粉螨性哮喘患者脱敏治疗前后细胞因子的变化*

陈秀春 周 晶 傅 晓 李朝品

(1. 泰山医学院，山东 泰安 271000；2. 安徽理工大学医学院，安徽 淮南 232001)

全球约有10%的人群患尘螨引起的变态反应性疾病，细胞因子和炎症介质在哮喘的发病中起着重要作用，研究其在哮喘气道炎症中的作用和临床意义，了解脱敏治疗的机制，将有助于临床对螨性哮喘治疗的不断完善和改进。为探讨免疫治疗对患者免疫功能的影响，采用粉尘螨变应原脱敏注射治疗螨性哮喘患者，观察其血清免疫学指标的变化，报告如下。

1 对象和方法

1.1对象 螨性哮喘患者选自教学医院，参照《实用内科学》第10版哮喘诊断标准，并经皮肤挑刺实验阳性、鼻腔激发试验阳性、血清粉尘螨特异性IgE测定作出判断。其中，男46例，女30例；年龄12-56岁，平均31.2岁。

1.2方法 所有患者治疗前，后均进行血清总IgE、螨特异性IgE(sIgE)、螨特异性IgG(sIgG)；CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+、mIL-2R检测，随机分实验组和对照组。

1.2.1治疗方法 参照以往文献进行[1]，每7天左右更换剂量皮下注射粉尘螨变应原浸液1次，剂量依下表执行。所有患者均自9月中旬起接受治疗16周，脱敏期间不限制对症治疗药物的使用。对照组平喘药常规对症治疗。

1.2.2检测方法 ELISA法检测血清总IgE、螨特异性IgE(sIgE)、螨特异性IgG(sIgG)按说明进行[2]。外周血CD3+、CD4+、CD8+、mIL-2R检测采用生物素-链霉亲和素(Biotin-Streptavidin，BSA)进行，操作参照以往文献进行[3]。

1.2.3疗效判断标准 与治疗前一年同期(9月～12月)对比、①显效:哮喘发作次数明显减少，每季度少于1次，发作程度亦明显减轻，不再出现喘鸣，肺部无或仅有少许哮鸣音②有效：哮喘发作次数减少，每月少于1次，发作程度亦减轻，仅有轻度喘鸣，能够平卧；③无效：治疗后无变化，哮喘发作无好转。

1.3试 剂 粉尘螨变应原浸液按照WHO(1984)标准自制，先制成蛋白质浓度7.4 mg/ml的粗制螨浸液，再用Sephadex G-75层析，取其部分纯化浸液，用于体外检测。皮肤挑刺实验用1:10(W/V)。马抗人IgE抗体购自北京生物制品研究所。辣根过氧化物酶-马抗人IgE结合物购自上海第二医科大学第三人民医院。抗人IgG-HRP为卫生部北京生物制品研究所产品。IgE工作标准液购自北京生物制品研究所，含量170001 U/ml。牛血清白蛋白(BSA)为美国Sigma公司产品。BSA、T细胞亚群及mIL-2R诊断剂购自上海市静安区医学化验研究所，淋巴细胞分离液购自上海生化试剂二厂，批号011215.

1.4仪器 Spector-I型酶标分析仪(美国产)；恒温培养箱(上海医疗器械厂)；超净工作台(苏州医疗器械厂)；753-B型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)；MDF-135型C02培养箱(日本产)。

1.5资料处理 采用t检验和χ2检验。

2 结 果

与治疗前相比，实验组46例和显效38例，无效8例，总有效率为82.61%；血清总IgE、螨特异性IgE均无明显变化，螨特异性IgG性升高；外周血CD3+、CD4+ 含量增加，CD4+/ CD8+ 比值上升，CD8+ 含量相对稳定。对照组30例患者治疗前后免疫学指标无明显变化(见表1)。

表1 螨过敏性哮喘患者脱敏治疗前后免疫学指标检测结果(n=46)

与实验组治疗前相比P<0.01；与对照组治疗后相比P<0.01。

3 讨 论

脱敏疗法是针对特异性变应原所致的I型变态反应病,如花粉症、支气管哮喘、常年性变应性鼻炎等。通过逐渐增加、反复皮下注射特异性变应原的方法，提高患者对特异性变应原的免疫耐受力，以达到再次暴露于特异性变应原后不发病或虽发病，但症状大为减轻的目的。本研究经皮肤挑刺实验阳性、鼻腔激发试验阳性、血清粉尘螨特异性IgE测定选择46例对粉尘螨过敏性哮喘患者，用粉尘螨变应原浸液脱敏治疗一疗程。结果82.61%(38/46)的患者与上年同期比较，哮喘发作程度、频率均有所下降。

多数学者认为脱敏治疗的疗效与体内特异性IgG类封闭抗体的生成有关[4]。IgG作为封闭抗体，在免疫治疗后即产生，并在整个疗程中保持上升趋势。在血液和细胞外液中游离存在的IgG可与入侵机体的抗原结合，与肥大细胞表面的IgE竞争，在变应原粘附于肥大细胞表面的IgE之前中和变应原，从而抑制IgE介导的变态反应。本组病例治疗后，虽然血清螨特异性IgG升高，但未发现封闭抗体的产生与临床疗效之间存在明显的相关性。脱敏治疗过程中患者血清总IgE无显著改变，但螨特异性IgE最初是升高，随后是降低[5]。

CD3+ 是成熟T细胞的标志，通常代表总T细胞；CD4+ 代表Th/Ti, CD8+ 代表Ts/Tc, CD4+/ CD8+ 的比例关系是机体免疫调控网络的重要枢纽。生理状态下，CD4+和 CD8+ 相互协调、相互制约，处于动态平衡。本组病例免疫治疗后，其外周血CD3+ 增加，即T细胞总数增加，CD4+/ CD8+ 比值升高，提示脱敏治疗对机体的T细胞亚群具有一定影响，可能具有使机体的CD4+ 辅助性T细胞(helperTcell,Th)增加的作用。

根据CD4+ Th细胞所分泌的细胞因子不同，将其分Th0、Th1和Th2三种类型。其中Th1细胞偏向分泌IL-2、IFN-r,TNF-β 等I型细胞因子，成为Th1型细胞因子。Th2细胞偏向分泌IL-4、IL-5、IL-6等II型细胞因子，称为Th2型细胞因子。Th0细胞在细胞因子、激素、抗原等因素的作用下，向Th1或Th2分化。现有研究证实，呼吸道变应性疾病的发生源于特异性Th细胞的分化发生偏移，最终导致体内Th1和Th2分化反应失衡，表现为以Th2反应为主。本组病例治疗后，患者IL-2分泌增加，IL-4分泌减少。IL-2在Th0向Th1分化、IL-4在Th0向Th2分化过程中起重要作用。因此推测螨浸液注入机体后，皮下组织的抗原呈递细胞受刺激产生的细胞因子，使变应原特异性Th细胞的分化发生转移，似有抑制Th2型反应，增强Th1型反应的趋势，从而使Th1和Th2反应重新恢复正常。

过敏性哮喘患者脱敏治疗过程中，机体的免疫学网络变化复杂。免疫治疗过程中螨特异性IgG、IgE的产生对患者的症状缓解具有重要作用，脱敏治疗以调节患者细胞免疫功能为主，使机体的CD4+ 辅助性T细胞的作用增强。

[1] 孟阳春,李朝品,梁国光.蜱螨与人类疾病[M].合肥:中国科学技术大学出版社,1995.361-368.

[2] 李朝品,王建.血清IgE和粉螨特异性IgE在尿螨病诊断中死亡应用[J].中国基层医药，2002,9(2):103-105.

[3] 顾瑞金.变态反应学[M].北京:中国协和医科大学出版社，2000.353-355.

[4] Chashi Y,Nakai Y,Tanaks A,etal,Allergen-specific immunotherapy for allergic rhinitis:a new insight in to its clinical efficacy and mechanism[J].Acta otolaryngol,1998,538(2):178-190.

[5] 董震，余翠萍，变应性鼻炎免疫治疗进展[J].中华耳鼻咽喉科杂志，2000，35(4)：306-309.