耳脑胶粘合修复大鼠面神经损伤的实验研究

苏娟娟,关 键,王心,张国梁,朱丽萍

(1.佳木斯大学附属口腔医院颌外一科,黑龙江 佳木斯 154002;2.哈尔滨市第一医院口腔科,黑龙江 哈尔滨 150010)

面神经的损伤导致面部表情肌瘫痪,对患者来说影响极大。应用显微外膜缝合法修复面神经是目前临床上常用的方法,可是由于缝线存在异物反应,常规显微修复会进一步损伤神经轴突,引起轴突组织错向生长,影响神经修复的效果[1]。本实验是以现在常用的外膜缝合法为对照,研究耳脑胶粘合大鼠面神经的应用效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康雄性 Wistar大鼠 20只,体重260g～ 300g,随机分为两组,即耳脑胶粘合组(实验组)和外膜缝合组(对照组),每组10只,采用左侧面神经为修复模型进行实验。

1.2 实验材料

1.2.1 耳脑胶 (广州白云医用胶有限公司)。本品在凝血酶和纤维蛋白原的共同作用下,可有效止血、封闭创面、硬组织粘合和堵塞血管。在体内应用时,固化膜可降解成水溶性的聚氰基丙烯酸及甲酸等,随尿液排除体外,时间约一个月。

1.2.2 缝合线采用国产10-0尼龙线(上海元洪医疗器械有限公司生产)。

1.3 手术方法

采用100g/L水合氯醛0.3/kg腹腔注射进行全身麻醉。麻醉成功后左侧卧位于动物手术台上,将大鼠左侧面颊部备皮,脱毛,碘伏消毒,铺无菌巾,手术显微镜下,做左侧面颊部斜行切口,长约1.5cm,切开 ,分离显露面神经,找到面神经颊支,分开腮腺咬肌筋膜,将面神经颊支解剖出来,距颈乳孔1cm处将面神经颊支切断;外膜缝合组,用10-0尼龙线吻合神经外膜,4点、8点、12点方向各一针;耳脑胶粘合组,根据神经外膜血管的走向,将面神经颊支的两断端尽量对齐,耳脑胶滴于吻合端,30秒左右耳脑胶凝固,即可见粘合对位佳;将所有动物左侧面神经颊支吻合好埋入颊肌,缝合切口,碘伏再次消毒。

1.4 检测指标

1.4.1 大体及手术显微镜下观察

在术后8周取材时,肉眼及在手术显微镜下观察大鼠左侧面神经的恢复情况。

1.4.2 神经电生理检查

术后8周各组取8只大鼠再次进行腹腔麻醉,显露左侧面神经,用丹麦产 KEYPON T高速肌电诱发电位系统,检测神经肌肉动作电位,测定其潜伏期和波幅值。信号经电脑分析程序处理。

1.4.3 组织学观察

术后8周各组取8只电生理检测结束后,于神经吻合口处取材,用3/0尼龙线缚住神经两端,固定在小木板上,置于10%福尔马林溶液内固定,做纵切片进行组织学观察。每组其余2只大鼠迅速取吻合口处面神经,即投入3%的戊二醛中固定2h,然后从吻合口处切取1mm3小块,用1%锇酸固定,用于半薄切片亚甲蓝-复红染色和超薄切片透射电镜观察,病理切片计算机图像分析,计算再生轴突数量、神经纤维直径及髓鞘厚度。

1.5 统计学处理

2 结果

2.1 大体及手术显微镜下观察

术后8周时,外膜缝合组神经吻合处有大量的瘢痕,与周围组织界限不清;耳脑胶粘合组神经清晰可见,吻合口处瘢痕很小,可见神经生长良好,且未见神经瘤形成。

2.2 神经电生理检查

耳脑胶粘合组神经潜伏期值小,波幅值大;而外膜缝合组神经潜伏期值大,波幅值小。

2.3 组织学观察

术后8周,纵向切片见耳脑胶粘合组扭曲较轻,瘢痕形成较少;外膜缝合组扭曲较明显,呈盘旋状 ,瘢痕形成较多。

在透射电镜下观察,术后8周时耳脑胶粘合组再生神经中髓鞘结构好,厚度基本接近正常,板层结构清晰,轴突内神经丝和微管及线粒体结构重现,部分髓鞘呈灶性崩解;外膜缝合组再生神经纤维中有髓神经纤维分布较疏散,髓鞘厚薄不一致,轴突内神经微丝、微管结构模糊,神经丝密集,有空泡样变性。

表1 粘合组与缝合组面神经电生理及其他检测指标(±s,n=8)

表1 粘合组与缝合组面神经电生理及其他检测指标(±s,n=8)

组 别 潜伏期(ms) 波幅(mv) 髓鞘厚度(nm) 轴突直径(nm) 有髓纤维数(个)粘合组 1.87± 0.29 1.02± 0.32 741.11± 192.44 3036.67± 647.54 443± 139.14缝合组 2.07± 0.12 0.82± 0.17 444.70± 96.27 3178.25± 611.07 279± 53.61 P＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＜0.05

3 讨论

神经断端获得正确的轴向对位是神经修复的关键,目前临床上常采用显微外科技术进行神经外膜缝合。神经外膜缝合能使神经端端吻合,缺点是通过手术,神经纤维不能达到解剖复位,即精确对合,且会发生错误生长,如虽为神经纤维对合,但感觉神经长到运动神经中,外膜缝合后,虽无张力,但在神经中心区仍有空隙[2]。由医用耳脑胶组成的快速医用粘合剂,组织相容性好,适应于人体组织,具有粘合强度大,快速完成止血、粘合,在体内可快速固化、分解、排泄等特点。有人[3]将其归类于软组织医用胶,可用于不同部位组织的粘合,已用于普外科和妇产科的一些手术,但用于神经外科手术的报道较少,用于面神经的损伤修复少见报道。

我们在实验中在解剖显微镜下,根据神经外膜血管的走向,尽量将离断的面神经准确对位,然后用耳脑胶滴到对合神经断端处粘合,这种方法操作较简便,且耳脑胶在凝固后可在神经对合处形成一个凝胶环,可起到再生室的作用,即便粘合过程中有少量的凝胶深入吻合端,也不会影响神经的生长[4]。用胶粘合修复面神经损伤有以下优点:①可以避免由缝线引起的组织反应。②操作相对简便,易于掌握,缩短了手术时间,不需要特殊设备,术中不会损伤神经的内部结构,吻合的神经对位理想。③在某些特定部位的神经修复,如有骨性管道阻挡及一些难以显露的手术区域,应用胶粘合非常方便[5]。

本实验研究结果显示,耳脑胶粘合组和显微缝合组在神经吻合部位近端电刺激后口轮匝肌处神经动作电位潜伏期和波幅的差异无统计学意义 (P＞ 0.05),这说明应用耳脑胶粘合在神经功能上的恢复可以达到和神经外膜缝合相同的效果,且在大体观察和手术显微镜下观察,面神经吻合口处形成的瘢痕组织很小,且没有神经瘤形成,神经恢复效果较好,从长远看来可加速神经的恢复,留下的后遗症应该很小。进一步的组织学观察和电镜观察结果显示,耳脑胶粘合组再生的神经纤维排列整齐,髓鞘结构较好,板层结构清晰,神经纤维较外膜缝合组生长好,可见应用耳脑胶粘合修复神经的效果较好。统计学分析显示,两组的轴突直径相比较,没有统计学意义;但髓鞘厚度和有髓纤维数有统计学意义,说明应用耳脑胶粘合可以使神经恢复的更好,对于神经恢复远期效果好。这可能是由于耳脑胶既达到了使神经相结合的目的,发挥了再生室的作用,且没有缝线形成异物反应,使神经组织生长良好。

综上所述,我们可以看出应用耳脑胶修复面神经的损伤,具有一定的优势,能及时有效的连接上离断的神经 ,使神经可再生并很好的恢复;且有效的防止了形成神经瘤,使营养因子聚集,促进神经再生。

[1]Berger A,Shen Z,H ierner R.Peripheral nerve surgery:Current achieve-ments and future directions[J].Chin J H and Surg,2000,16:11-12

[2]何秦,蒋电明.周围神经端端吻合方法的研究进展 [J].重庆医学,2007,5:975-977

[3]阎汉荣.医用胶的临床应用 [M].北京:中国科学技术出版社,1992,4-15

[4]Narakas A.The use of fibrin glue in repair of peripheral nerves[J].Orthopedic Clinics North America,1988,19:187

[5]李宏生,李光昭等.纤维蛋白胶粘合修复周围神经缺损的实验研究 [J].中华微创外科杂志,2003,2:82-84