小儿肺热咳喘口服液质量标准的研究

赵文明 胡英婕 承 伟

[摘要] 目的 建立小儿肺热咳喘口服液的质量标准。方法 采用薄层色谱(TLC)法对口服液中的甘草酸进行定性鉴别;采用双波长分光光度法测定口服液中黄芩苷的含量,以277nm为检测波长,242nm为参比波长。结果 在薄层色谱(TLC)中能检测到甘草酸;黄芩苷浓度在1-9 μg/ml范围内线性关系良好,r=0.9996,平均回收率为99.42%,RSD为1.11%。结论 该操作方法简便易行,重现性好,结果准确,适用于该制剂的质量控制。

[关键词] 小儿肺热咳喘口服液;双波长分光光度法;黄芩苷;甘草酸;薄层色谱法

[中图分类号] R965.3[文献标识码] A[文章编号] 1004-8650(2009)06-03-03

Quality standard of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye

ZHAO Wen-ming , HU Yin-jie , CHENG Wei*

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye. Methods Thin layer chromatography(TLC) was used for qualitative identification of glycyrrhizic acid. The content of baicalin was determined by double wavelength spectrophotometry. The determination wavelength was at 277 nm, and the comparison wavelength was at 242 nm. Results glycyrrhizic acid could be detected by TLC.The linearity range was 1-9 μg/ml with a correlation coefficient r = 0.9996, the average recovery was 99.42% , and RSD = 1.11% . Conclusion The method was simple, convenient, quick and sensitive. It provided an effective method for quality control of Xiao'er Feire Kechuan Koufuye.

[Key words] Xiao'er Feire Kechuan Koufuye; double wavelength spectrophotometry; baicalin; glycyrrhizic acid; Thin layer chromatography(TLC)

小儿肺热咳喘口服液由麻黄、苦杏仁、黄芩、石膏、甘草等十一味中药组成。具有清热解毒,宣肺化痰之效,用于热邪犯于肺卫所致发热,汗出,微恶风寒,咳嗽,痰黄或兼喘息口干而渴等症[1]。小儿肺热咳喘口服液为2005年版药典新增品种,含有多种有效成分,但药典只测定了一种有效成分的含量,本实验采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的甘草酸进行了定性鉴别,并采用双波长分光光度法对黄芩苷进行了含量测定[2],从而使其质量标准更加完善,真正达到保证药品安全、有效,维护人民身体健康的目的。

1仪器与材料

CS-9301(PC)S R928型薄层扫描仪(日本SHIMADZU 公司),TU-1800 紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司),TG328B电光分析天平(上海医用激光仪器厂),FA2004N电子天平 (上海精密科学仪器有限公司), KQ-100A型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

硅胶GF254(青岛海洋化工集团公司),甲醇(色谱醇,天津市康科得科技有限公司),无水乙醚(分析纯,天津试剂一厂),盐酸(分析纯,沈阳东陵区红日化工厂),无水乙醇(分析纯,沈阳化学试剂厂),正丁醇(分析纯,沈阳化学试剂厂),冰醋酸(分析纯,沈阳化学试剂厂)。

小儿肺热咳喘口服液(黑龙江葵花药业股份有限公司,批号:20050204、20050309、20050613、20050814、0050922),甘草阴性样品(自制,批号:20060301),黄芩阴性样品(自制,批号:20060416),甘草酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:105429-200312),黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:154725-200401)。

2方法与结果

2.1甘草酸的鉴别

2.1.1 对照品溶液的制备:精密称量甘草酸对照品2 mg, 用甲醇制成浓度为1 mg/ml的对照液溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备:精密量取小儿肺热咳喘口服液20 ml,加稀盐酸1 ml,用乙醚振摇提取两次,每次10 ml,合并乙醚提取液,摇匀,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液[3]。

2.1.3 阴性对照品溶液的制备:取不含甘草的其他药材,照小儿肺热咳喘口服液制备工艺制得甘草阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制成溶液,作为阴性对照液。

2.1.4 甘草酸的鉴别:吸取甘草酸对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液20 μl,分别点于同一硅胶GF254板上,以正丁醇-醋酸-水(6:1:3)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(254 nm)下检视[4]。供试品在与对照品相应位置上出现相同的暗斑点,而阴性样品在此处则无斑点(图1)。

2.2黄芩苷的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备:精密量取黄芩苷对照品10 mg,用95%乙醇溶解后定容于100 ml容量瓶中,配制成0.1 mg/ml的对照品储备液。精密吸取0.5 ml该储备液于10 ml容量瓶中用70%稀释至刻度,配制成5 μg/ml的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取制剂2 ml,置100 ml容量瓶中,用70%乙醇稀释至刻度,过滤,再精密量取滤液1 ml置10 ml容量瓶中,用70%乙醇稀释至刻度,配制成供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备:按配方制备方法,制备缺黄芩苷的口服液,按供试品溶液配制方法配制成阴性对照液。

2.2.4测定波长及参比波长的选择:量取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液,分别以水为空白,在220-300 nm范围内进行紫外扫描。扫描图见图2。

由图可知,在波长277 nm与242 nm处,辅料吸收度差值ΔA=A277-A242=0。因此确定检测波长为277 nm,参比波长为242 nm,用等吸收双波长消去法测定黄芩苷的含量 [5-6]。

2.2.5 线性关系考察:精密吸取黄芩苷对照品储备液(0.1 mg/ml)0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 ml于10 ml容量瓶中,用70%乙醇稀释至刻度,用紫外分光光度计在242 nm、277 nm波长处分别测定其吸光度,以吸光度ΔA为纵坐标,浓度为横坐标,计算回归方程和相关系数。黄芩苷浓度在1-9 μg/ml范围内的回归方程: ΔA =0.050C+0.052,r=0.9996。

2.2.6精密度试验:精密吸取同一黄芩苷对照品溶液(5 μg/ml),以70%乙醇为空白,分别测定六次242、277 nm波长处的吸光度值,重复进样6次,RSD为0.22%。

2.2.7重现性试验:取同一批号(20050313)小儿肺热咳喘口服液六支,按“2.2.2项”下配制照供试品溶液,配制成六份供试品溶液。以70%乙醇为空白,分别测定242nm、277 nm波长处的吸光度值,RSD为0.47%。

2.2.8 稳定性实验:取同一供试品溶液,以70%乙醇为空白,分别在0、1、3、5、7、8 h测定242nm、277 nm波长处的吸光度值,所配溶液在8小时内吸收度几乎无变化,表明供试品溶液在8小时内稳定。

2.2.9 加样回收率实验:精密称取105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品6份(三个水平,每个水平两份),加至已知含量的小儿肺热咳喘口服液(批号20050313)中,按“2.2.2项”下供试品溶液配制方法,配制成加样供试品溶液。以70%乙醇为空白,分别测定242nm、277 nm波长处的吸光度值,实验结果表明,本方法回收率较好,结果见表1。

2.2.10 样品含量测定

取五个批号小儿肺热咳喘口服液,每个批号2瓶,按照黄芩苷含量测定方法,测定黄芩苷含量,结果见表2。

3讨论

3.1本品组方较复杂,干扰因素多,经反复实验,试用多种展开系统及样品纯化方法,摸索出了甘草的鉴别方法,方法分离效果好,斑点圆整,比移值适中,重现性和专属性好,可有效控制制剂质量。

3.2由于本方药味较多,成分复杂,若经化学方法分离提纯后单波长分光光度法测定含量,不仅操作繁琐,而且不能完全消除干扰。本文所用的双波长紫外分光光度法样品不用事先分离,直接稀释后测定,经计算后也可消除干扰组分的影响,是一个简便、可行的方法。

3.3本法所用仪器设备简单,只需普通的分光光度计,主要误差来源是仪器波长刻度的位移对吸收曲线斜坡上的吸收值测定误差,因而操作时要仔细,仪器波长要标准。

参考文献:

[1] 钱忠直,齐平,王国荣.《中国药典》2005年版 (一部)品种主要增修订情况[J].中国药品标准,2005,6(1):25.

[2] 蒋巍,刘艳杰等.黄芩苷含量测定方法研究进展.天津化工,2006,18(6):76-78.

[3] 白莉莉,吴新安,赵刚.咳速停口服液质量标准研究.中国药房,2008,19(3):213-214.

[4] 赵昕,张治国,郑家富.胃灵散质量标准研究.时珍国医国药,2001,12(5):408-409

[5] 李发美.分析化学.北京:人民卫生出版社,2004:212-213.

[6] 易毅仁,王建.双波长分光光度法测定伤速愈喷雾剂中黄芩苷的含量.基层中药杂志,2001,15(3):8-9.

(收稿日期2009-05-08)