顶空毛细管气相色谱法测定倍他米松磷酸钠原料药中3种有机溶剂残留量

赵佳丽，章展煌，徐宏祥

（浙江嘉兴市食品药品检验所，嘉兴市 314001）

倍他米松磷酸钠是一种肾上腺皮质激素药，为《中国药典》2005年版[1]收载品种，其原料药质量标准中未收载残留溶剂检测项目，文献也未见有关该原料药有机溶剂残留量检测方法报道。为了提高本品质量及用药安全，笔者认为应制定残留溶剂的检验方法。有关残留溶剂测定方法有直接进样法[2]和顶空进样法[3，4]等，笔者根据《中国药典》2005年版二部残留溶剂测定法[1]的要求，采用顶空进样法，建立了以正丙醇为内标的毛细管气相色谱法测定倍他米松磷酸钠中的3种有机溶剂残留量的方法。结果表明，该方法简单、灵敏、准确。

1 仪器与试药

6890N毛细管气相色谱仪，包括HP7694E顶空进样器、氢火焰离子化检测器（FID）、HP化学工作站（美国Aglient公司）；BP211D电子分析天平（北京赛多利斯有限公司）。

倍他米松磷酸钠原料药3批（批号：080305、080312、080316，含量：99.5%、98.9%、100.2%）为某药厂提供；四氢呋喃、无水乙醇和正丙醇均为分析纯；甲醇为色谱纯；水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与色谱

色谱柱：HP-INNOWAX石英毛细管柱（30 m×0.320 mm，0.25 μm）；固定液：聚乙二醇（分子量为20000）；柱温：60 ℃；进样口温度：180℃；FID检测口温度：250℃；氮气流速：1.0 mL·min－1；分流进样，分流比：10∶1；顶空温度：80 ℃；平衡时间：30 min；进样时间：1.0 min。结果四氢呋喃、甲醇、乙醇与内标正丙醇的分离良好，各峰分离度均大于1.5。色谱详见图1。

2.2 测定方法

图1 气相色谱图1.四氢呋喃；2.甲醇；3.乙醇；4.正丙醇Fig 1 GC chromatogram1.furanidine；2.methanol；3.ethanol；4.n-propanol

精密称取正丙醇适量，用水稀释制成2.24 mg·mL－1的溶液，作为内标贮备液；精密量取内标贮备液3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作为内标溶液。另精密称取四氢呋喃71.8 mg、甲醇300.1 mg、无水乙醇496.6 mg，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液与内标贮备液各3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密量取5 mL，置于10 mL顶空取样瓶中，加盖密封，作为对照品溶液；另精密称取供试品0.3 g，置于10 mL顶空取样瓶中，精密加入内标溶液5 mL，加盖密封，振摇使溶解，作为供试品溶液。各取对照品溶液与供试品溶液于80℃加热30 min，照《中国药典》2005年版二部附录残留溶剂测定法[1]，按“2.1”项下色谱条件测定，根据内标法以峰面积计算。

2.3 线性范围

精密量取上述对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，各精密加入内标贮备液3 mL，加水至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置于10 mL顶空取样瓶中，加盖密封，依法测定。以对照品各峰面积与内标物峰面积之比（Y）为纵坐标，浓度X（mg·mL－1）为横坐标进行线性回归，得四氢呋喃、甲醇和乙醇的回归方程分别为Y＝25.30X+0.0352（r＝0.9993）、Y＝1.922X+0.0106（r＝0.9999）、Y＝3.936X+0.0119（r＝1.000），三者检测浓度线性范围分别为0.0144～0.0718、0.060～0.300、0.0993～0.497 mg·mL－1。

2.4 精密度试验

取对照品溶液，重复测定6次，计算对照品峰面积与内标物峰面积的平均比值，结果四氢呋喃、甲醇、乙醇分别为1.006、0.3602、1.1960；RSD分别为0.53%、0.30%、0.48%（n＝6），表明精密度良好。

2.5 溶液稳定性试验

取“2.2”项下对照品溶液，分别于0、2、4、6、8 h取样测定，得各峰面积与内标物峰面积比值无明显差别，RSD＝0.20%，表明溶液在8 h内稳定。

2.6 最低定量限试验

取“2.2”项下对照品贮备液，用水逐级稀释成每1 mL中含四氢呋喃0.287、0.0144、0.0072 µg，甲醇0.730、0.365、0.182 µg和乙醇0.398、0.199、0.0995µg的3种不同浓度的混合溶液，依法测定，按S/N＝10计算最低定量浓度，结果四氢呋喃为0.0573µg·mL－1，甲醇为0.486 µg·mL－1，乙醇为0.145 µg·mL－1。

2.7 回收率试验

精密称取经105℃干燥至恒重的样品（批号为080305）0.3 g，共6份，置于10 mL顶空取样瓶中，分别精密加入对照品溶液（精密量取“2.2”项下对照品贮备液和内标贮备液各3 mL，加水稀释至50 mL）5 mL，加盖密封，振摇使溶解，依法测定，按内标法以峰面积计算回收率，得回收率四氢呋喃为103.7%（RSD＝2.62%，n＝6）、甲醇为95.8%（RSD＝1.21%，n＝6）、乙醇为95.0%（RSD＝0.87%，n＝6）。

2.8 样品中溶剂残留量测定

精密称取批号为080305、080312、080316的倍他米松磷酸钠原料药0.3 g，依法进行测定。结果，3批均未检出四氢呋喃；批号为080316样品检出甲醇残留量为0.062%；3批样品中均检出乙醇，残留量分别为0.281%、0.301%、0.183%。

3 讨论

溶剂的选择：倍他米松磷酸钠易溶于水，且被测溶剂四氢呋喃、甲醇和乙醇均与水混溶，故选择水作溶剂。

内标物与色谱柱的选择：由于四氢呋喃、甲醇和乙醇均为极性溶剂，根据“相似相溶”的原理，采用极性色谱柱可增加极性溶剂的保留值。笔者曾分别以丙酮、正丙醇作为内标进行测试，结果，丙酮的保留时间与甲醇、乙醇较为接近，三者之间难分离；而正丙醇的保留时间较长，并通过适当提高柱温，改善了各组分的分离情况。表明内标物以正丙醇为好。

顶空平衡时间和温度选择：取对照品溶液3份，分别在70、80、85℃下加热平衡30 min后进样测定。结果3种被测溶剂和内标正丙醇的峰面积均随平衡温度升高而增大；另取对照品溶液2份，分别在80℃加热30、45 min后进样测定，结果在平衡30、45 min时测得3种被测溶剂和正丙醇的峰面积基本不变。故选择加热温度为80℃，平衡时间为30 min。采用顶空进样法，除了能提高检测灵敏度外，还可减少样品对色谱柱的污染；同时降低顶空加热温度，可减少水气对固定相聚乙二醇的影响，延长柱子使用寿命，且色谱系统稳定。

溶剂限度的拟定：根据《中国药典》2005年版二部的规定，四氢呋喃、甲醇为二类溶剂，限度分别为0.071%、0.3%；乙醇为三类溶剂，限度为0.5%。在此要求下，本研究中3批原料药的有机溶剂残留量均合格。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：621、附录54.

[2]张 军，孙会敏，李 科.气相色谱法测定阿德福韦酯的10种残留溶剂[J].药物分析杂志，2005，25（6）：660.

[3]魏京京，张启明，朱维华.毛细管气相色谱测定27种常用有机溶剂[J].药物分析杂志，2006，26（8）：1171.

[4]栾成章，祝 波，王尊文，等.顶空气相色谱法测定夫西地酸中有机溶剂残留量[J].中国药房，2006，17（7）：535.