性关系考察：取减压干燥16 h的对照品适量，用流动相配成 0.75，1.50，3.75，7.50，15.00，30.00 g/L的溶液，精密吸取20#L注入液相色谱仪，记录色谱图的主峰面积，以主峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=204950 X-15086，r=1.0000（n=6）。结果表明，盐酸克林霉素棕榈酸酯质量浓度在0.75～30.00 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2项下对照品溶液，注入液相色谱仪中，连续进样6次。结果峰面积的 RSD为0.08%（n=6）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，在配制 0，2，4，8，10，12 h 时分别进样。结果峰面积的 RSD为0.12%（n=6），表明供试品溶液在室温下12 h内稳定。

重复性试验：取批号为20080616的样品内容物，依法制备供试品溶液并测定含量。结果平均含量为99.95%，RSD=0.88%（n=6）。

回收率试验：称取9份处方量的空白辅料，每份约255 mg，置10 mL量瓶中，分别加入盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品120，150，180 mg各3份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 回收率试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取6批样品，依法制备供试品溶液，测定峰面积，以外标法计算含量。结果批号为 20080616，20080617，20080618，20080619，20080620，20080621的6批样品中，克林霉素棕榈酸酯含量分别为标示量的99.38%，99.64%，102.51%，98.48%，98.98%，99.77%。

3 讨论

方法学考察及实际样品的测定结果显示，所用方法操作简便、专属性强，结果准确可靠，提高了工作效率，可用于该产品的质量控制。6批样品的含量均在98% ～103%范围内，根据标准，考虑到大生产的情况，将本品的含量限度定为90.0%～110.0%。

[1]叶世涛.克林霉素磷酸酯在下呼吸道厌氧菌感染治疗中的应用[J].白求恩军医学院学报，2007，5（3）：160-161.

[2]袁纳新，魏 莹.克林霉素磷酸酯治疗下呼吸道感染的临床疗效[J].现代中西医结合杂志，2002，11（15）：1446.

[3]郑曦孜，亓连军.反相高效液相色谱法测定盐酸克林霉素棕榈酸酯颗粒的含量[J]. 儿科药学杂志，2007，13（6）：38-39.

[4]WS-490（X-421）-95，盐酸克林霉素棕榈酸酯标准[S].