ＨＰＬＣ法测定口炎清片中绿原酸的含量

宋海浪

【摘要】 目的 建立口炎清片绿原酸含量测定的方法。方法 用C18柱，乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）为流动相，检测波长327 nm。结果 在0.018~0.090 mg/ml范围内呈良好的线性关系（r=0.998 6）。平均回收率为99.61%，RSD为1.16%（n=6）。结论 方法重复性好，测定结果准确可靠。

【关键词】 口炎清片；绿原酸；高效液相色谱法

Assay of chlorogenic acid in kouyanqing tablets by HPLC

SONG Hai-lang.Guangzhou Yongfutan pharmaceutical Co.Ltd.，Guangzhou 510978，China

【Abstract】 Objective A method was established for the assay of Chlorogenic acid in Kouyanqing tablets.Methods The C18 column was used and acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution (13:87) as mobile phase，detected at 327 nm.Results The linear range was 0.018~0.090 mg/ml (r=0.9986).The average recovery rate was 99.61%,RSD1.16%(n=6).Conclusion The method is accurate,reliable and with good repeatability.

【Key words】 Kouyanqing tablets；Chlorogenic acid；HPLC

1 仪器与试药

1.1 仪器 ESJ182-4电子天平（沈阳龙腾电子有限公司），LC-10AT液相色谱仪（岛津仪器有限公司），超声波发生器（天津奥特赛斯仪器有限公司），DimensionsC18色谱柱 。

1.2 试剂与试药 绿原酸对照品（批号为：110753-200212由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，乙腈为色谱纯，水为重蒸水（自制），其他试剂为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱 C₁₈硅烷键合硅胶（5 μm，4.6×250 mm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；检测波长327 nm。

在此条件下，出峰时间适当，色谱峰峰形理想，分离度好，既可以保证样品的测定，也可以排除其他组分的干扰。理论

板数按绿原酸峰计算应不低于1000。

2.2 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 ml含绿原酸43.2 mg 的溶液（10℃以下保存），即得。色谱图如图1。

2.3 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下样品10片，研细，取0.5 g，精密称定，精密加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振摇，超声处理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，作为供试品溶液。色谱图如图2。

2.4 阴性对照溶液的制备 取按处方比例及制备工艺制备的不含金银花（绿原酸）的阴性对照样品，照2.3项下操作，同法制成阴性对照溶液。

2.5 空白干扰试验 吸取阴性样品10 μl进样，观察在样品峰的保留时间处是否有杂质峰。测得结果表明：在样品保留时间处无明显杂质峰干扰。色谱图见图3。

2.6 线性关系考察 分别配制对照品溶液 0.018、0.036、0.054、0.072、0.090 mg/ml进样10 μl，测定，以峰面积积分值为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得到回归方程。见表1。

结果表明绿原酸在0.018~0.090 mg/ml之间有良好的线性关系。

2.7 稳定性试验 分别取同一份供试品溶液10 μl，按上述色谱条件每隔一定时间测定其含量，考察样品溶液的稳定性，计算相对标准偏差，见表2。

2.8 精密度试验 取同一供试品溶液，进样10 μl,重复进样6次测定峰面积计算相对标准偏差。见表3。

2.9 重复性试验 精密称取样品6份，制成供试品溶液，按已拟定的色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差。见表4。

1.10 回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的口炎清片(050301) 10片，研细，取六份该粉末，每份0.26 g，精密称定，分别加入绿原酸对照品（0.36 mg/ml）4 ml。加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振摇，超声处理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定，以下式计算回收率，结果列于表5。

回收率%=（实测绿原酸量-样品中含量）/加入量×100%

2.11 样品中含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl依上述色谱条件测定,计算含量。样品测定结果见表6。

经对5批同一生产工艺生产的样品进行含量测定，结果表明，不同批次样品中绿原酸含量为2.41~2.55 mg/片，平均含量为2.48 mg/片，含量波动不大。

3 讨论

具文献资料报道，口炎清片中绿原酸的含量测定方法较为成熟，大都采用HPLC法。流动相多为乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），检测波长327 nm。根据口炎清片处方组成的特点，有目的筛选了乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）和乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），经实验确证采用乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）为流动相，绿原酸的分离效果好，且出峰时间较适当。选择绿原酸的最大吸收波长317 nm为检测波长，检测灵敏度高。

本论文的研究结果证明，绿原酸的含量测定方法操作简便，测定结果准确，重复性好，回收率高，是检测含金银花或山银花的制剂中绿原酸含量较为理想的方法。

参 考 文 献

［1］ 国家药典委员会.中国药典一部.化学工业出版社，2005：152.

［2］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.中国医药科技出版社，1994：69.