子宫内膜异位症患者 survivin蛋白的表达及临床意义

胡玉红,石 瑾,张 燕

(佳木斯大学附属第一医院妇产科,黑龙江 佳木斯 154003)

子宫内膜异位症(endometriosis,EM T)简称内异症。指具有活性的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫内膜以外的部位[1]。它虽为良性疾病,但却具有类似恶性肿瘤的“恶性”行为,至今无特效疗法,发病机制尚未完全阐明。survivin是最近被发现的凋亡抑制蛋白 (IAP)基因家族中的新成员,细胞凋亡与内异症的关系逐渐成为近年的研究热点。本研究通过免疫组化方法检测三组内膜组织中 survivin蛋白的表达情况,并探讨在 EM T发病机制中的作用及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有研究样本均来自 2008— 03～ 2009— 03期间在我院妇产科行开腹手术,且术后病理检查证实为 EM T的患者。选取36例异位内膜组织 (异位内膜组),增生期 20例,分泌期16例。另选取36例因 EM T行子宫切除手术的在位子宫内膜组织 (在位内膜组 ),增生期 18例 ,分泌期 18例 ,。选择 25例正常子宫内膜组织 (正常内膜组 )作为对照组,标本均取自同期因宫颈癌手术且术后经病理证实为正常子宫内膜的患者,增生期 12例,分泌期13例。所有病例均月经周期规律,术前6个月无激素治疗史。月经周期划分根据末次月经及子宫内膜病理检查结果确定。

1.2 主要试剂

鼠抗人 survivin单克隆抗体,SP试剂盒及 DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法

所有标本均于术后取材,用10%福尔马林液固定;石蜡包埋;连续切片,厚约4μm。切片常规脱蜡水洗。采用免疫组化 SP法进行免疫组织化学染色,严格按说明书进行实验操作。阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗,阳性对照为已知阳性切片。

1.4 结果判断

按照试剂盒说明,以细胞浆或细胞核内出现棕黄色或褐色颗粒为判断标准;根据阳性细胞显色深浅分级:不显色或显色不清为阴性(-);浅黄色为弱阳性(+ );棕黄色为中度阳性(++);深褐色为强阳性(+++)。

1.5 统计学分析

实验数据用 SPSS13.0统计软件进行结果分析,计数资料采用卡方检验。

2 结果

2.1 survivin蛋白在三组内膜中的表达

根据免疫组织化学染色结果显示,三组内膜中均有 survivin蛋白的表达,异位内膜组和在位内膜组表达高于正常内膜组 (P＜0.01或P＜0.05),而异位内膜组阳性表达率高于在位内膜组 (P＜ 0.05)。见表1。

表1 survivin蛋白在三组内膜中的表达

2.2 Survivin蛋白在三组内膜中的表达与月经周期的关系

Survivin蛋白在异位内膜组和在位内膜组中,分泌期与增生期阳性表达均较强,在位内膜组分泌期强于增生期(P＜0.05);异位内膜组各期表达差异无显著性(P＞ 0.05);正常内膜组中,分泌期与增生期阳性表达表达均较低,两者差异无显著性 (P＞ 0.05)。见表2。

表2 survivin蛋白在三组内膜中的表达与月经周期的关系

3 讨论

Survivin蛋白是最近新被发现的一种结构独特 IAP族的凋亡抑制因子,与细胞分裂、增殖有关,在胚胎组织和恶性肿瘤中表达,正常成年分化组织一般不表达或弱表达[2]。survivin作为 IAP家族的特殊成员,具有细胞增殖和抑制细胞凋亡的双重作用,在内异症的发生发展过程中可能起着重要作用。更多的研究证实,凋亡是子宫内膜细胞保持周期性结构和功能稳定的关键因素,异位内膜细胞得以在宫腔外种植并继续存活,与其对凋亡的抵抗力增强有关。并且随着 EM T的严重程度增加而进一步降低,推测异位内膜细胞在盆腔内得以继续存活及种植,很可能与其对凋亡的抵抗力增强有关[3]。Garcia-Velasco等[4]研究发现,子宫内膜凋亡呈规律的周期变化,分泌期的凋亡活动显著比增殖期活跃,并与正常子宫内膜作比较,推测 EM T患者的在位内膜可能因抑制凋亡能力增强,从而在其逆流入腹腔后出现异常存活现象,支持逆流种植学说。本研究发现,三组内膜中均有 survivin蛋白的表达,异位内膜组和在位内膜组 survivin蛋白阳性表达率高于正常内膜组 (P＜0.01或P＜0.05),而异位内膜组阳性表达率高于在位内膜组 (P＜0.05)。异位内膜组中survivin蛋白在的高表达,在提示 survivin蛋白可能是通过抑制异位内膜细胞的凋亡使其增殖失控,进而促进内异症的发生发展。另外分析在三组内膜的不同月经周期(增生期和分泌期 )中 survivin蛋白表达情况,在正常内膜组中,分泌期与增生期阳性表达表达均较低 ,两者差异无显著性 (P＞ 0.05)。在异位内膜组和在位内膜组中,分泌期与增生期阳性表达均较强,在位内膜组分泌期强于增生期 (P＜0.05);而异位内膜组各期表达差异无显著性 (P＞ 0.05)。这与 Konno等[5]研究结果一致。异位内膜组织中,survivin蛋白在各期均有表达且显著高于对照组,无周期性变化。提示,survivin蛋白表达升高导致异位内膜细胞的抑制凋亡能力明显增强,使得细胞增殖和凋亡的失衡,有利于经期反流到腹腔的异位内膜细胞在盆腔内继续存活、种植,从而促进了 EMT的发生。因此,我们可以针对 survivin在异位内膜中高表达的特性,应用survivin抑制剂来促进异位内膜细胞凋亡 ,延缓复发,在治疗EM T中可能会具有一定临床意义,为 EMT的治疗提供新的途径。

[1]乐杰.妇产科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2008,325

[2]Chawla Sarkar M,Bae SI,Reu FJ,et al.Downregnlation of Bcl-2,FLIP or IAPs(XIAP and snrvivin)by siRN As sensitizes resistant melanoma cells to Apo2L/TRAIL- induced apoptosis[J].Cell Death Differ,2004,30:1160-1175

[3]郭悦慈,章汉旺.survivin与子宫内膜异位症 [J].国外医学计划生育分册,2004,23(3):144-146

[4]Garcia-Velasco J A,Arici A.Apoptosis and the pathogenesis of endometriosis[J].Semi Reprod M ed,2003,21(2):165-172

[5]Konno R,Yanakwa H,U tsunanomiya H,et al.Ex pression of survivin and Bcl-2 in the nomal human endom etrium[J].Mol Hum Reprod,2000,6:529-534