高效液相色谱-紫外检测法测定人血浆中乌拉地尔的质量浓度

果崇慧，刘德艳，何国云

（1.河北省秦皇岛市工人医院，河北 秦皇岛 066200； 2.河北省秦皇岛市山海关区人民医院，河北 秦皇岛 066200）

乌拉地尔又称压宁定、优匹敌，是苯哌嗪取代的尿嘧啶衍生物，主要有α1-受体拮抗作用和中枢脑干血清素1A（5-HT1A）受体激动作用，临床上主要用于治疗原发性高血压、肾性高血压、嗜铬细胞瘤和心力衰竭[1-2]。大量临床试验表明，该药疗效确切，口服吸收迅速且良好，比传统α-受体阻断剂对循环的副作用小[3-4]，优点为不论有意或无意中断治疗，都不会引起血压突然上升。为满足广大患者需求，国内已研制出乌拉地尔肠溶膜控片及缓释片以替代进口制剂。笔者参考文献[5-7]中有关乌拉地尔的测定方法并进行了改进，建立了一种测定乌拉地尔在人血浆中药物浓度的高效液相色谱-紫外检测法，现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱系统，包括L-7420输液泵及L-7110紫外检测器（日本日立公司）；100 μL和 1000 μL微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）；数据采集系统Anastar Chromatography Data System（日本日立公司）。受试制剂乌拉地尔缓释片（利君制药有限公司，规格为30 mg/片，批号为20020718）；参比制剂乌拉地尔缓释胶囊（日本科研制药株氏会社，规格为30 mg/片，批号为21800）。乌拉地尔对照品（含量为99.3%）；内标盐酸丁咯地尔（山东临淄制药厂，含量大于99.5%）；乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；正己烷、二氯甲烷（分析纯，天津市博迪化工有限公司）；异丙醇（分析纯，天津市北方化玻购销中心）。空白人血浆由秦皇岛市中心血站提供。

2 方法与结果

2.1 血药浓度测定方法

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5μm，北京迪马公司）；流动相：乙腈 -0.05 mol/L 磷酸二氢铵（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长：268 nm；进样量：20μL；柱温：室温；内标：丁咯地尔。

2.1.2 溶液配制

精密称取乌拉地尔对照品25.0 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，配制成1.0 g/L的对照品贮备液；用甲醇将对照品贮备液稀释成 0.1，0.2，0.5，1.0，3.0，6.0μg/mL 的对照品溶液。精密称取内标丁咯地尔12.5 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，配制成1.25 g/L的内标贮备液；用甲醇将内标贮备液稀释成18μg/mL的内标溶液。

2.1.3 血浆样品预处理及测定

取血浆样品1.0 mL，精密加入内标溶液100μL、甲醇100μL、1 mol/L碳酸钠100μL，混匀，加入3 mL正己烷-二氯甲烷-异丙醇（20∶10∶1，V/V），涡旋混合 1 min，反复振摇 15 min，以 4000 r/min转速离心5 min，移取有机层，于40℃空气下吹干，残留物用100μL流动相溶解，进样20μL，记录色谱图。

2.1.4 方法学考察

稳定性试验：取2.1.3项下处理后的血浆样品，室温放置24 h，依法测定。结果表明，待测血浆样品在24 h内稳定。

专属性考察：分别取6名受试者的空白血浆1 mL，除不加入内标外，其余按2.1.3项下方法操作，其中一名受试者空白血浆色谱图见图1 A。将一定质量浓度的对照品溶液100μL加入空白血浆中，除不加入100μL甲醇外，其余按2.1.3项下方法操作，乌拉地尔和内标丁咯地尔的保留时间分别为4.9 min和8.0 min，色谱图见图1 B。取受试者口服乌拉地尔30 mg后2 h的血浆1 mL，按2.1.3项下方法操作，得色谱图1 C。结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰乌拉地尔及内标的测定。

图1 高效液相色谱图

标准曲线制备：取空白血浆1.0 mL，置10 mL带塞玻璃试管中，分别加入乌拉地尔对照品溶液100μL，配制成相当于血药浓度分别为 10，20，50，100，300，600 ng/mL 的血浆样品。除不加入 100μL甲醇外，按2.1.3项下方法操作，依法测定，以待测物的血浆质量浓度为横坐标、待测物与内标的峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法[8]（W=1/C2）进行线性回归，得回归方程Y=1.811 X×10-3+2.504 ×10-3，r=0.9978（n=6）。结果表明，乌拉地尔质量浓度的线性范围为10～600 ng/mL，最低定量限为10 ng/mL。

2.2 给药方法

选择24名健康自愿受试者，口服受试制剂或参比制剂30 mg（1片），于单剂量服药前（0 h）和服药后 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0 h时取静脉血5 mL；于多剂量服药后第2天起连续3 d在血药浓度波谷时取静脉血5 mL，其余同单剂量。血液经离心，所移取血浆于-20℃冷冻待测。

2.3 药-时曲线

受试者口服给药后的典型药-时曲线见图 2和图 3，24名受试者多剂量口服给药后的平均药-时曲线见图4。

图2 受试者H单剂量口服给药后的药-时曲线

图3 受试者L多剂量口服给药后的药-时曲线

图4 24名受试者多剂量口服给药后的平均药-时曲线

3 讨论

乌拉地尔的解离常数为7.10，当以氢氧化钠为碱化试剂时提取率不稳定，改用1 mol/L碳酸钠 50μL（pH 为 7～8）和100μL（pH 为 9～10），同样条件下提取，结果后者的提取率高于前者，故选择1 mol/L碳酸钠100μL作为碱化试剂。分别用乙醚、乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷 -异丙醇（100∶50∶5，V/V）进行提取，其中经前两者提取的样品内源性杂质较多，后一种溶剂的提取率最高，内源性杂质较少，故选择正己烷-二氯甲烷-异丙醇（100∶50∶5，V/V）为提取溶剂。

[1]季乃军，金天寿.乌拉地尔的药理及临床应用[J].中国医院药学杂志，1991，11（6）：282-283.

[2]王宝庆，唐 星，何仲贵，等.乌拉地尔肠溶膜控片的制备及药动学初步研究[J]. 沈阳药科大学学报，2000，17（6）：408-412.

[3]刘丽华，宫 炼.乌拉地尔治疗甲状腺围手术期高血压20例[J].河南医科大学学报，1995，30（3）：326-327.

[4]汪春英，贺为人，满益令，等.围术期乌拉地尔降压效果临床观察[J].中华麻醉学杂志，1995，15（2）：89-90.

[5]Culbertson VL，Bryant PJ，Cady WJ，et al.Acute effects of increasing doses of urapidil in patients with hypertension[J].Clin Pharmacol Ther，1986，39（6）：690-696.

[6]Zech K，Huber R，Elgass H.On-line screening for drug metabolites by high-performance liquid chromatography with a diode array UV detector[J].J Chromatography，1983，282：161-167.

[7]Langtry HD，Mammen GJ，Sorkin EM.Urapidil：A review of its pharmacodynamid and pharmacokinetic properties，and therapeutic potential in hypertension[J].Drugs，1989，38（6）：900-940.

[8]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志，1996，16（5）：343-346.