妇女人乳头瘤病毒测定与宫颈癌及癌前病变关系探讨

张秀清

目前认为，从宫颈上皮内瘤变发展为宫颈癌大约需要10年的时间，这为宫颈癌的预防、发现、治疗创造了时机。所以说宫颈癌是可以预防的，是可以治愈的，关键在于普查、早期发现和适当处理。随着医学的进展，高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染已被证明是引起宫颈癌及其癌前病变的主要病因。第二代杂交捕获法(HC-Ⅱ)HPV-DNA检测采用RNA探针进行分子杂交，化学发光使信号放大对HPV-DNA定量分析。本研究运用该方法测定HPV病毒载量，并与组织病理学结果相对照，了解HR-HPV感染及载量与宫颈癌及其癌前病变的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2008年4月～2009年6月在我院因子宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌进行各种术式治疗前，行HR-HPV测定的320例，年龄14～68(28.41±9.64)岁，平均孕次5次，产次3次，均为首次诊断。

1.2 方法

1.2.1 HPV-DNA标本采集 由固定医师将HPV取样刷插入宫颈外口，顺时针或逆时针转动5周,停留10s后取出，放置于保存液中送检。

1.2.2 HPV-DNA测定 采用美国Digene公司HC-Ⅱ试剂盒，96孔平板法。步骤:样本DNA双链解开成为核苷酸单链；DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体；特异性抗体将RNA-DNA杂合体捕获并固定在试管壁或微孔壁上；偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂合体结合；碱性磷酸酶使底物发光，根据光的强弱可确定碱性磷酸酶和RNA-DNA杂合体的含量，检测出HPV-DNA载量。阳性标准为HPV-DNA≥1.0pg/ml。

1.2.3 组织病理学检查 所有入选者术前已由专科医师进行阴道镜检查，并定位活检行病理检查。

1.2.4 统计学处理 计数资料采用x2检验，宫颈病变级别与HPV载量间的关系用秩和检验,相关性分析采用Spearman相关分析。使用SPSS13.0统计软件，（P＜0.05）为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 组织病理学检查结果 CINⅠ95例，CINⅡ55例，CINⅢ70例，宫颈浸润癌105例(宫颈鳞状细胞癌100例，宫颈高分化腺癌5例)。CINⅠ属低级别病变共95例；CINⅡ，CINⅢ属高级别病变，共125例。

2.2 HPV-DNA检测结果

320例患者中HPV(+)者305例(95.31%)，病毒载量1.00～3101.35pg/ml。

95例CINⅠ中HPV(+)者80例,病毒载量1.00～1608.5pg/ml。

55例CINⅡ中HPV(+)者53例,病毒载量1.87～1918.11pg/ml。

70例CINⅢ中HPV(+)者67例,病毒载量2.60～2362.29pg/ml。

宫颈癌105例,均为HPV(+),病毒载量1.47～3101.35pg/ml。

2.3 病毒载量与宫颈癌及癌前病变的关系

从病毒载量的集中及离散趋势来看，HR-HPV载量并未随着宫颈病变的严重程度而增加，反而有所减少。在HPV阳性时,低级别病变、高级别病变、宫颈癌之间载量，差异无统计学意义。病变等级和病毒载量之间的Spearman等级相关系数为0.0587，病变等级和病毒载量之间无相关性(见表1)。

表1 HR-HPV(+)时病毒载量与宫颈病变的关系(pg/ml)

3 讨论

众多研究发现，HPV高危感染常引起生殖道恶性肿瘤，特别与宫颈癌之间有着密切的联系[1]。据文献报道[2]，HPV感染的检出率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌组中分别为30%、55%、65%、99.8%。本组研究通过PCR方法检测CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌，结果显示阳性率分别为84.21%、87%、98%、100.00%，这与文献报道有差异，可能与山西大同妇女多婚次以至相互交叉感染可能有关。尤其在宫颈癌中，HPV病毒感染将造成机体组织病理学改变，从感染到出现这些改变需一定时间，宫颈感染HPV后病毒整合到宿主DNA中，经过一段时间才使宿主细胞发生恶变[3]。从CINⅠ到CINⅢ是一随时间而发展的过程，本研究中显示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌，随着宫颈病变的加重HPV阳性率逐渐增加,说明宫颈癌前病变与HPV感染有关。持续感染HR-HPV是宫颈癌发生发展的必要条件[4]，这一观点已被大多数国内外学者所接受，我们统计宫颈高度病变96.0%病人HPV阳性，HPV负荷量≥1000pg/ml为33例，500～1000pg/ml35例，HPV负荷量的高低与宫颈病变之间存在一定的关系。高病毒负荷量对宫颈癌的发生及宫颈病变的进展可能有一定的促进作用[5]，但女性HPV感染率很高，而只有极少数会发生宫颈癌，原因何在值得进一步研究。

HC-Ⅱ作为HPV-DNA负荷量半定量的测定方法，虽然因其高度敏感性、可重复性、客观性、简单易操作和可接受性被用于临床。但是HC-Ⅱ检测HPV病毒负荷量与宫颈病变严重程度之间的关系仍有争议。Wu等[6]发现，HPV病毒负荷量与宫颈病变程度之间明显相关，病毒负荷量越高，宫颈病变加重的风险越大。本研究表明，随着HPV负荷量增加，发生≥CINⅡ宫颈病变的几率明显增加，表明HC-Ⅱ检测的HPV病毒负荷量与宫颈病变严重程度之间密切相关。

[1] Saranath D,Khan Z,TandleH,etal.HPVI6/18 prevalence in cervical lesions/cancers and P53 genobpcs in cervical cancers patients from India[J].GynecotOncot,2000,86(2):157-162.

[2] 郎景和.迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇[J].中华妇产科杂志,2002,37(3):129-131.

[3] Pretorius RG,Peterson P,Azizi F,et al.Subsequent risk and presentation of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)3 or cancer after a colposcopic diagnosis of CIN 1 or less[J].Am J Obstet Gynecol,2006,195(5):1260-1265.

[4] 唐礼榕.HPV-DNA检测在宫颈病变诊断中的价值[J].中国癌症杂志,2006,l6(3):217-219.

[5] 金力,郎景和.高危人类乳头瘤状病毒负荷与宫颈上皮内瘤变的分级关系[J].生殖与避孕,2006,26(7):422-425.

[6] WuY,Chen Y,Li L,et al.Associations of high-risk HPV types and viral load with cervical cancer in China[J].J ClinVirol,2006,35:264-269.