参桂胶囊处方再优化的实验研究

邓向涛， 董玉秀， 李宗铎

(1.河南省肿瘤医院，河南 郑州450003;2.河南中医学院，河南 郑州450003)

参桂胶囊由人参、川芎、桂枝三味中药研制而成，具有益气通阳、活血化瘀的功效，临床上用于缺血性心脏病疗效显著。现代研究表明，人参的主要有效成分是人参总皂苷，其中人参皂苷Rb组分(包括Rb1、Rb2、Rb3)可明显增强皮下注射异丙肾上腺素小鼠的耐缺氧能力，对抗脑垂体后叶素所致大鼠急性缺血性心电图改变［1］;人参皂苷 Re、Rg1、Rb2、Rc对整体动物的冠状动脉、脑血管、椎动脉、肺动脉均有扩张作用［2］。川芎的活性成分有阿魏酸、川芎嗪、川芎挥发油，阿魏酸具有抑制血小板聚集、促进血小板解聚、抗血栓形成、解除血管平滑肌痉挛、抗氧化、提高膜稳定性、调节免疫等作用［3］;川芎嗪能够扩张血管，增加冠脉流量，改善心肌供氧，降低心肌耗氧［4］;川芎挥发油具有改善微循环、增加脑血流量等作用［5］。桂枝挥发油中的主要成分桂皮醛有镇静、镇痛、解热、扩张血管、降压、解痉、活血通经作用［6］。本文从各药物所含有效成分入手，采用均匀设计方法筛选出最佳组合与配比，为参桂胶囊的二次开发提供依据。

1 仪器与材料

ASB240U生物信号分析系统:成都遨生电子有限公司。

人参皂苷(武汉生物科技有限公司，总皂苷含量为90.82%，人参皂苷Rg1和Re的总含量为17.44%)，盐酸川芎嗪(北京市燕京制药厂，含量为100%)，阿魏酸(武汉远城科技发展有限公司，含量为74.5%)，川芎挥发油、桂枝挥发油(吉安市福达天然药用油厂)，参桂胶囊(上海玉丹药业有限公司，批号050328，临用前用0.5%CMC－Na溶液配成所需浓度)，戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20020915)，垂体后叶素(上海第一生化药业有限公司，批号051103，临用前用NaCl注射液配成1 u/mL的浓度)，吐温－80(江苏晨牌药业集团)。

Wistar大鼠，体重230～250 g，♀♂各半，河南省实验动物中心提供，合格证号:医动字第410117号。

2 方法与结果

2.1 剂量设置

参桂胶囊处方中治疗心肌缺血的物质基础主要有:人参皂苷、阿魏酸、川芎嗪、川芎挥发油和桂枝挥发油，参桂胶囊即是根据这些成分的理化性质提取研制而成，故以此为重新组方的对象。由于各有效成分在提取制备过程中存在一定的损失，故各有效成分的剂量设置大体以文献报道药材含量的最高值(川芎嗪除外)为上限。人参在原方中为君药，故人参皂苷剂量设置的下限不能为零，以制剂中的实测值为标准，其余成分剂量设置的下限均为零。为了减少试验次数，将有效成分中的川芎挥发油和桂枝挥发油合并为一个因素即芎桂挥发油(川芎挥发油和桂枝挥发油的混合物)，两者的比例与参桂胶囊的比例相同，即川芎挥发油∶桂枝挥发油=1.9∶0.6。经大鼠与人的剂量换算及动物预试验，确定垂体后叶素致大鼠心肌缺血实验中各有效成分的剂量范围为人参皂苷(X1)63～189 mg/(kg·d);阿魏酸(X2)0～16.4 mg/(kg·d);芎桂挥发油(X3)0～0.13 mL/(kg·d);盐酸川芎嗪(X4)0～576 mg/(kg·d)。

将上述四个因素各等分为7个水平，分别用1～7代表四个因素(X1、X2、X3、X4)的 7 个水平，按均匀设计 U7(74)表(表1)的安排进行试验。7个处方的受试品分别按表中的剂量配制(10 mL/kg)，溶剂为0.5%CMC－Na溶液，挥发油用吐温－80 增溶，用量为 0.68%［7］。

2.2 垂体后叶素致大鼠心肌缺血试验

取230～250 g Wistar大鼠90只，♀♂各半，随机分为9组，每组10只。处方1～7组分别灌胃相应的受试品;参桂胶囊组灌胃参桂胶囊内容物3.0 g/(kg·d);空白组灌胃0.5%CMC－Na溶液(内含0.68%吐温－80)。灌胃容积均为10 mL/kg。连续灌胃给药10 d，末次给药1 h后，3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(38 mg/kg)，将大鼠背位固定，电极连接于ASB240U生物信号分析系统，记录正常Ⅱ导联心电图，然后由舌下静脉注射垂体后叶素(Pit)0.5 u/kg(0.5 mL)，速度 10 s推完，即刻记录静脉注射后 15 s，30 s，1 min，2 min，3 min，5 min时的Ⅱ导联心电图，测定给Pit前后T波峰值的变化，以3 min内T波变化值为指标，用SPSS(社会科学统计软件包)11.0软件进行组间比较;用UD(均匀设计)2.20软件进行多元回归分析，预测优化结果。见表1。

表1 均匀设计U7(74)表

2.3 结果与分析

2.3.1 组间比较

以3 min内T波变化值为指标，各组之间用SPSS 11.0软件进行单因素方差分析，结果见表2。除处方1外，其余处方均显著降低3 min内T波变化值(P＜0.05);处方2和处方5的对抗作用极显著，与参桂胶囊组相比也有显著性差异(P＜0.05)。

2.3.2 回归模型的建立与分析

均匀设计的实验结果见表3。

表2 垂体后叶素(pit)致大鼠3 min内T波变化

表3 均匀设计试验结果

以各原料药的剂量为相应的因素值，3 min内的ΔT值为Y值，应用UD 2.20软件进行二次多项式逐步回归分析，求得回归方程为:

复相关系数r=0.999 9，方差分析显著，结果见表4。

回归方程中的Y值代表处方对垂体后叶素致心肌缺血拮抗作用的强弱，其值越小说明拮抗作用越强，处方的疗效越好，故对试验条件进行优化时，Y值应取最小值。采用网格尝试法优化，UD2.20软件得出的结果为:X1(人参皂苷)63 mg;X3(芎桂挥发油)0.13 mL;X4(盐酸川芎嗪)438 mg。

表4 方差分析

2.4 优化处方的验证

取230～250 g Wistar大鼠20只，♀♂各半，随机分为2组，每组10只。优化处方组灌胃按优化结果所制成的受试品，空白组灌胃0.5%CMC－Na溶液，按照2.2项下的方法检测药效。结果见表5。

表5 优化处方验证结果(±s，n=10)

表5 优化处方验证结果(±s，n=10)

注:与空白组比较，*P＜0.01。

空白组0.46±0.12优化处方组 0.17±0.08*

优化处方组与空白组的比值小于均匀设计实验中各处方组与同批试验空白组的比值，说明此处方确为最佳处方，其中固态原料药人参皂苷，盐酸川芎嗪的配比(重量比)为1∶6.95，剂量为501 mg/kg;液态提取物川芎挥发油，桂枝挥发油的配比(体积比)为1.9∶0.6，剂量为0.13 mL/kg。

3 讨论

3.1 中医认为冠心病心肌缺血之病机以心脾肾阳气虚衰为本，瘀血浊邪阻滞脉道为标，本虚标实，因虚致实［8］。本实验根据文献报道，利用垂体后叶素使冠状动脉、毛细血管、小动脉、小静脉收缩，导致心脏血氧供应障碍，造成急性心肌缺血模型。由于大鼠心电图ST段极短，几乎与T波融合，故将T波抬高或下降幅度作为评价心肌缺血损伤的指标。

3.2 川芎嗪在药材中的含量很低，在制剂中难以检出，但其人工合成的盐酸盐用于缺血性心脑血管疾病效果显著，故川芎嗪最高水平剂量的设定参照临床上的最高用量。

3.3 UD 2.20软件的分析结果中，阿魏酸的量为零，优化处方最终由人参皂苷、川芎挥发油、盐酸川芎嗪、桂枝挥发油组成。其中，人参皂苷是人参中的有效物质，川芎挥发油和川芎嗪是川芎中的有效物质，桂枝挥发油则是桂枝中的有效物质。从有效成分的归属上看来，优化处方与原处方的组成相一致。与组方成分相比，优化处方中缺少阿魏酸，这可能与下列因素有关:实验设置的剂量与其它组分相比偏低，优化结果易趋于零;阿魏酸的主要药理作用为改善血液的流变性，在治疗心肌缺血方面处于辅助地位。

［1］陈可冀.冠心病心绞痛的治疗研究述评［J］.北京中医学院学报，1989，12(3):1.

［2］李天宝.中医治疗冠心病心绞痛近况［J］.新中医，1992，1(6):51.

［3］于幼海.冠心病心绞痛中医药治疗近况［J］.上海中医药杂志，1989，4(6):33.

［4］李宗铎，索润堂.参桂胶囊药理学研究［J］.北京中医药大学学报，2003，26(4):56－58.

［5］殷惠军，蒋跃绒，刘 颖，等.参桂胶囊对心肌细胞能量代谢及脂质过氧化影响的研究［J］.中医药信息，2004，21(3):71－72.

［6］殷惠军，蒋跃绒，刘 颖，等.参桂胶囊对大鼠心肌梗死后心功能影响的研究［J］.上海医药，2005，26(10):447－448.

［7］范碧亭.中药药剂学［M］.上海:上海科技出版社，2002.237.

［8］张秋娟，赵 红.中医药治疗冠心病的机制研究及对患者心功能的影响［J］.中国临床康复，2004，8(15):2942－2943.