息风止痛颗粒质量标准研究

广西中医药研究院，广西 南宁 530022

息风止痛颗粒是广西强寿药业集团有限公司根据壮族民间验方委托我院研究开发的新药，主要由白芍、当归、白芷、延胡索、天麻、川芎等八味药材经提取加工精制而成的颗粒剂。具有养血息风，祛风止痛。用于内外风所致的偏头痛。如前额痛、眉棱骨痛、太阳穴痛、巅顶后枕部痛等症。为了更好控制制剂的质量，本实验采用薄层色谱法对处方中当归、白芷、延胡索、天麻、川芎进行鉴别，采用高效液相法对白芍中的芍药苷［1］进行含量测定，结果本法操作简便，可作为本品的质量控制。

1 仪器、试剂与样品

1.1 仪器:日本岛津公司LC－10AT高效液相色谱议;SPD－10A紫外检测器;威玛通用多媒体色谱数据工作站。

1.2 试药:芍药苷对照品:由中国药品生物制品检定所提供 (批号110736－200320，供含量测定用)。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。实验样品及缺白芍的阴性对照样品由广西强寿药业集团有限公司提供

2 方法与结果

2.1 鉴别试验

2.1.1 当归、川芎的薄层色谱鉴别。取本品5g，研细，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，用2%碳酸氢钠溶液20mL提取，弃去乙醚液，碱水溶液加盐酸调pH值至2－3，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺当归、川芎药，材的阴性样品5g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，对照品溶液5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯－甲酸 (7.5∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰。

2.1.2 白芷的薄层色谱鉴别。取本品5g，研细，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用正丁醇20mL，振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芷对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取缺白芷药材的阴性样品5g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯－丙酮 (7∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显1－2个相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。

2.1.3 延胡索薄层色谱鉴别。取本品5g，研细，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加10%盐酸溶液20 mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，弃去乙醚液，酸水溶液加浓氨试液调pH值至9－10，用氯仿20mL振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺延胡索药材的阴性样品5g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，对照品溶液5μL，分别点于同一以1%氢氧化钠制成的硅胶G薄层板上，以正己烷－氯仿－甲醇 (7.5∶2.5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰，置紫外光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。

2.1.4 天麻的薄层色谱鉴别。取本品5g，研细，加甲醇20mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用正丁醇20mL，振摇提取，提取液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取天麻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺天麻药材的阴性样品5g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水 (9∶1∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5mm)，流动相:甲醇－水 (33.5:66.5);流速:1.0mL/min;检测波长:230nm;柱温:27℃。理论板数按按芍药苷峰计算，应不低于1500”。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取约1g，精密称定，加甲醇30 mL，置水浴加热回流30min，滤过，滤液置50mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性干扰试验取缺白芍的阴性样品，按正文拟订的供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，按正文拟订的色谱条件测定。结果阴性对照在芍药苷出峰位置无吸收峰，表明处方中其它成分对测定无干扰 (见图1)。

2.2.5 线性关系考察精密称取黄芩苷对照品12.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液 (浓度为0.245mg/mL)。精密量取对照品贮备溶液0.4、1、2、3、5mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液 (浓度分别为9.80mg/mL、 24.50mg/mL、 49.00mg/mL、 73.50mg/mL、122.50mg/mL)按上述的色谱条件测定。以芍药苷对照品进样量 (mg)为横坐标 (X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程为:Y=2929592X－34874.2，r=0.9999。结果表明，当进样量在 0.0976～2.4400mg范围时，芍药苷进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 对同一供试品溶液，按上述的色谱条件，连续测定5次，平均值为1.62 mg/g，RSD为1.51%(n=5)。试验表明，本法的精密度良好。

2.2.7 重复性试验 对同一批样品平行测定5份，结果平均值为1.64mg/g，RSD=1.26%(n=5)结果表明，本法的重复性良好。

2.2.8 稳定性试验对同一份供试品溶液，每隔一定时间测定一次，共测定7次，平均值为1.63 mg/g，RSD为1.92%(n=7)。试验表明供试品溶液在24h内，供试品溶液稳定。

2.2.9 加样回收率测定 精密称取芍药苷对照品10.26mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液 (浓度为0.2052mg/mL)。精密称取重复性试验项下的样品 (芍药苷含量为1.64mg/g)0.5g，共取5份样，分别精密加入上述对照品贮备液4.0mL，再加甲醇至30mL，按上述的供试品溶液制备项下，自“置水浴上加热回流30min”起，依法操作。测定，计算回收率，结果平均回收率为98.67% ，RSD=1.32%(n=5)，详见表1。

表1 芍药苷含量测定加样回收率测定结果

2.2.10 样品测定 按拟订的含量测定方法，测定了本品3批样品中芍药苷含量结果分别为15.6mg/袋、16.4mg/袋、14.9mg/袋。

3 讨论

参照《中国药典》2005年版一部“白芍”项下【含量测定】项所使用的流动相［1］，但分离效果不好，经反复试验和调整，最后采用甲醇－水 (33.5:66.5))为流动相，芍药苷与相邻峰能达到基线分离。测定波长，采用《中国药典》2005年版一部“白芍”项下【含量测定】的波长。对样品进行回流提取和超声处理对比，结果回流提取效果比超声处理效果好，故供试品溶液的制备，故采用回流提取。

［1］国家药典委员会。中华人民共和国药典一部，北京:化学工业出版社，2005:68