延迟血浆悬浮汇集白膜制备血小板的探讨

赵晓霞 沈莉 李建民 张爱红 梁晓虎

通过白膜分离的方法制备浓缩血小板在欧洲得到广泛的实践[1]。为节约和充分利用血液资源,输血事业发达的欧洲14国,成人剂量血小板(adult platelet doses,APD)44.1%是用BC-PC汇集的,7.2%是用 PRP-PC汇集的,48.6%是机采的[2]。出于不浪费宝贵血液资源和进一步保证安全输血的目的,笔者借鉴国外先进经验和技术,采用延迟血浆来悬浮白膜并制备血小板。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将汇集白膜单-延迟血浆制备的 30例浓缩血小板作为实验组,将用Baxter CS-3000 Plus采集的血小板 30例为对照组。

1.2 材料 400 ml采血四联袋(广州华南医疗用品有限公司),Beckman J-6B型离心机(美国制造)、r=25 cm,TSCD 201A无菌导管连接器(日本制造),Beckman counter AC.T5.diff-2血细胞计数仪(美国制造),PF型白细胞过滤器(南京双威生物制品有限公司),Nagotte Chember白细胞计数板。

1.3 方法

1.3.1 白膜的提取方法：将四联袋采集的 1～3 h内 400m l全血以 2 918 g,14 m in,22℃为离心条件进行离心,离心毕取出置于血浆挤压器中,将上层血浆全部分入第一个转移袋中并用止血钳夹好;将白膜及相邻的红细胞约 25～35 g挤入第二个转移袋中并用止血钳夹好;将红细胞保存添加剂加入母袋中并用止血钳夹好;分别热合后余下白膜袋备用。

1.3.2 延迟血浆的融化方法：将冷冻储存至少在 112 d以上(不超过有效保存期),与白膜同型并经再次检验合格的 200～250m l延迟血浆(献血后的合格血浆经冷冻暂时不用,待同一献血者再次献血后并经检验无异常后,前期的冷冻血浆再行应用),置于 37℃恒温水浴箱中进行融化,融化后的血浆用于悬浮汇集白膜。

1.3.3 汇集白膜及悬浮血小板方法：将检验合格后同型备用白膜 6份通过无菌导管连接汇集于容量为 450～500ml的二联袋中,将融化后的血浆亦通过无菌连接加入汇集有白膜的袋子中,轻轻混匀后在室温下静置 2 h。

1.3.4 浓缩血小板的分离及过滤方法：将静置后含有混悬液的二联袋以 260 g,10min,22℃为离心条件进行离心,离心毕取出置于血浆挤压器中,将上层血浆即浓缩血小板全部分入另一个转移袋中并用止血钳夹好;将含有浓缩血小板袋子通过无菌连接与 PF型白细胞过滤器进行连接,连接毕按过滤器说明书的要求进行血小板过滤,过滤完成后热合下含有血小板的袋子,此即为制备的浓缩血小板制剂。

1.3.5 血小板计数及红细胞混入量的检测方法：将制备的浓缩血小板混匀后取样,按Beckman counter血细胞计数仪说明书提供的方法进行检测。

1.3.6 白细胞污染量的检测方法：未经过滤血小板的白细胞污染量用 Beckman counter血细胞计数仪进行检测,过滤后血小板中的白细胞污染量按文献[3]的方法进行检测。

1.3.7 本实验血小板质量标准：参照文献[4]单采血小板(每袋)的质量标准。

2 结果

2组制备的血小板质量比较情况见表 1;实验组制备的浓缩血小板过滤前、后白细胞污染及血小板损失情况见表 2。

3 讨论

从表 1可见,本实验方法血小板质量,除血小板计数较对照组偏低外,白细胞污染量及红细胞混入量均优于对照组,可达到单采血小板(每袋)国家质量标准;血小板中白细胞混入量可达到用于预防非溶血性输血发热反应的要求,但不足以用于预防 CMV感染或 HLA同种免疫的要求。目前国外白膜法制备的血小板多由 4～6份同型白膜(每份白膜含血浆 30 ml左右)汇集而成。国外文献报道通过白膜法汇集 5 U血液平均可获得血小板量达 4.2×1011[5]。本实验血小板含量较国外文献报道的为低。究其原因,笔者认为,一是不排除血液本身血小板含量的差别,二是不排除制备工艺上存在导致血小板损失的地方。

表1 2组制备的血小板质量比较情况n=30,±s

表1 2组制备的血小板质量比较情况n=30,±s

组别血小板计数(×1011)白细胞污染量(×108)红细胞混入量(×109)实验组 2.73±0.13 0.851±0.032 1.72±0.06对照组 3.08±0.21 1.012±0.021 3.84±0.14 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表 2 过滤前、后浓缩血小板中白细胞污染及血小板损失情况n=30,±s

表 2 过滤前、后浓缩血小板中白细胞污染及血小板损失情况n=30,±s

时间 白细胞污染量(×108) 血小板计数(×1011)过滤前 0.852±0.031 2.73±0.13过滤后 0.010±0.001 2.51±0.11 P值 ＜0.05 ＜0.05

无论是手工汇集的含多人份血浆及单采的含单人份血浆的血小板,二者无法回避的共同事实是：都不能避免窗口期感染的发生。本实验采用延迟血浆来重新悬浮血小板以及采用过滤器去除白细胞,正是出于避免因白细胞及血浆导致的输血传染病的发生。血浆储存 112 d以上并经再次检验,可避免 HCV、HBV和HIV前期检验因窗口期导致的误检的发生,进一步提高输血的安全性。从表 2可见,使用过滤器去除血小板中的白细胞效果明显,可达到预防CMV感染或HLA同种免疫的残余白细胞的国家标准,但亦可造成不同程度的血小板损失,且血小板损失量不影响治疗量的要求。由此可见,用过滤器去除血小板中的白细胞可大大降低HLA导致的输注无效的发生。

1 Silvia Perez-Pujol,Miguel Lozano,Dolores Perea,et al.Effect of holding buffy coats 4 or 18 hours before preparing pooled filtered PLT concentrates in plasma.Transfusion,2004,44：202-209.

2 Scott Murphy.Platelet from pooled buffy coats：an update.Transfusion,2005,45：634-639.

3 Masse M,Naegelen C,Pellegrini N,et al.Validation of a simple methed to count very low white cell concentrations in filter red cells or platelet.Transfusion,1992,32：565-571.

4 卫医发[2000]448号(卫生部文件)《血站基本标准》附件：全血及成分血质量标准.

5 AABB Technical Manual 12-14th Editions.Chapters 8：components from whole blood donationss.167.