基于多指标成分一测多评及多模式识别方法的陈香露白露片质量分析

摘要：目的：通过HPLC多成分一测多评含量测定方法及多模式化学识别方法对陈香露白露片进行质量分析研究。方法：采用高效液相色谱法，以橙皮苷为内参物，建立与其他5个成分之间的相对校正因子，计算5种待测成分的含量，实现一测多评。同时与外标法测定结果进行比较，验证QAMS法的定量评价和稳定可控。通过聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）分别探讨不同厂家陈香露白露片的质量。结果：橙皮苷与甘草苷、甘草酸铵、β-细辛醚、木香烃内酯、去氢木香内酯的相对校正因子分别为0.681、3.744、0.680、1.030、1.068，然后与外标法进行比较。CA可将17批次陈香露白露片聚类为2类，PCA结果提取了2个主成分，OPLS-DA能有效地将不同厂家的产品明显区分开来。结论：以橙皮苷为内参物，建立陈香露白露片中5个成分的QAMS法准确、可行，可用于陈香露白露片的定量分析及质量控制。

关键词：陈香露白露片；一测多评法；高效液相色谱法；化学模式识别

中图分类号：R286.0文献标志码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1674-4977.2025.01.003

基金项目：湖北省药品监督管理局药品安全监管科研项目（20220117）。

0引言

一测多评（quantitative analysis of multi-compo？ nents by single marker，QAMS）由王智民[1]于2006年首次提出。它是一种高效、简便的测定方法，适用于中药的多指标质量控制评价。该方法利用样品中各活性成分之间的关系，仅选定1个化学成分（内参物，通常为典型成分且对照品低价易得），建立内参物与其他多种成分间的相对校正因子，实现多个同类成分的测定[2]。

2010年版《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）首次收录QAMS法，不过当时其应用范围仅局限于黄连。之后，由于QAMS法有效解决了对照品不足以及多指标测定成本高昂等难题，其应用领域不断拓展，被广泛应用于各类中药质量评价研究，在推动中药质量精准把控方面发挥着越来越重要的作用。到2020年版《中国药典》时，QAMS法的应用已延伸至中药饮片、提取物以及制剂等多个方面。

陈香露白露片的处方由陈皮、甘草、川木香、大黄、石菖蒲五味中药和碳酸镁、氧化镁、次硝酸铋、碳酸氢钠4种化学药组成。现行质量标准为WS3-B-1553-93《陈香露白露片》，仅规定了采用滴定法测定次硝酸铋中铋的含量[4]，未对其他成分，特别是甘草、陈皮等中药成分进行控制。而利用高效液相色谱（HPLC）法测定甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、β-细辛醚这6种有效成分的含量[5-6]，将中成药含量测定与化学模式识别相结合，可以有效分析和控制中成药质量。本研究以17批陈香露白露片样品为对象，测定其有效成分含量，并借助聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法（OPLS-DA）等模式，对不同厂家生产的陈香露白露片进行分析，为通过多指标含量测定评价不同厂家产品质量的优劣提供有效的参考。

1仪器与试剂

1.1仪器

1260高效液相色谱仪，DAD检测器（安捷伦公司）；MS205DU十万分之一电子天平（梅特勒）；AE100电子天平（梅特勒）；KQ-300DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q Reference超纯水机（默克密理博）。

1.2样品

17批陈香露白露片样品来自10个生产厂家：云南白药集团大理药业有限责任公司（企业1），批号DCA2139（S1）；广西邦琪药业集团有限公司（企业2），批号20221118（S2）；广西慧宝源医药科技有限公司（企业3），批号20221214（S3）、230502（S4）；广西圣特药业有限公司（企业4），批号230211（S5）、230510（S6）；广西壮族自治区花红药业集团有限公司（企业5），批号20220702（S7）、20220209（S8）；贵州百灵企业集团制药股份有限公司（企业6），批号20221204（S9）、20230306（S10）、20220605（S11）；葫芦娃药业集团广西维威制药有限公司（企业7），批号221002（S12）、230901（S13）；湖南汉森制药股份有限公司（企业8），批号2303119（S14）、2305108（S15）；四川康福来药业集团有限公司（企业9），批号2220901（S16）；重庆科瑞制药（集团）有限公司（企业10），批号833008（S17），以上样品规格均为每片重0.3 g。

1.3试剂

对照品甘草苷（批号111610-202209，纯度95.2%）、甘草酸铵（批号110731-202122，纯度94.4%）、橙皮苷（批号110721-202220，纯度97.2%）、细辛醚（批号112018-201802，纯度99.3%）、木香烃内酯（批号111525-202313，纯度99.6%）、去氢木香内酯（批号111525-202313，纯度99.8%）均购自中国食品药品检定研究院。

乙腈和甲醇为色谱纯（湖北弗顿科学技术有限公司），其余试剂均为分析纯（购于国药集团化学试剂有限公司），水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

采用Agilent5 TC-C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为0.1%磷酸水（A）-甲醇（B）-乙腈（C），梯度洗脱见表1。流速为1.0 mL/min，柱温为40℃，进样量为10μL。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液制备

取甘草苷、橙皮苷、甘草酸铵、β-细辛醚、木香烃内酯、去氢木香内酯对照品适量，精密称定，分别用体积分数为50%的甲醇溶解并稀释成质量浓度为78.64、63.58、159.3、23.66、20.92、36.56μg/mL的混合对照溶液。

2.2.2供试品溶液制备

取陈香露白露片10片，研细，精密称定粉末（过4号筛）0.5 g，精密加入20 mL体积分数为50%的甲醇，超声30 min，放冷，精密称定，用体积分数为50%的甲醇补足损失的重量，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，即得。

2.3相对校正因子（RCF）计算

采用多点校正法，精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、15μL，按色谱条件分别进样测定。以对照品易得、稳定且含量最高的橙皮苷作为内参物，建立该成分与其他5个待测成分之间的相对校正因子。公式为：

5个成分相对校正因子计算结果见表2。

2.4一测多评法和外标法测定结果比较

橙皮苷作为内参物，采用一测多评法（QAMS）同时测定5种成分含量，与外标法测定结果比较结果见表3。

5种成分QAMS计算结果与外标法（EMS法）测定结果的相对偏差（RSD）为±5%，无显著性差异，表明一测多评法测定结果准确可靠，能有效反映陈香露白露片的质量。运用SPSS软件进行PL回归计算，分析橙皮苷对于各目标成分的影响，结果见表4。

结果表明，两种方法差异无统计学意义（p<0.05，说明x对于y呈现出显著性影响）。本研究建立的相对校正因子准确可靠，QAMS法可用于陈香露白露片成分的同步定量检测。

2.5聚类分析（CA）

采用SPSS统计软件对17批次陈香露白露片中6种有效成分含量进行样品聚类。由图1可知，当分类距离为29时，17批样品分为两类：第一类为S1～S3、S5～S8、S16；第二类为S4，S9～S17。

当分类距离为20时，17批样品分为四类：第一类为S5、S6、S16；第二类为S1～S3、S7、S8；第三类为S10、S12、S13；第四类为S10、S12、S13、S14、S15、S4、S17、S9、S11。其中，S5、S6为企业4生产的不同批次，S7、 S8为企业5生产的不同批次产品，S12、S13为企业7生产的不同批次产品，S14、S15为企业8生产的不同批次产品。说明这四家企业生产的陈香露白露片批次间有效成分含量稳定，但不同厂家之间的陈香露白露片有效成分含量具有明显差异。

2.6主成分分析（PCA）

将17批陈香露白露片6种组分含量导入SIM？ CA14.0软件，进行PCA分析，得分矩阵图（R2x=0.446）见图2。从图2中可以看到样品间的分离趋势。x轴以上有8批，x轴上有1批，x轴以下有8批。

其中，位于第一象限的S7、S8为企业5生产的不同批次产品，位于第二象限的S14、S15为企业8生产的不同批次产品，位于第三象限的S12、S13为企业7生产的不同批次产品，位于第四象限的S5、S6为企业4生产的不同批次产品。从整体来看，不同厂家生产的陈香露白露片的有效成分含量存在一定差异。

2.7正交偏最小二乘法（OPLS-DA）

以17批陈香露白露片6种有效成分含量为变量，导入SIMCA 14.0软件进行OPLS-DA分析，得到的得分图和VIP图分别见图3和图4。

建立的OPLS-DA模型（R2x=0.53）可以对不同厂家间的产品质量进行判别。由图3可知，10家生产企业生产的陈香露白露片没有交叉。2个厂家生产的陈香露白露片批次间有交叉，证明2家生产企业批次间产品有效成分含量较稳定。

对成分含量进行变量投影重要性（VIP）分析，当某一成分含量VIP大于1.0时，表示该成分为重要变量。6个变量中橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵含量的VIP值大于1，可以标记不同厂家生产的陈香露白露片的成分含量存在差异，其余含量VIP值小于1，无法高效区分不同样品的产品质量。

3讨论

陈香露白露片的处方工艺较为简单，产品质量主要体现在药材品质的差异上。橙皮苷作为君药陈皮的主要成分，在不同生产企业产品中测得的含量差异较大。主要原因是各生产企业采购的药材产地、种植方式及采收年限不同。β-细辛醚、木香烃内酯、去氢木香内酯为挥发性成分，如果企业在药材购进及养护方面存在不当，将会导致其含量流失，从而产生差异。CA、PCA、OPLS-DA是含量测定结合化学模式识别应用最普遍的一种分析方法，其可以清晰地标明不同厂家间产品质量的差异。结果表明，CA能将17批次陈香露白露片清晰地分为2类。通过OPLS-DA分析结果可以找出影响陈香露白露片产品质量差异的3种主要成分。由于现行标准缺乏对该品种重要指标成分的控制，因而导致不同企业生产的陈香露白露片存在较大差异。

参考文献

[1]王智民，高慧敏，付雪涛，等.一测多评法中药质量评价模式方法学研究[J].中国中药杂志，2006，31（23）：1925.

[2]王智民，钱忠直，张启伟.一测多评法建立的技术指南[J].中国中药杂志，2011，36（6）：657.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[4]陈香露白露片：WS3-B-1553-93[S].

[5]张璐，戴群芳，陈思思.HPLC法同时测定陈香露白露片中7个成分的含量[J].药学实践与服务，2022，40（6）：553.

[6]胡昭君，陈斌，余岳林.HPLC法同时测定陈香露白露片中4种成分[J].中成药，2019，41（2）：274.

作者简介

李华，女，1982年出生，工程师，硕士，研究方向为中药分析。通信作者：张正悬，女，1990年出生，检验员，学士，研究方向为中药分析，836376191@qq.com。

（编辑：李钰双，收稿日期：2024-10-09）