金标法与酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的方法学比较

066100 北京军区北戴河疗养院 李岩 姜梅 陈松楠 李娜

乙型肝炎是目前流行最广泛、危害最严重的病毒性肝炎之一[1]，我国为乙型肝炎病毒感染的高流行区，正常人群的乙肝表面抗原(HBsAg)携带率一般为10%～15%[2]。目前检测HBsAg的方法以酶联免疫吸附法 (ELISA)为代表，该法以其操作简便、快速、灵敏、准确、重复性好、无放射污染等特点被广泛使用；金标法(Gold immnnochromatography，GICA)是在ELISA基础上发展起来的一种检测技术，由于其具有操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需特殊设备等优点，也广泛应用于HBsAg的初筛。本文对两种方法检测结果进行比较，探讨其差异性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 来自2009年4～8月北京军区北戴河疗养院体检人员、门诊患者及疗养人员1 024例，其中男615例，女409例。抽取静脉血3 mL，标本静置后离心取血清。

1.2 方法

1.2.1 金标法 严格按照使用说明书的要求操作，在层析扩散正常的情况下，质控区出现1条紫红色条带，测试区未出现紫红色条带为阴性；质控区和测试区均出现紫红色条带为阳性；仅测试区出现，质控区未出现紫红色条带，结果无效。HBsAg金标试纸条加样后15～20 min观察结果，30 min后出现的反应线视为无效。

1.2.2 ELISA 采用双抗体夹心法原理在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb)，配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的HBsAg。严格按照说明书进行操作。

2 试剂与仪器

金标法快速测试条由浙江杭州艾康生物技术有限公司提供(批号：200805164/d)，ELISA试剂盒由北京万泰生物药业股份有限公司提供(批号：X20090101)，酶标仪：Rayto6000，洗板机：Rayto3000，恒温箱：WMZK-02，加样器：M148023。

3 结果

金标法与ELISA检测HBsAg的比较，在1 024份标本中ELISA检出HBsAg阳性92份，阳性率为8.98%；金标法有5份假阴性，9份假阳性，阳性率为9.37%，灵敏度为94.56%，特异度为99.03%。两法结果经配对计数资料的χ2检验，χ2＝0.046 9，结果显示两种方法测定的HBsAg结果间差异无统计学意义，P＞0.05。但漏检率仍为5.4%，误差率为0.88%，准确度为98.63%(表1)。

表1 金标法与ELISA法检测结果比较

4 讨论

用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗(HBsAg)单克隆抗体HBsAb，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清或血浆中HBsAg。

本实验结果表明，金标法与ELISA法的灵敏度有差异，金标法的灵敏度稍低于ELISA法[3-4]。目前，国产的HBsAg胶体金试纸条检测灵敏度已达到1 ng/mL[5]，而ELISA试剂的灵敏度可达0.5 ng/mL，这可能是造成ELISA法检测弱阳性标本金标法检测阴性的主要原因，还有金标法存在的一个重要的问题就是层析的速度，如果速度过快，HBsAg未能与试纸条上的HBsAb结合，就越过了检测线，弱阳性样本还未显示，这也可能导致漏检。国内作者报道，由于金标法易受环境、湿度、反应时间及加样量的影响，对于低滴度HBsAg感染者极易造成漏检[6]。ELISA法检测HBsAg以灵敏度高、特异性强、可进行定量和半定量测定尤为突出，重复性好，可进行批量检测，但操作步骤相对繁琐，试剂实际要求严格，影响因素多。因此实验室要结合工作情况合理选用试验方法。

[1]叶维法，钟振义.肝炎学大典[M].天津：天津科学技术出版社，1996：463-515.

[2]姜双应.青海省病毒性肝炎血清流行病学调查[J].中国病毒性肝炎血清流行病学调查(下卷)，1997，7(1)：224.

[3]陈瀑，康红.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎的评价[J].临床输血与检验，2003，5(1)：30-31.

[4]曾章新，刘文星，乐忠勇，等，胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价[J].中华医学检验杂志，1999，22(6)：327-329.

[5]周继文，戎广亚，杨守纯，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原[J].中华医学检验杂志，1998，21(1)：30.

[6]施纪问，徐简华，温惠萍.ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的比较[J].现代检验医学杂志，2005，20(5)：48-49.