四季感冒片中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定

何鸿钦，王二丽，何荣和 ，邹国华，陈丽卿

（1.同溢堂药业有限公司，福建 漳州 363200； 2.漳州卫生职业学院，福建 漳州 363000）

四季感冒片由桔梗、紫苏叶、陈皮、防风等药味经提取加工制成，具有清热解表的功效，用于四季风寒感冒[1]。方中防风散风解表，其成分升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为色原酮类化合物[2]，文献报道具有明显的解热、镇痛及抗炎作用[3]，与本方主治功用一致，故被选作含量测定指标。笔者采用高效液相色谱法测定四季感冒片中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，报道如下。

1 仪器与试药

HP-1100型高效液相色谱仪，包括G1310A泵、G1314 UV检测器；AG135型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；KQ-500DE型医用数控超声清洗仪（昆明市超声仪器有限公司）。升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为111522-200203和111523-200203）；四季感冒片（同溢堂药业有限公司，批号分别为031001，031002，031003）；乙腈（色谱纯，德国Merck公司）；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈 -水（15 ∶85）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：254 nm；进样量：10μL。理论板数按升麻苷峰计算应不低于4000，按5-O-甲基维斯阿米醇苷计算应不低于4500。

2.2 溶液制备

取升麻苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1 mL含升麻苷0.285 mg的溶液，即得升麻苷对照品溶液。另取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1 mL含5-O-甲基维斯阿米醇苷0.345 mg的溶液，即得5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液。分别移取升麻苷对照品溶液和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液各1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成每1 mL含升麻苷0.0285 mg和5-O-甲基维斯阿米醇苷0.0345 mg的混合对照品溶液。取本品20片，除去糖衣，研细，取约700 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加20 mL甲醇，振荡，超声处理30 min，取出，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10 mL，置25 mL蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加水转移至10 mL量瓶中，用蒸馏水多次洗涤蒸发皿，合并洗液，置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，通过装量为10 mL柱体积D101型大孔吸附树脂柱（内径1.0 cm，长15 cm），流速为1.0 mL/min，先以水30 mL洗脱，弃去水液，再用5%乙醇30 mL洗脱，弃去5%乙醇洗脱液，继续用30%乙醇60 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，加水溶解，并转移至10 mL量瓶中，用蒸馏水多次洗涤蒸发皿，合并洗液至量瓶中，用离子水稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按四季感冒片标准处方量的1%，取除防风外的其他各药材，按其生产工艺制备防风阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液，依法进样。色谱图见图1。可见，阴性样品对测定无干扰。

线性关系考察：精密吸取升麻苷对照品溶液（0.0285 g/L）及5-O- 甲基维斯阿米醇苷对照品溶液（0.0345 g/L）各 1，2，4，6，8，10μL，按拟订的色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标、进样量为横坐标绘制标准曲线，得升麻苷回归方程为 Y=87.756 X+4.4019，r=0.9998（n=6）；5-O- 甲基维斯阿米醇苷回归方程为 Y=102.43 X-5.6329，r=0.9999（n=6）。结果表明，升麻苷进样量在0.0285～0.228μg范围内、5-O-甲基维斯阿米醇苷进样量在0.0345～0.345μg范围内，与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样6次，依法测定。结果升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷峰峰面积的 RSD分别为0.29% 和 0.42%（n=6），表明仪器具有良好的精密度。

稳定性试验：取同一供试品溶液，避光放置，分别于 0，2，4，8，24 h时取样，依法测定。结果升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的RSD分别为0.41%和0.76%（n=5），表明供试品溶液在24 h内相对稳定。

重现性试验：取同一批号的样品6份，依法制备供试品溶液并测定峰面积，计算含量。结果升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的 RSD分别为0.43%和0.29%（n=6）。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一样品0.35 g各5份，分别添加升麻苷对照品溶液（0.0285 g/L）4 mL和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液（0.0794 g/L）1.0 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 加样回收试验结果（n=5）

2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按拟订的色谱条件测定。结果批号为031001，031002，031003的样品中，升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总含量分别为0.3040，0.3328，0.3261 mg/片。

3 讨论

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷均可溶于甲醇，故供试品溶液的制备参考2005年版《中国药典（一部）》中防风含量测定项的方法[4]。但本品除含以上两种成分外，还含有陈皮苷、连翘苷、桔梗皂苷等多种成分，也均属于醇溶性成分。笔者发现，利用甲醇、乙醇超声提取均能将升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷提出，但乙醇的提取效果不如甲醇，杂质较多，色谱干扰大，甲醇提取稍好但也存在干扰，目标成分不能达到基线分离。为此进一步应用大孔吸附树脂进行纯化，使目标成分达到基线分离，结果不仅能减少分离柱系统的污染，而且能保证分离柱有足够的柱效并延长了使用寿命。曾参考2005年版《中国药典（一部）》采用甲醇-水系统在同一色谱条件下测定两种成分的含量[4]，结果不理想，峰形扩散，分离度达不到要求。又参考文献[5]中两种流动相系统分别测定两种成分，结果操作较麻烦。为减少操作步骤，节约试验时间，经反复试验，最后选择乙腈-水（15∶85）为本品的最佳流动相。

采用高效液相色谱法测定升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量，具有简便、准确、专属性强等特点，可用于四季感冒片的质量控制。

[1]WS3-B-2499-97，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第十三册）[S].

[2]肖永庆，李 丽，杨 滨，等.防风化学成分研究[J].中国中药杂志，2001，26（2）：117-118.

[3]薛宝云，李 文，李 丽，等.防风色原酮甙类成分的药理活性研究[J].中国中药杂志，2000，25（5）：297-299.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：102.

[5]田 菁，李发美.HPLC测定感冒清热颗粒中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷[J]. 中成药，2002，24（9）：671-673.