高效液相色谱法测定盐酸氯哌丁片的含量

刘 珠，高振强

（1.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011；2.河北医科大学第三医院，河北 石家庄 050051）

盐酸氯哌丁片又名咳平片，是中枢性镇咳药，主要用于治疗干咳等。1987年版《中国药典（二部）》[1]采用非水滴定法测定盐酸氯哌丁的含量。实际操作中由于辅料的干扰而采用提取后非水溶液滴定法，该法提取操作烦琐、费时，且提取过程易引入误差，所使用的氯仿还会污染环境。为此，笔者在参考文献[2]的基础上，采用高效液相色谱法测定盐酸氯哌丁片的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-2010 AhT型全自动高效液相色谱仪，包括2010 A四元泵，2010 A自动进样器，2010 A紫外检测器，2010 A柱温箱，2010 A工作站；Milli-labo纯水仪；Sartorius BP211 D型电子天平。盐酸氯哌丁对照品（自制，含量为99.86％）；盐酸氯哌丁片（市售品，批号分别为031211，031212，031213，规格均为10mg/片）；甲醇、磷酸为色谱纯；三乙胺为分析纯；水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5!m）；流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（30∶70，三乙胺1.0mL，用磷酸调pH至3.5）；流速：1.0 mL/min；检测波长：225 nm；柱温：室温；进样量：10!L。在此色谱条件下，盐酸氯哌丁色谱峰的理论塔板数为6 785，色谱峰保留时间适中，峰形对称，制剂辅料对含量测定无干扰（图1）。

2.2 溶液制备

精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸氯哌丁对照品适量，用水稀释成0.102 5 g/L，摇匀，即得对照品溶液。取同批号盐酸氯哌丁片20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取细粉适量，用水稀释成约含盐酸氯哌丁0.1 g/L的溶液，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按处方比例，精密称取除主药外的辅料适量，置100 mL量瓶中，加水适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液5.0，10.0，15.0，20.0，25.0mL，分别置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10!L，注入色谱仪，记录色谱图，以色谱峰峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，得回归方程 A=25 650C+14 807，r=0.999 9（n=5）。结果表明盐酸氯哌丁质量浓度在5.125～25.625!g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：取含量测定项下的对照品溶液，在拟订的色谱条件下连续进样6次。结果峰面积的 RSD=0.17％（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取含量测定项下的同一供试品溶液，在拟订的色谱条件下分别于0，2，4，8h时测定。结果峰面积的 RSD=0.1％（n=4），说明供试品溶液在8h内稳定。

重现性试验：取同一批（批号为031211）样品，依法平行测定6份。结果盐酸氯哌丁的含量为93.37％，RSD=0.5％（n=6）。

专属性试验：取盐酸氯哌丁原料10 mg，精密称定，置10 mL刻度试管中，加0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液至5mL，煮沸20min，冷却，用0.1mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L盐酸溶液调pH至中性，加流动相稀释至刻度（酸破坏或碱破坏）；取盐酸氯哌丁原料10 mg，精密称定，置10 mL刻度试管中，加30％过氧化氢1 mL，煮沸2h，冷却，加流动相稀释至刻度（氧化破坏）；将供试品置100℃烘箱中放置2 d，取10 mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度（热破坏）；将供试品于4 500 lx光线下照射48h，取10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度（光照破坏）。取空白辅料溶液和上述5种溶液各20!L，注入液相色谱仪，记录色谱图（图2）。结果经酸、碱、氧化、高温、光照破坏的产物，均能与盐酸氯哌丁的主峰完全分离，互不干扰。

图2 样品破坏后有关物质色谱图

峰纯度检查：利用DAD检测器对盐酸氯哌丁片含量测定项及有关物质检查项下的供试品溶液主峰的起点、顶点、终点进行峰纯度检测。结果显示主峰为一纯峰，表明本试验中的辅料、杂质对盐酸氯哌丁的含量测定及有关物质检查无干扰。

回收率试验：取已知含量（批号031211）的样品20片，精密称定1.541 7 g，平均片重为0.770 8 g，研细，精密称定细粉适量（约相当于1片的量）共9份，分成3组，分别置100mL量瓶中，分别加入对照品适量（约相当于样品中盐酸氯哌丁含量的80％，100％，120％），加适量水振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精取10mL至100mL量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，精密量取续滤液10!L，注入色谱仪，记录峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取样品20片，除去包衣，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸氯哌丁10mg），置100mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精取10mL至100 mL量瓶中，加水稀释至刻度摇匀作为供试品溶液；另取经105℃干燥至恒重的盐酸氯哌丁对照品约10mg，精密称定，用水稀释成含盐酸氯哌丁20!g/mL，作为对照品溶液，按上述色谱条件各进样10!L，记录峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（标示量的％，n=4）

3 讨论

为了得到良好的色谱图形和适宜的出峰时间，分别考察了配比为20∶80，30∶70，40∶60的甲醇-水，结果发现保留时间均较短；以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液代替水并用磷酸调pH分别为2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0，经比较发现，随着流动相pH降低，其保留时间缩短，pH增大，保留时间延长，但当pH为3.5，0.02mol/L磷酸二氢钾溶液与甲醇配比为30∶70时主峰对称，无拖尾现象，保留时间亦适宜。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，1987：117.

[2]夏前利，彭韵余，游文素.紫外分光光度法测定盐酸氯哌斯汀片的含量[J].华西药学杂志，2000，15（3）：237.