细胞遗传学联合免疫细胞化学检查在首诊非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯中的应用

王 娜,谢守军,申兴斌,武英伟,宗春光

(1.承德医学院附属医院ICU,河北承德067000;2.承德医学院附属医院检验科;3.承德医学院附属医院病理科)

非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓(NHL bone marrow involvement,NHL-BMI)比较常见,因此通过骨髓穿刺判断是否为NHL-BMI对淋巴瘤的诊断甚或临床分期诊断具有非常重要意义。目前有关骨髓活检组织病理联合免疫组化应用于诊断NHL-BMI的报道较多[1,2],而骨髓涂片细胞形态、染色体核型联合骨髓穿刺标本分离的单个核细胞进行免疫细胞化学用于淋巴瘤诊断的报道很少。本文回顾性分析了24例NHL-BMI的细胞遗传学、免疫细胞化学以及骨髓涂片特点,对其进行探讨,以提高诊断符合率。

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取2004年1月-2008年1月在我院住院并确诊的的资料较完整的NHL-BMI患者24例。其中男18例,女6例,平均年龄50岁(12-83岁)。均为初诊患者,所有患者均行淋巴结或结外肿瘤病理检查,骨髓涂片、染色体以及免疫细胞化学检查。NHL诊断和临床分期标准参照《血液学诊断及疗效标准》[3]。

1.2 仪器及试剂 Applied Imaging公司CytoVisionTM染色体成像分析系统;苏木素染液、瑞氏-姬姆萨染液购自珠海贝索生物技术有限公司;免疫组化抗体购于晶美生物公司。

1.3 实验方法

1.3.1 免疫细胞化学染色 取骨髓液3-5 ml肝素抗凝,Ficoll液分离单个核细胞,用PBS洗涤3次,调细胞浓度为1-2×106/ml,甩片凉干。甲醇∶丙酮(1∶1)固定细胞,置于10 mmol/L的 PBS液洗涤 3次,每次2分钟,滴加1抗,4℃冰箱湿盒中过夜,然后PBS液洗涤3次,每次2分钟,再加入生物素化酶联2抗,室温湿盒中放置30-45分钟,PBS洗涤3次,每次2分钟,二氨基联苯胺(DAB)液显色。显微镜下观察显色情况,适时流水终止反应,苏木素复染细胞核。细胞膜浆或细胞核中见到明显的棕黄色为细胞阳性。根据需要采用不同抗体组合。

1.3.2 细胞遗传学分析 取患者初诊治疗前的骨髓,经24-48 h培养后,收集细胞常规制片,R显带,分析中期细胞数16-28个,根据细胞遗传学国际命名体制(ISCN,1995)对核型进行描述。

2 结果

2.1 骨髓涂片细胞形态 弥漫性大B细胞淋巴瘤5例:肿瘤细胞形态多样,细胞胞体大,胞质量丰富嗜碱,胞核略不规则,染色质细致,核仁明显。B淋巴母细胞淋巴瘤1例:瘤细胞中等大小,浆量少,胞核可见切迹裂纹,染色质细致,易见核仁。小淋巴细胞性淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病1例:瘤细胞胞体小,浆量少,胞核规则,染色质致密,无核仁。伯基特淋巴瘤1例:胞体大,浆量丰富,空泡明显呈蜂窝状,胞核规则,染色质细致,核仁明显。滤泡性淋巴瘤1例:瘤细胞小,浆量少,胞核多规则,部分可见裂纹,染色质致密,未见核仁。脾边缘带B细胞淋巴瘤1例:瘤细胞中等大小,胞质量中等、淡染,核形规则,染色质较粗,无核仁。B细胞淋巴瘤未能分类6例:瘤细胞胞体小,浆量少,胞核规则,染色质致密,无核仁。其中两例背景嗜酸细胞明显增多。间变性大T细胞淋巴瘤1例:胞体大,多型性,胞质量丰富,空泡明显,胞核大,多为卵圆形,亦可见切迹、扭曲、肾形核,染色质细网状,核仁明显。浆细胞增多,组织细胞易见。鼻型NK/T细胞淋巴瘤1例:瘤细胞形态多样,小到中等,部分大细胞呈空泡状,胞核扭曲多型性,细网状,核仁不明显。背景伴有巨噬细胞、嗜酸细胞、浆细胞、组织细胞增生。血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤1例:胞体小到中等大,胞质量少、淡染,核形不规则,染色质细致,可见小核仁。外周T细胞淋巴瘤3例:胞体大小不一,多型性,胞浆量不等,胞核规则。背景混有大量嗜酸细胞、浆细胞、组织细胞、吞噬细胞等。T细胞性淋巴瘤未能分型2例:瘤细胞浸润较轻,胞体中等大,胞质少,核形规则,染色质较细致,无核仁。背景细胞成分复杂,吞噬性组织细胞明显增多。

2.2 免疫细胞化学及染色体核型 本组16例B细胞淋巴瘤骨髓单个核细胞都表达CD20、CD79a,FCL还同时表达CD10、BCL-6,B-LBL表达 CD10、TdT,SLL/CLL表达 CD5、CD23。DLBL和SMZL除表达CD20、CD79a外,无其它特异性抗体的表达。8例T细胞淋巴瘤都表达CD3,其中6例表达CD45RO。除表达CD3外,ALCL-T还表达CD30,NK/T-NL表达CD56,3例PTCL-NOS中2例有CD68表达。本组结果显示有染色体核型异常的病例占54%(13/24),4例淋巴瘤白血病患者均检出异常核型;13例NHL骨髓浸润患者中6例检出异常核型,余7例骨髓轻度受累患者中2例为异常核型。免疫细胞化学及细胞遗传学资料见表1。

3 讨论

本组淋巴瘤细胞浸润骨髓数量不等,以原始细胞型和小淋巴细胞型为主者,骨髓受累较重,瘤细胞形态特点明晰,易于辨认和诊断。而以大细胞型为主者,骨髓受累多较轻,瘤细胞散在分布于造血细胞和反应性细胞间,易误诊漏诊。B淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病瘤细胞染色质细致、疏松、浅染,易见核仁,表达早期抗原标志CD10、TdT。小淋巴细胞性淋巴瘤/慢性淋巴细胞白血病(SLL/CLL)瘤细胞染色质粗糙、致密、深染,无核仁,除表达CD20、CD79a外,还表达CD5、CD23,上述特点可作为与反应性淋巴细胞增生的鉴别。DLBL瘤细胞胞体大,形态偏幼稚,容易与原始粒细胞、红细胞、巨核细胞、异常组织细胞、骨髓转移瘤细胞混淆,通过仔细辨认瘤细胞形态,结合免疫细胞化学表达 CD20、CD79a,而 MPO 、CD13、血型糖蛋白 A、CD41、CD68、α-NAE、EMA、CK均为阴性,可以进行鉴别。本组NK/T-NL、PTLC和部分DLBL骨髓涂片瘤细胞背景中伴有嗜酸细胞、浆细胞、组织细胞、吞噬细胞等反应性细胞明显增多,提示淋巴瘤与骨髓激惹现象密切相关。因此在骨髓涂片发现少量分类不明细胞伴反应细胞明显增多时,在排除结核、结缔组织病、感染相关噬血细胞综合征后,应高度怀疑有无淋巴瘤可能。另外特别强调的是,部分淋巴瘤侵犯骨髓,呈结节型灶性增生,1次骨髓穿刺常常漏检,多次多部位穿刺可能有助于疾病诊断,本组有2例患者经3次骨穿方确诊为淋巴瘤。

表1 13例有染色体核型异常的NHL患者的骨髓免疫细胞化学及细胞遗传学特征

本文结果表明,骨髓单个核细胞免疫细胞化学对淋巴瘤的诊断甚或分型具有重要意义。CD20和CD79a对B细胞来源、CD3对T细胞来源淋巴瘤有诊断价值。FCL表达 CD10、BCL-6,ALCL-T CD30、CD45RO强阳性表达。SLL/CLL CD5、CD23阳性。BLBL表达早期抗原标志CD10、TdT。结合细胞形态可对大部分淋巴瘤进行诊断分型。

有90%的淋巴瘤患者有克隆性染色体异常,不同类型常有特异性的改变[4,5]。如滤泡细胞淋巴瘤常发生t(14;18);伯基特淋巴瘤t(8;14);套细胞淋巴瘤t(11;14);间变性大细胞淋巴瘤t(2;5);弥漫性大细胞淋巴瘤易见t(3;var)等。本组结果也证实了部分染色体核型与淋巴瘤分型相关,其中1例ALCL发生罕见的t(2;3)(p23;q21),但本组异常核型检出率较文献报道低。本文7例骨髓轻度受累患者中2例检出核型异常。薛永权等亦报道[6],部分淋巴瘤患者的骨髓像细胞形态显示为正常,但检出异常染色体核型。上述结果提示细胞遗传学检查对发现NHL早期骨髓浸润有独特的诊断价值。

在无法得到浅表淋巴结活检标本时,通过骨髓涂片细胞形态学、免疫细胞化学、细胞遗传学联合检查有时对淋巴瘤的诊断可能提供诊断依据,避免进一步有创性检查。

[1]肖家诚,金晓龙,袁 菲.骨髓活检组织淋巴瘤的病理诊断和分型[J].中华病理学杂志,2004,33(2):120.

[2]刘恩彬,陈辉树,杨晴英,等.非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓的病理形态及免疫表型特点分析[J].中国肿瘤临床,2005,32(16):923.

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[5]Kyle RA,Rajkumar SV.Monoclonal gammopathy of undetermined significance[J].Br J haematol,2006,134(6):573.

[6]周 民,岑 岭,薛永权.非霍奇金淋巴瘤的临床与骨髓细胞遗传学分析[J].中华医学遗传学杂志,2006,23(5):568.