膜细胞骨架连接蛋白和黏附分子CD44v6在乳腺癌组织中的表达及其意义

王如美,时志民 ,郝玉栓

(河北工程大学医学院,河北邯郸056004)

膜细胞骨架连接蛋白(Ezrin)是ERM(ezrin-radixin-moesin)蛋白家族成员之一,对细胞的黏附、运动等起重要作用。近年来有关Ezrin对肿瘤细胞黏附分子的调节,及其在肿瘤发生、发展及浸润转移中的作用的研究渐被重视[1]。分化抗原(cluster of differentiation,CD)CD44家族是单链细胞表面I类跨膜糖蛋白,属于黏附分子。根据基因表达模式分为标准型CD44(CD44s)和变异型CD44(CD44v),CD44v6作为CD44v主要成员之一,在多种人体恶性肿瘤的发生和浸润转移过程中发挥重要作用[2]。研究表明Ezrin与CD44能形成复合体影响恶性肿瘤浸润转移[3]。本研究应用免疫组化 SP法测定 Ezrin、CD44v6在乳腺癌组织中的表达,探讨Ezrin、CD44v6与乳腺癌发生、发展、浸润转移的关系及二者的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2007年1月-2008年12月在河北工程大学医学院病理教研室行病理活检确诊的56例乳腺癌患者为研究对象。患者均为女性,年龄28-75岁,中位年龄52岁,患者术前均未进行任何治疗。手术标本均统一重新切片HE染色确定病理诊断,临床病理资料齐全。56例乳腺癌患者中有17例伴腋淋巴结和锁骨上淋巴结转移;其中浸润性导管癌、导管内癌33例,浸润性小叶癌23例。参照Elston等[4]方法,并进行改良,对56例乳腺癌进行分级:Ⅰ级 15例,Ⅱ级20例,Ⅲ级 21例。按照《AJCC肿瘤分期手册》(第六版)TNM分期:Ⅰ期17例,Ⅱ期24例,Ⅲ+Ⅳ期15例。标本常规取材,10%甲醛固定,石蜡包埋切片(切片厚4 μ m),常规HE染色。同时取30例患者的癌旁正常组织作为对照组。

1.2 方法 兔抗人Ezrin单克隆抗体(cell signaling产品,编号:3142);鼠抗人CD44v6单克隆抗体(编号:ZM-0052),即用型SP试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化染色采用SP法。微波抗原修复,免疫组化染色过程按试剂盒说明进行操作,苏木素衬染。

1.3 结果判定 用已知阳性的胃癌组织作为阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照。光镜下观察,Ezrin、CD44v6阳性表达定位于细胞膜和细胞质,呈棕黄色颗粒(见图1、2)。计数1 000个肿瘤细胞,阳性细胞数＜5%为(-),5%-25%为(+),26%-50%为(++),＞50%为(+++)。

图1 乳腺浸润性导管癌Ezrin的表达情况(SP×400)

图2 乳腺浸润性导管癌CD44v6的表达情况(SP×400)

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件对实验数据进行统计学分析,计数资料的比较采用χ2检验及Fisher确切概率法,等级资料的相关性采用Spearman等级相关分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ezrin和CD44v6在乳腺癌组织和正常组织中的表达 Ezrin、CD44v6在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为 62.50%(35/56)和76.79%(43/56),均高于在正常乳腺组织中的阳性表达率16.67%(5/30)和23.33%(7/30),差别均有统计学意义(χ2值分别为16.495和22.933,P＜0.05)。

2.2 Ezrin和CD44v6的表达与临床病理指标的关系 Ezrin、CD44v6的表达与肿瘤的大小、组织学分级、TNM分期和淋巴结转移有关(见表1)。

表1 不同病理情况下Ezrin和CD44v6的表达情况

2.3 乳腺癌组织中Ezrin和CD44v6表达的关系Spearman等级相关性分析结果表明,Ezrin与CD44v6的表达呈正相关(r=2.839,P＜0.05,见表2)。

表2 乳腺癌组织中Ezrin和CD44v6表达的关系

3 讨论

Ezrin为膜细胞骨架连接蛋白,在生理状态下,Ezrin 是将膜蛋白(如 CD44、c-Met、E-Cadherin 、ICAM-1和ICAM-2等)与肌动蛋白细胞骨架连接起来的桥接蛋白,这种连接不仅是结构上的,也是功能上的[5]。通过介导膜与细胞骨架的连接,Ezrin在细胞形态改变、运动、黏附及信号转导等方面发挥重要作用。Ezrin的异常表达将导致细胞生物学行为的改变。Shen等[6]在对食管癌进行研究时发现,能够发生远处转移的SHEEMT细胞系中Ezrin表达显著高于不发生远处转移的SHEEIMM细胞系。在乳腺癌的研究中,把过表达野生型Ezrin的鼠乳腺肿瘤细胞AC2M2接种到小鼠乳腺脂肪垫中,这些小鼠均发生肺部转移[7]。本研究结果显示,Ezrin在乳腺癌组织中的表达(62.50%)显著高于在正常乳腺组织中的表达(16.67%),提示Ezrin可能参与了乳腺癌的发生、发展过程。本研究还显示,Ezrin高表达与肿瘤的大小、组织学分级、临床TNM 分期、淋巴结转移有关。

CD44是分布极为广泛的一组细胞表面跨膜糖蛋白,参与细胞与细胞、细胞与间质之间的特异性粘接,CD44v6为其变异体。目前认为CD44v6主要参与瘤细胞与宿主基质的黏附,在癌细胞侵袭和转移过程中起促进作用。CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤,如结肠癌、胃癌、乳腺癌等的发生、发展、侵袭和转移密切相关[8-9]。本研究显示CD44v6高表达与原发肿瘤的大小、组织学分级、临床TNM分期等指标有关,与Ma等[9]的研究结果基本一致。Ezrin与CD44可以形成复合物,共同参与肿瘤的浸润、转移[10]。在细胞内Ezrin作为CD44v6的锚定分子,使其与细胞骨架连接起来,进而改变肿瘤细胞的运动能力,同时与细胞外基质中配体结合,导致肿瘤细胞的形态、游走性发生改变,为肿瘤细胞的迁移奠定基础。本研究结果表明,乳腺癌组织中Ezrin与CD44v6的表达呈正相关。Ezrin与CD44v6的高表达能相互作用影响乳腺癌的浸润、转移,并通过CD44v6发挥作用。

本研究提示Ezrin、CD44高表达与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关,因此我们认为联合检测Ezrin、CD44的表达在判断乳腺癌的转移、生物学行为等方面有重要临床价值。

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