染色体22q12上THOC5和ADRBK2基因在人脑胶质瘤组织中mRNA表达

田 宇,王锦鸿,綦 斌,胡国章,李朝晖,祝子峰,王 欣

(1.吉林大学中日联谊医院神经外科,吉林长春130033;2.吉林大学第一医院;3.吉林大学第二医院)

胶质瘤的发生源于多种基因的相互作用,这些基因的位置涉及染色体22q[1]。新近研究表明染色体22q12上THOC5和ADRBK2基因可能参与多种肿瘤细胞的RNA编辑过程[2]。关于这两种基因在胶质瘤中的表达,目前文献报道极少[3]。我们观察了人脑胶质瘤肿瘤组织中这两种基因mRNA表达,报道如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料 2008年3月至2008年12月收集吉林大学中日联谊医院和吉林大学第一医院神经外科17例胶质瘤标本,按2000年WHO神经系统肿瘤分类标准进行分级,其中低恶性程度(WHOⅠ-Ⅱ级)10例,高低恶性程度(WHO Ⅲ-Ⅳ级)7例。此外,8例取自脑外伤患者的脑组织作为正常对照。

1.2 RNA提取 细胞总RNA用trizol(promega,USA)提取,按操作说明进行。

1.3 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测THOC5和ADRBK2基因表达 THOC5和ADRBK2基因PCR引物序列,见表1。RT-PCR按常规进行。用β-actin引物进行阳性参照PCR,β-actin引物序列,见表1。PCR反应体系包括:10×Buffer 5 μ l,Mg2+5 μ l,2.5 mmol·L-1dNTP 4μ l,50 mmol·L-1的正反向引物各 1 μ l,cDNA 10 μ l,Taq DNA 聚合酶 1 μ l,补足水至50 μ l反应体系。扩增在基因扩增仪(Bio-Rad,日本)中进行30个循环,PCR反应条件,见表2。每个PCR反应都进行一个不加逆转录酶的反应,作为阴性对照。PCR产物用溴乙锭染色的1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,紫光灯下拍照。

表1 ADRBK2,THOC5基因和β-actinPCR引物序列

表2 ADRBK2和THOC5基因基因PCR反应条件

1.4 图像分析方法 半定量分析用计算机图像分析仪LUZEX-F(NIRECO,日本)进行,基因表达水平用THOC5或 ADRBK2基因/β-actin灰度比值 ×100表示,每个数据重复测量3次。

2 结果

2.1 ADRBK2基因mRNA表达 RT-PCR检测,ADRBK2基因在正常人脑组织和人脑胶质瘤肿瘤组织中均存在弱表达(见图1)。图象分析结果:ADRBK2基因表达水平,在正常脑组织中和胶质瘤肿瘤组织中分别为:20.5±8.7,17.9±9.6。统计分析表明:ADRBK2基因在人脑胶质瘤肿瘤组织中表达水平与在正常人脑组织中表达水平比较,无显著性差异(P＞0.05)。结果表明:ADRBK2基因在人脑胶质瘤肿瘤组织中未见异常表达。

2.2 THOC5基因 mRNA表达 RT-PCR方法检测,THOC5基因在正常人脑组织中弱表达,在17例人脑胶质瘤肿瘤组织中有9例高表达,见图2。其中,THOC5基因在低恶性程度胶质瘤中6例高表达,见图2-1;在高恶性程度胶质瘤中3例高表达,见图2-2。

2.3 图象分析 THOC5基因表达水平,在正常脑组织中为:20.0±9.1;在胶质瘤肿瘤组织中为:33.5±16.9。统计分析表明:THOC5基因在胶质瘤肿瘤组织中表达与在正常人脑组织中表达比较,有显著性差异(P＜0.05)。结果表明:THOC5基因在人脑胶质瘤肿瘤组织中高表达。

图1 ADRBK2基因在正常人脑组织和人脑胶质瘤肿瘤组织中mRNA表达

图2 THOC5基因在正常人脑组织和人脑胶质瘤肿瘤组织中mRNA表达

3 讨论

胶质瘤相关基因在染色体上的位置涉及1p,7,8q,9p,10,12q,13q,19q,20和22q[1]。新近研究表明染色体22q12上THOC5和ADRBK2基因可能参与包括胶质瘤在内的多种肿瘤细胞的RNA编辑过程[2]。因此,胶质瘤中THOC5和ADRBK2基因的表达,值得关注。

ADRBK2基因,即adrenergic beta receptor kinase 2,中文译为:肾上腺β受体激酶2。ADRBK2基因还被称为:BARK2,GRK3,beta adrenergic receptor kinase 2。检索文献,未见胶质瘤组织中ADRBK2基因表达的报道。比较接近的报道内容包括:大鼠胶质瘤C6细胞中肾上腺 β2受体(β2-adrenergic receptors,β2AR)、肾上腺 β受体(β-adrenergic receptor,β-AR)与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)之间存在相互调节作用,而且调节过程与基因的转录过程有关[4,5]。本实验观察的结果表明:ADRBK2基因在人脑胶质瘤肿瘤组织中未见异常表达。

THOC5(THO complex 5)基因,又被称为Fmip,PK1.3,fSAP79,C22orf19,NF2基因。关于THOC5基因的研究,Carney等报道[6]:THOC5参与脂肪细胞的分化,并且参与转录因子信号的传递。Katahira等[7]发现THOC5参与mRNA合成的过程,即转录过程。关于THOC5基因在胶质瘤中的表达,Suarez-Merino等报道[3]儿童胶质瘤组织中与NF2基因(THOC5)相互作用的基因(interacting gene)——SCHIP-1基因存在异常表达。Suarez-Merino等在上述研究中,虽未直接观察胶质瘤组织中THOC5基因的表达,但证实了胶质瘤组织中SCHIP-1基因异常表达。由于SCHIP-1基因与THOC5基因是相互作用的基因,因此胶质瘤组织中存在THOC5基因异常表达的可能。

本实验通过RT-PCR及图像分析方法检测发现:在正常脑组织中低表达的THOC5基因,在人脑胶质瘤肿瘤组织中高表达。本实验采用的是半定量方法,取得的结果有待于进一步应用其他方法验证。本实验结果初步提示:THOC5基因高表达可能与胶质瘤的发生、发展相关。

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