乳腺癌外周血微转移的临床病理意义

李秀娟,李 彤,孙中华

(1.吉林省医学期刊社,吉林长春130061;2.吉林大学第二医院;3.吉林大学第一医院)

目前很多学者认为乳腺癌早期就是一种全身性疾病,血行转移可以发生在疾病的早期阶段[1]。本研究采用流式细胞术检测乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞含量(Peripheral blood cancer cell,PBCC),以了解肿瘤微小转移情况。

1 材料与方法

1.1 研究对象 均为女性。住院患者77例,年龄23-75岁,中位年龄48岁,其中浸润性导管癌41例,低分化腺癌9例,单纯癌6例,髓样癌5例,浸润性小叶癌16例;乳腺良性肿瘤18例,年龄20-69岁,中位年龄45岁;健康体检者 20例,年龄21-65岁,中位年龄39岁。所有患者均经细胞学或组织病理学证实,并且均未接受任何治疗。

1.2 试剂与仪器

CD45-PE购于 Immunotech公司,Anti-Cytok-eratin-FITC购于 Dako公司。FASCalibur流式细胞仪(美国BD公司)。

1.3 方法

采集各组外周血样本 1 ml,抗凝,加入 30 μ l CD45-PE,震荡混匀后,室温放置30 min,加入OptilyseC裂解液2 ml,裂解至透明,300 rpm/min,离心5 min,将分离出的白细胞悬浮于0.025%Triton X-100溶液5 min,缓冲液洗 1 次 ,悬浮于100 μ l Anti-Cytokeratin-FITC,室温30 min后加入缓冲液洗涤2次,最后加入0.5 ml的1%多聚甲醛固定,上机测定,每例样本检测1×106-3×106个细胞,结果用每1/106个细胞中CK+/CD45-细胞数来表示外周血肿瘤细胞含量,未检测到肿瘤细胞为阴性。正常对照组、乳腺良性肿瘤组样本作对照,乳腺癌手术标本用机械法制成单细胞,稀释后掺入正常外周血中作为阳性对照。

1.4 统计学分析

应用SPSS10.0软件包进行统计学分析,两样本率的比较用 χ2检验,两样本均数的比较采用 t检验,P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌外周血肿瘤细胞含量与年龄和肿瘤大小的关系

正常对照组和乳腺良性肿瘤组外周血均未发现肿瘤细胞,在100 μ l健康人外周血中掺入20个肿瘤细胞的阳性对照,共检测出1.7×105个细胞,其中CK+/CD45-的肿瘤细胞为17个。各组年龄和肿瘤大小的乳腺癌外周血肿瘤细胞含量差异无统计学意义,结果见表1。

表1 乳腺癌外周血中肿瘤细胞含量与年龄、肿瘤大小的关系

2.2 乳腺癌外周血肿瘤细胞含量与TNM分期、病理类型和有无淋巴结转移的关系

由于病理类型中低分化腺癌、单纯癌、髓样癌例数较少,未进行与病理类型的相关性统计分析,只进行了浸润性导管癌和浸润性小叶癌的分析,这也是临床较常见的病理类型。Ⅲ+Ⅳ期肿瘤细胞含量和阳性例数均高于Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义;N1高于N0,差异有统计学意义;而浸润性导管癌和浸润型小叶癌之间无统计学差异。结果见表2。

表2 乳腺癌外周血中肿瘤细胞含量与TNM分期和病理类型的关系

3 讨论

微转移是指常规病理学检查不能检测到的存在于非血液系统恶性肿瘤患者体内的微小转移灶。常规的病理检查无法发现外周血的微转移,尚不能满足乳腺癌个体化治疗的需要。有报道[2]采用免疫组化RT-PCR定量PCR等方法检测肿瘤患者外周血微转移,存在着易污染、特异性低无法精确定量等问题,限制了其在临床中的应用[3]。流式细胞术可以对单细胞进行分析和分选,可以快速定量检测[4、5]。本研究采用细胞角蛋白和CD45双色免疫标记技术,多参数流式细胞仪检测外周血孤立肿瘤细胞含量。Ⅲ+Ⅳ期阳性率和肿瘤细胞含量高于Ⅰ+Ⅱ期,差异有统计学意义(P＜0.05),能够反映肿瘤负荷。有淋巴结转移的阳性率和肿瘤细胞含量高于无淋巴结转移,差异有统计学意义(P＜0.05),值得注意的是34.3%的腋窝淋巴结阴性患者外周血中仍发现大量肿瘤细胞,可见肿瘤细胞血行微转移为判断病情、指导治疗、动态监测复发提供了更准确的依据,较腋淋巴结更能反映肿瘤细胞的全身播散状况。据报道有近30%腋淋巴结阴性患者于术后5年内复发、转移而导致死亡[6],这是否意味着本研究中腋窝淋巴结阴性但发生外周血微转移的这部分患者,会在几年后复发或转移,仍有待进一步随访研究。

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