猫豆胍的质量研究
2010-02-07黄增琼蒋伟哲黄兴振巫世红
黄增琼， 蒋伟哲， 黄兴振， 黄 敏， 巫世红
(广西医科大学药学院，广西南宁530021)
猫豆胍是从猫豆中提取分离得到的一种单体成分，其化学结构式见图1。猫豆，又名猫爪豆、狗爪豆、龙爪豆，是豆科藜豆属植物龙爪藜豆Stizotobium cochinchinensis(Lour).Tang et Wang的种子［1］。猫豆中含有左旋多巴，是国内提取左旋多巴最主要的原料药材［2］。我们的前期研究发现，猫豆胍具有一定的镇静催眠作用［3］。但对其质量控制方法的研究尚无报道。为了确保猫豆胍的产品质量，本实验研究建立了准确、可靠、专属性强的质量控制方法。
图1 猫豆胍化学结构式
1 仪器和试药
1.1 仪器
威玛龙LC-9000D高效液相色谱仪(南宁市威玛龙色谱科技有限公司);Sartorius ME215S电子天平(北京赛多丽斯仪器系统有限公司);AS5150A超声波处器(天津奥特比赛恩斯有限公司);X-6显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)。
1.2 试药
猫豆胍对照品，纯度99.54%(广西医科大学新药研究开发中心提供);猫豆药材(广西邦尔植物制品有限公司提供，经右江民族医学院附属医院刘春荣副主任中药师鉴定);猫豆胍样品(自制);甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 猫豆胍的制备方法
取猫豆适量，以0.1 mol/L盐酸溶液渗漉提取，提取液浓缩，经732型强酸性阳离子交换树脂交换，蒸馏水洗至中性，1%氨水作为洗脱剂洗脱。收集含有猫豆胍的洗脱液，减压浓缩，干燥，即得猫豆胍粗品。反复重结晶，得猫豆胍精品，经HPLC测定，纯度大于98%。
3 性状
3.1 外观性状及溶解度
取本品，观察其外观性状。本品为白色或类白色结晶性粉末，无臭，无味。微溶于水，溶于酸性或碱性水溶液;在乙醇中极微溶解;在石油醚中几乎不溶。
3.2 熔点
取本品，用显微熔点测定仪测定熔点，熔点为208～212℃(分解)。
3.3 吸收系数
取本品，精密称定，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，定量稀释，制成每1 mL中约含30 μg的溶液，按中国药典2005年版二部附录IV A，在324 nm波长测定吸光度，本品的吸收系数为423-428。
4 鉴别方法
4.1 化学法
取本品适量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴改良的碘化铋钾试剂，产生桔红色沉淀。
取本品适量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴碘－碘化钾试剂，产生棕色沉淀。
取本品适量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴硅钨酸试剂，产生白色沉淀。
4.2 紫外分光光度法
取本品适量，加0.1 mol/L冰醋酸制成每1 mL含10 μg的溶液，按紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV A)测定，在324 nm波长处有最大吸收，246 nm波长有次大吸收。
4.3 红外分光光度法
取本品适量，按红外分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV C)测定，红外吸收光谱图中有芳香杂环、氨基、仲氨基、羰基和羟基等特征吸收峰，与对照品红外吸收光谱图一致。
4.4 薄层色谱法
取本品适量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成浓度为1 mg/mL的供试品溶液。另取猫豆胍对照品，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版二部附录ⅤB)试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)为展开溶剂，展开，取出，晾干，在365 nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色荧光斑点。
5 含量测定
5.1 色谱条件与系统适用性实验
色谱柱:PhenomenexTMC18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5);流速:1.0 mL/min;检测波长324 nm;柱温:室温;进样量20 μL。
按上述色谱条件，取5.2项下各溶液，进样测定。理论塔板数按猫豆胍峰计算不低于10 000。在该条件下测定，阴性对照无干扰。见图2。
图2 高效液相色谱图
5.2 溶液的配制
对照品溶液 取猫豆胍对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，配制成浓度为0.118 0 mg/mL的对照品贮备液。精密量取贮备液10 mL，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，制成浓度为0.047 2 mg/mL的对照品溶液。
供试品溶液 取猫豆胍样品约35 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，即得。
阴性对照溶液 以0.1 mol/L冰醋酸溶液作为阴性对照溶液。
5.3 线性关系考察
精密量取 5.2 项下对照品贮备液 0.5，1，2，4，8 mL，分别置于10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，摇匀，制成浓度分别为 0.005 9，0.011 8，0.023 6，0.047 2，0.094 4 mg/mL的系列溶液，分别进样测定。以对照品进样量(μg)为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行线性回归计算，得线性回归方程为:Y=2 000 000X－29 078，r=0.999 7。结果表明，猫豆胍进样量在0.118～1.888 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
5.4 精密度实验
取同一份对照品溶液，重复进样测定 6次，RSD为0.89%，表明本法精密度高。
5.5 重复性实验
取同一批样品6份，按5.2项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，RSD为1.60%，表明本法重复性良好。
5.6 稳定性实验
取同1份供试品溶液，室温放置。分别于0，2，4，8，12 h进样测定，结果RSD为0.63%，表面样品溶液在室温下12 h内稳定。
5.7 加样回收率实验［4］
取已知含量的同一批样品9份，每3份为1组，分别加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，进样测定，计算回收率和RSD，结果见表1。
表1 加样回收率实验结果(n=9)
5.8 样品的含量测定
取3批猫豆胍样品，每批2份，按“5.2”项下方法制备供试品溶液，每份样品进样测定3次。另取对照品溶液，进样测定。猫豆胍的平均含量为98.06%，RSD为1.04%。
6 讨论
猫豆是广西特色药材资源，从猫豆中提取左旋多巴的技术已经比较成熟并实现了产业化。为充分利用猫豆资源，我们对猫豆中的单体成分猫豆胍进行了研究。前期研究表明，猫豆中的猫豆胍含量约为0.35%，具有进一步开发利用的价值。
实验中对薄层色谱法鉴别猫豆胍的展开条件进行了探索，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)展开时，展开速度较慢，样品斑点分不开，脱尾较严重;以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)进行实验，样品无法展开。经反复探索，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)为展开剂时，展开较好。
检测波长的选择:猫豆胍在324 nm波长有最大吸收，在246 nm波长有次大吸收。在246 nm波长处测定，样品中的少量左旋多巴和其它杂质成分也有吸收，对实验有一定干扰。而采用324 nm波长进行测定，杂质成分在该波长条件下无吸收，专属性强，故确定测定波长为324 nm。
参考有关文献［5］，以0.1 mol/L 冰醋酸-甲醇(90 ∶10)为流动相测定猫豆胍含量时，出峰时间过早，样品峰未能与溶剂峰分离。当流动相比例调整为0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5)时，猫豆胍的保留时间在7 min左右，分离度好和峰形均较好。
实验结果表明，所建立的猫豆胍质量标准，可有效控制产品质量。
［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海:上海科学技术出版社，1977:1423.
［2］蒋伟哲，周燕文，吴 闯，等.不同产地猫豆中左旋多巴的含量比较［J］.中草药，2000，31(11):861.
［3］黄增琼，蒋伟哲，黄兴振，等.猫豆胍镇静催眠和抗震颤麻痹作用研究［J］.中草药，2009，40(2):276-278.
［4］谢卫锋，高玉珍，陈莉琳.感冒滴丸质量标准研究［J］.中成药，2008，30(8):1171-1174.
［5］黄海滨，许学健，奉建芳.高效液相色谱法测定猫豆中左旋多巴的含量［J］.广西植物，1994，14(3):293-294.
