高效液相色谱法测定妇乐颗粒中大黄素和大黄酚含量

2010-06-01汪培钧张文婷

中国药业 2010年8期

盛燕，汪培钧，张文婷，陈勇

（1.浙江省食品药品检验所，浙江杭州 310004； 2.杭州天目山药业股份有限公司，浙江临安 311300）

妇乐颗粒处方由忍冬藤、大血藤、大黄（制）等10味中药组成，具有清热凉血、活血化瘀、消肿止痛的功效，用于急性盆腔炎、急性附件炎、急性子宫内膜炎等妇科炎症引起的带下、腹痛。目前，国内有6家企业生产该品种，临床应用广泛。方中制大黄有泻火解毒、逐瘀通经等作用，大黄素、大黄酚为主要活性成分[1]。为更好地控制产品质量，保障用药安全与有效，笔者参考有关文献[2-3]，建立了同时测定妇乐颗粒中大黄素、大黄酚含量的高效液相色谱（HPLC）法，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100系列液相色谱仪（自动进样分析）。大黄素、大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110756-200110，110796-200513，供含量测定用）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯；妇乐颗粒（杭州天目山药业股份有限公司，批号为 20061113，20061114，20061115）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Zorbax Extend C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -0.1%磷酸溶液（80 ∶20）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃ ；检测波长：265 nm。在此条件下各组分分离良好，阴性对照品溶液对测定无干扰（图1），理论塔板数以大黄素峰计算应不低于8 000。

2.2 溶液制备

取大黄素、大黄酚对照品各适量，精密称定，分别加甲醇制成每1 mL含 6 μg和10 μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的样品，研细，取约0.3 g，精密称定，置烧瓶中，加8%盐酸溶液10 mL，再加三氯甲烷25 mL，加热回流1 h，放冷，混合液移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入同一分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷振摇提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，减压回收三氯甲烷至干，残渣加甲醇适量，微热使溶解，放冷，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含大黄的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取大黄素对照品（10.54 μg/mL）、大黄酚对照品（11.12 μg/mL）混合溶液 1，2，4，8，16，20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量（μg）为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程大黄素为 Y=4 606.6 X-4.613 7，r=0.999 9（n=6），结果显示进样量在0.010 54～0.210 80 μg范围内与峰面积有良好线性关系；回归方程大黄酚为 Y=6 083.4 X-6.716 8，r=1.000 0（n=6），结果显示进样量在 0.011 12 ～0.222 40 μg范围内与峰面积有良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一供试品溶液，连续进样。结果大黄素、大黄酚峰面积的 RSD分别为0.77%和0.50%（n=6）。

重现性试验：精密称取同一样品6份，按供试品溶液制备方法制备并测定。结果大黄素的平均含量为106.67 μg/g，RSD=2.05%（n=6），大黄酚的平均含量为 161.72 μg/g，RSD=1.45%（n=6），总含量的平均含量为 268.39 μg/g，RSD=1.49%（n=6）。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，于 0，4，9，13，21 h 时分别进样10 μL。结果大黄素、大黄酚峰面积的 RSD分别为0.53%和0.52%（n=5），表明供试品溶液在21 h内基本稳定。

加样回收试验：精密称取已知含量样品6份，精密加入大黄素、大黄酚对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，测定峰面积并计算回收率。结果见表1。