蒙药冬葵果的薄层色谱鉴别*

马 强 ，董 玉 ，朱晓玲 ，李树明

（1.内蒙古自治区科学技术厅，内蒙古 呼和浩特 010010； 2.内蒙古医学院药学院，内蒙古 呼和浩特 010059）

冬葵果（Fructus Malvae）系蒙古族习用药材，蒙古名玛宁占巴、额布勒珠尔其其格，为锦葵科植物冬葵 Malva verticillata L.的干燥成熟果实，夏、秋二季果实成熟时采收，除去杂质，阴干[1]。该药性凉，味甘、涩，具有利尿通淋、清热消肿、止渴等功效，在我国药用历史悠久，疗效确切，主治尿闭、淋病、水肿、口渴、肾热、膀胱热等症，临床上主要用于治疗尿路感染[2]。文献[3]报道，冬葵果中含有阿魏酸、芦丁，但本课题组以两者为指标，经薄层层析、高效液相色谱检测，发现检测结果不灵敏，专属性不强，效果不理想。本研究从冬葵果中首次提取、分离出了其主要有效成分并鉴定为咖啡酸。咖啡酸具有止痛、止血、抗氧化、抗炎症、抗风湿、抗肝毒、抗溃疡等作用[4-7]，这与冬葵果治疗尿路感染的功效相符合。2005年版《中国药典（一部）》冬葵果项下无薄层鉴别项，因此笔者建立了冬葵果药材中咖啡酸的薄层鉴别方法，用以控制冬葵果的质量。

1 仪器与试药

Sld-1型薄层色谱摄影仪（天津思利达色谱技术开发公司）；聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；硅胶（青岛海洋化工厂）；反相硅胶柱（北京金欧亚科技发展有限公司）及Sephadex LH-20（Amersham Pharmacia Biotech AB）。咖啡酸对照品（中国药品生物制品检定所）；3批冬葵果药材（采自锡盟白旗和内蒙古呼和浩特，购自内蒙古天力药业有限公司）经内蒙古医学院药学院庞秀生副教授鉴定为锦葵科植物冬葵 Malva verticillata L.的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 冬葵果化学成分研究

采用反复常压硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、反相柱层析及Sephadex LH-20柱层析对冬葵果乙酸乙酯部位进行分离。通过分离、1HNMR、13CNMR 鉴定，得到单体化合物咖啡酸（caffeic acid）。该化合物为首次从冬葵果中分离出。

分离方法：取冬葵果药材5 kg，用70%乙醇回流提取，每次2 h，减压回收溶剂至无醇味，分别以石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯部位经硅胶柱色谱（以不同比例氯仿-甲醇梯度洗脱），再经聚酰胺柱、反相硅胶柱、Sephadex LH-20柱层析后，得一黄色固体。

黄色固体：熔点221～223℃，分子式为C9H8O4。溴酚蓝反应阳性，提示为有机酸类化合物。三氯化铁反应阳性，提示含有酚羟基。

1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.17（1H，d，J=16 Hz，H-8），7.49（1H，d，J=16 Hz，H-7），表明存在一对烯氢，且为反式；6.98（1H，d，J=2 Hz，H-2），6.88（1H，d，J=8 Hz，H-5），6.73（1H，dd，J=8 Hz，2 Hz，H-6），3个芳氢说明苯环上有3个取代基，且为ABX系统。

13CNMR（CD3OD，500 MHz）δ：127.8（C-1），115.1（C-2），147.0（C-3），149.4（C-4），115.5（C-5），122.8（C-6），146.8（C-7），116.5（C-8），171.0（C-9）。

以上数据与文献中的咖啡酸数据基本一致，与咖啡酸对照品共薄层，结果 Rf值一致，混合熔点不下降，故化合物鉴定为咖啡酸。

2.2 咖啡酸薄层色谱鉴别

取本品粉末（过50目筛）1.0 g，置圆底烧瓶中，用70%乙醇加热回流2 h，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇10 mL使溶解，取上清液2 mL，上 Cleanert ODS-SPE萃取柱，流速1 mL/min，以5 mL蒸馏水冲洗，流速1 mL/min，蒸馏水洗脱液作为供试品溶液；另取咖啡酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取对照品溶液 4 μL 和供试品溶液 20 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇 -水 -冰乙酸 （3 ∶2 ∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点（图1）。

图1 冬葵果聚酰胺薄层色谱图

3 讨论

曾比较了冬葵果药材的几种提取方法（回流2 h、超声1 h、索氏提取4 h），结果表明超声、索氏提取所得总酚酸、咖啡酸的含量均不及回流提取的高，因此确定采用回流提取方法。溶剂回收为40℃减压回收至近干，否则温度过高会破坏咖啡酸等酚酸类成分，使总酚酸、咖啡酸的含量降低。冬葵果药材提取液纯化方法用Cleanert ODS-SPE柱对提取液进行纯化，能排除其他成分对咖啡酸薄层的干扰。曾比较了硅胶板[8]和聚酰胺薄膜板，后者效果更好，故选用聚酰胺薄膜板。采用聚酰胺薄膜板，分别以甲醇-水-冰乙酸（3 ∶2 ∶0.1）和氯仿 -甲醇（8 ∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视，结果前者优于后者。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：76.

[2]中国医学百科全书蒙医学编委会.中国医学百科全书：蒙医学[M].上海：上海科学技术出版社，1992：213.

[3]陈燕飞，刘乐乐，王玉华，等.薄层色谱法鉴定冬葵子中阿魏酸[J].内蒙古医学院学报，2008，30（2）：115-117.

[4]张兰珍，秦 雯，张小华，等.夏枯草不同部位中咖啡酸和迷迭香酸的含量测定方法研究[J]. 北京中医药大学学报，2007，30（5）：343-345.

[5]Catalan J，Fernandez-Alonso JI.An investigation of the possible relation between electronic structure and antirheumatic activity in the hydroxy-benzoic acids[J].Experientia，1976，23（Suppl）：177-183.

[6]Mehler EL，Habicht J，Brune K.Quantum chemical analysis of structure activity relationships in nonsteroidals antiinflammatory drugs[J].Molpharmacol，1982，22（3）：525-528.

[7]Kiso Y，Suzuki Y，Watanabe N，et al.Antihepatotoxic principles of Curcuma longa rhizomes[J].Planta Med，1983，49（3）：185-187.

[8]原 忠，余江天，苏世文.用薄层扫描法测定中药狗脊和黑狗脊中原儿茶酸及咖啡酸的含量[J]. 沈阳药科大学学报，2000，17（5）：338-340.