华蟾素片的含量及释放度测定

田 磊

（淮北矿业股份有限公司职业病防治院药剂科，安徽 淮北 235000）

华蟾素片为干蟾皮经加工制成的浸膏片，具有解毒、消肿、止痛的功效，对治疗中、晚期肿瘤及慢性乙型病毒性肝炎等有良好疗效[1]，原质量标准中无含量测定项[2]。为有效控制药品质量，笔者参考相关文献[3-4]，以制剂中主要成分吲哚类总生物碱5-羟色胺为指标，建立了华蟾素片释放度和含量的测定方法，报道如下。

1 仪器与试药

ZRS-8G型智能溶出度测定仪（天津大学无线电厂）；UV-2401型紫外分光光度计（日本岛津）；梅特勒AE-240型电子分析天平。5-羟色胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111656-200401）；华蟾素片（安徽金蟾生化股份有限公司，规格为0.3 g，批号分别为 090601，090602，090603）；盐酸、对二甲氨基苯甲醛、磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 5-羟色胺含量测定

2.1.1 溶液制备

精密称取置五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的5-羟色胺对照品9.31 mg，置50 mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品10片，除去包衣，碾细，称取约1 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）适量，超声处理10 min，放冷，用盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液5 mL，置10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.1.2 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，摇匀，加15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液（2→3）至刻度，摇匀，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中国药典（二部）》附录ⅣA]，以水作空白，在555 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.03841 X-0.00210，r=0.9999（n=6）。结果表明，5-羟色胺质量浓度在 1.862 ～18.620 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密度试验：精密量取对照品溶液4 mL，置10 mL量瓶中，加水使成5.0 mL，摇匀，加15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液（2→3）至刻度，摇匀，依法测定吸光度。结果的 RSD=0.02%（n=6），表明方法精密度较好。

重复性试验：取同一批（批号为090601）样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果每片平均含量为0.4383 mg，RSD=0.07%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一批（批号为090601）供试品溶液，于3 h内每隔30 min依法测定吸光度。结果的 RSD=0.28%（n=7），表明供试品溶液在3 h内稳定。

加样回收试验：取本品10片，除去包衣，碾细，称取约0.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分成3份，每份分别精密加入对照品溶液3，4，5 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果见表1。

表1 5-羟色胺加样回收试验结果（n=9）

2.1.3 样品含量测定

取本品10片，依法制备供试品溶液，按线性关系考察项下方法测定吸光度，用回归方程计算含量。结果批号为090601，090602，090603的样品中，每片分别含5-羟色胺0.4382，0.4345，0.4356 mg（n=3）。

2.2 释放度测定

2.2.1 测定条件选择

释放方法：本品为肠溶片，应先以盐酸溶液（9→1000）为溶剂，再以磷酸盐缓冲液（pH=6.8）为溶出溶剂。由于本品中5-羟色胺含量较低，因而在释放度测定方法选择时，宜选用2005年版《中国药典（二部）》附录ⅩD收载的释放度试验第二法并采用溶出度测定法（附录ⅩC第三法）装置试验为宜，释放介质量选用100 mL。

释放转速：取样品，每溶出杯放置5片，转速分别为50，75，100 r/min，依释放度测定方法项下方法操作，于45 min时取样，测定释放百分率。由表2可见，当转速为75 r/min和100 r/min时，5-羟色胺的45 min累积释放百分率接近，且优于50 r/min。综合考虑，选择释放转速为75 r/min。

表2 释放转速选择试验45 min时的结果

2.2.2 释放度均一性试验

取本品5片，按释放度测定方法项下方法操作，于5，10，15，30，45，60 min时分别取样，每次10 mL，然后补入10 mL已预热至37.5℃的溶剂。将取出的样品测定释放百分率，绘制释放曲线。结果见图 1。可见，样品在溶出30 min后，累积释放百分率高于70%，45 min后累积释放百分率趋于稳定。

2.2.3 释放度测定方法

取本品，每杯置5片，照释放度测定法[2005年版《中国药典（二部）》附录ⅩD第二法（二）]，采用溶出度测定法[2005 年版《中国药典（二部）》附录ⅩC第三法]装置试验。先以盐酸溶液（9→1000）100 mL为释放介质，转速75 r/min，依法操作，经2 h后弃去盐酸溶液，检查每片肠膜均不得有裂缝，继以磷酸盐缓冲液（pH=6.8）100 mL 为 释 放介质，经45 min时取溶液适量，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，精密吸取滤液5 mL，置10 mL量瓶中，加15%对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液（2→3）至刻度，摇匀，放置30 min，照分光光度法[2005年版《中国药典（二部）》附录ⅣA]，以水作空白，在555 nm波长处测定吸光度。另精密称取5-羟色胺对照品适量，加水使溶解并配制成相应的对照品溶液，依法测定其吸光度。以外标法计算，计算结果与每片中的平均含量相比较，即得每片的释放百分率。

图1 3批样品释放曲线

3 讨论

对华蟾素片中吲哚类生物碱的含量测定采用分光光度法，其基本原理是吲哚类生物碱分子中的芳伯氨基可与芳醛（如对二甲氨基苯甲醛）发生缩合反应，在酸性溶液中生成有色的希夫氏碱，这种有色物质在某个波长处有明显的吸收峰。试验结果表明，该方法合理、有效，专属性强，显色稳定且重现性好。样品的释放度测定中，样品的批内释放均一性与批间释放重现性均较好，表明建立的释放度测定方法可行。

本试验建立的释放度和含量测定方法简便、准确，灵敏度高，且费用低廉，与高效液相色谱法等[5-6]方法相比，更适合于基层医院制剂或制药企业生产工艺流程中间环节的质量监控。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知（中药卷）[M].北京：人民卫生出版社，2005：61-62.

[2]WS3-B-2687-97，中华人民共和国卫生部颁药品标准·中药成方制剂（第十四册）[S].

[3]WS3-B-2132-96，中华人民共和国卫生部颁药品标准·中药成方制剂（第十一册）[S].

[4]WS3-B-3045-98，中华人民共和国卫生部颁药品标准·中药成方制剂（第十六册）[S].

[5]张红霞，于 辉，张 磊，等.HPLC法测定华蟾素注射液中华蟾素含量及有关物质[J]. 武警医学，2008，19（8）：722-723.

[6]王建化.RP-HPLC法测定华蟾素片中华蟾毒配基、酯蟾毒配基的含量[J]. 中国中医药科技，2009，16（2）：125-126.