MS-222对异育银鲫（Carassius auratus gibelio）麻醉复苏效果及抗氧化酶活性的影响
2025-01-24马之豪袁健美仇明徐超楠曹永军吕庭莉李强王加美乔帼
摘要为探究MS-222对异育银鲫（Carassiusauratusgibelio）麻醉效果、复苏效果以及抗氧化酶活性的影响，采用7个不同浓度（50、60、70、80、90、100和110mg/L）MS-222对异育银鲫（5.88±0.78）g进行麻醉，通过记录麻醉分期及其时间、鳃中抗氧化酶活性和相关基因的表达，确定异育银鲫的最适MS-222麻醉浓度和时间。结果表明：在MS-222浓度为60、70、80、90和100mg/L时，异育银鲫均可进入麻醉第Ⅰ期和第Ⅱ期，均能在10min内复苏；浓度低于50mg/L时，异育银鲫难以进入深度麻醉；浓度高于100mg/L时，异育银鲫累计死亡率为40%。选择MS-222浓度为60和100mg/L进行麻醉，进一步分析不同麻醉剂浓度对鱼体的潜在氧化损伤。100mg/LMS-222深度麻醉异育银鲫（约4min）后，鳃中GSH活性和MDA含量均显著上升（Plt;0.05）；HSP70、keap1、PIK3A1、nrf1、MAPK3和caspase3的mRNA相对表达量显著上调（Plt;0.05）；放入清水复苏6h时，鳃中POD活性显著下降（Plt;0.05），caspase3和LYZ基因表达量显著上调（Plt;0.05），异育银鲫逐渐恢复到麻醉前水平；60mg/LMS-222深度麻醉异育银鲫（24h）后，鳃中GSH活性上升（P＜0.05）；NQO、keap1、PIK3A1、Nrf1和MAPK3基因表达量显著上调（P＜0.05），放入清水复苏1min后，所测指标与麻醉前差异不显著（Pgt;0.05）。异育银鲫运输过程中适宜的MS-222浓度为60～100mg/L，科研试验中MS-222较适宜的浓度为100mg/L。
关键词麻醉剂；MS-222；异育银鲫；氧化损伤
中图分类号S96"文献标识码A"文章编号0517-6611（2025）02-0077-07
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.02.018
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
EffectsofMS-222onAnesthesiaRecoveryandAntioxidantEnzymeActivityofCarassiusauratusgibelio
MAZhi-hao"YUANJian-mei"QIUMing2etal
（1.CollegeofFisheriesandLifeScience，DalianOceanUniversity，Dalian，Liaoning116023;2.CollegeofMarineandBioengineering，YanchengInstituteofTechnology，Yancheng，Jiangxu224051;3.JiangsuMarineFisheriesResearchInstitute，Nantong，Jiangsu"226007）
AbstractInordertoinvestigatetheeffectsofMS-222onanestheticlevel，recoveryrateandantioxidantenzymeactivityofCarassiusauratusgibelio（5.88±0.78g），sevendifferentconcentrationsofMS-222（50，60，70，80，90，100"and110mg/L）wereset.TheoptimalanesthesiaconcentrationandtimeofMS-222toC.gibelioweredeterminedbasedontheanesthesiastageandtime，activitiesofantioxidantenzymesinthegillandmRNAexpressionofantioxidant-relatedgenes.TheresultshowedthatC.gibeliocouldenterthestageIandstageIIofanesthesiawhileanaesthetizedatconcentrationsof60，70，80，90and100mg/L，andcouldrecoverwithin10min.C.gibeliocouldnotenterdeepanesthesiawhiletheanestheticconcentrationlowerthan50mg/L，andthecumulativemortalitywas40%whiletheconcentrationhigherthan100mg/L.Furthermore，twoconcentrationsofMS-222at60mg/Land100mg/Lwereset，andC.gibelioexposedfordifferenttimetostudytheoxidativedamageofMS-222togills.Resultsshowedthatdeepanesthesiawith100mg/LMS-222（about4min），GSHactivityandMDAcontentingillsofC.gibelioweresignificantlyincreased（Plt;0.05）.ThemRNArelativeexpressionofHSP70，keap"PIK3A"nrf"MAPK3andcaspase3weresignificantlyup-regulated（Plt;0.05）.ThePODactivity，andmRNArelativeexpressionofcaspase3andLYZinthegillswererecoveredtothebasallevelafter6hofrecovery.Afterdeepanesthesiawith60mg/LMS-222（about24h），GSHactivityingillsincreasedandPODdecreasedsignificantly（Plt;0.05）.ThetranscriptionofgenesNQO，keap"PIK3A"Nrf"MAPK3andcaspase3weresignificantlyup-regulated（Plt;0.05）.After1minofrecoverywithinwater，therewasnosignificantdifferencewiththembeforeanesthesia.ThisstudysuggestedthattheappropriateconcentrationofMS-222inthetransportprocessofC.gibelioismorethan60mg/L，andtheconcentrationinscientificresearchesislessthan100mg/L.
KeywordsAnesthetic;MS-222;Carassiusauratusgibelio;Oxidativedamage
异育银鲫（Carassius auratus gibelio）是我国主要的淡水养殖鱼类之一，具有生长周期短、产量高、经济效益高及易于饲养等特点。在饲养、繁育、捕捞、运输、销售以及试验过程中，不恰当的人工操作会引起异育银鲫的应激反应［1］，影响鱼体健康，导致其发病甚至死亡，影响养殖产业的健康发展［2-4］。
麻醉是各种水产养殖操作过程中使用的缓解应激技术之一。麻醉剂可使鱼体鳃动频率下降，限制鱼体的活动能力，使鱼体保持镇静，避免挣扎或创伤。一种理想的渔用麻醉剂应具备无毒、价廉、易实施、可迅速麻醉、易于苏醒和应激损伤较小等特点［5］，目前常用的渔用麻醉剂有MS-222（又称鱼安定）、丁香酚、2-苯氧乙醇、CO2、乙醚、苯佐卡因等，其中，MS-222具有药物浓度低、麻醉快、复苏快、无毒副作用等特点，是美国食品和药物管理局（FDA）唯一批准用于食用鱼的麻醉剂［6］。MS-222被用于棘鲈（Sander lucioperca）、圆尾鱼（Cyclopterus lumpus）和远东鲶鱼（Silurus asotus）等鱼类的麻醉和转运［7-9］，效果良好。如体质量为（112.50±13.01） g棘鲈在MS-222浓度小于100 mg/L、23 ℃养殖条件下，复苏24 h后血清中葡萄糖、总蛋白和乳酸盐指数可回归正常水平［7］；体质量为（0.97±0.45） g圆尾鱼，在MS-222浓度为60 mg/L、12 ℃条件下麻醉效果较好，复苏时间短，具有良好的安全性［8］。
麻醉剂的浓度和麻醉时间对鱼体的生理状况产生不同的影响。已报道，一定剂量的MS-222会使西伯利亚鲟（Acipenser baerii）幼鱼的血液生化指标发生变化，甘油三酯（TGL）浓度和丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性升高，MS-222浓度为60 ～ 90 mg/L麻醉效果较为理想［10］；胡望娇等［11］以体质量为（13.78±3.15） g的松江鲈（Trachidermus fasciatus）为试验对象，研究不同浓度MS-222的麻醉效果，结果表明，松江鲈进入麻醉状态的时间随着MS-222浓度的升高而缩短，但复苏时间不断延长；MS-222（40 mg/L）麻醉大黄鱼幼鱼24 h后，幼鱼SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化相关酶活性升高，该条件下对大黄鱼肝脏、鳃丝和脑组织有一定损伤［12］。由此可知，理想的麻醉剂及合适的浓度在鱼类试验与生产实践中至关重要，但目前尚缺乏针对异育银鲫的MS-222最适麻醉浓度和麻醉时间的系统研究。
鱼鳃具有许多重要功能，如呼吸、渗透调节、排泄、免疫屏障等；鱼鳃又是与养殖水体直接相通，常被作为鱼类健康状况的表征之一［13］。笔者研究不同浓度MS-222对异育银鲫的麻醉效果；在高、低浓度麻醉下，以鳃组织为靶器官，通过测定抗氧化酶活性和相关基因mRNA表达，分析MS-222引起异育银鲫潜在的氧化损伤，确定异育银鲫最适麻醉浓度，以期为MS-222在异育银鲫生产实践和试验操作过程中的使用提供基础数据和技术指导。
1材料与方法
1.1试验材料
异育银鲫购自江苏盐城某苗种养殖基地，低温充氧运回实验室后，在（35×30×28）cm的养殖桶中暂养14d。养殖桶使用高锰酸钾消毒，自来水经曝气过滤48h后作为试验养殖用水。选取体长为（4.28±0.25）cm、体质量为（5.88±0.78）g的健康异育银鲫用于试验，试验期间水温为（25.0±0.5）℃、pH为6.8～7.3、溶解氧（DO）大于5mg/L。每日投喂商品饲料（粗蛋白含量为32.25%，粗脂肪5.90%，总钙1.17%和总磷1.23%，通威股份有限公司）3次，投喂时间分别为7：00、12：00和18：00，日投饵量为鱼体重的3%。1d换水1次，日换水量为1/3～1/2，1d清理1次残饵和粪便。
MS-222纯度为99%，购自北京绿恒兴贸易有限公司。
1.2试验方法
1.2.1不同浓度MS-222对异育银鲫麻醉效果的影响。
试验设置7个MS-222不同浓度组（50、60、70、80、90、100和110 mg/L）和对照组（CK），每组10尾鱼，观察并记录试验鱼的麻醉状况；并参考鱼类麻醉过程6期和复苏过程4期的特点（表1）［7，14-16］，根据异育银鲫的行为特征判定麻醉和复苏阶段的具体时期。麻醉24 h后记录试验鱼存活率，然后转入相同水温和pH的清水中复苏。
1.2.2MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化酶活性的影响。
1.2.2.1试验设计。
根据“1.2.1”试验结果，设置3个处理，分别为100mg/LMS-222、60mg/LMS-222和CK，每组10尾鱼。100mg/LMS-222麻醉5min，60mg/LMS-222麻醉24h后，当鱼体完全丧失肌肉张力，鳃盖张合频率变慢时，将其转入相同水温的清水中进行复苏，分别于复苏期0h（即深度麻醉期）、0.5和6.0h采集异育银鲫鳃组织，每处理每次采集3尾鱼，同时采集CK鲫鳃进行对比分析，研究麻醉剂对鳃的氧化损伤及其程度。
1.2.2.2抗氧化酶活性的测定。
用预冷的无菌生理盐水（0.85%NaCl）洗去鳃中杂物，滤纸吸去组织样品表面水分后，剪碎，称重，按组织样品重量的10%加入预冷的生理盐水，然后用组织匀浆器匀浆，4℃2000r/min离心15min，取上清。使用商品试剂盒（购自南京建成生物工程研究所）测定试验组和对照组鲫鳃中谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性。
1.2.3MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化相关基因表达的影响。
1.2.3.1样品采集及RNA提取。
试验设置同“1.2.2.1”，将保存于RNAisoPlus中的鳃组织样品于高通量组织破碎仪（QIAgentissuelyserⅡYM1405）中充分匀浆，静置5min后于4℃12000r/min离心5min，缓慢吸取上清液置入新的1.5mL灭菌EP管中，加入1/5RNAisoPlus体积量的氯仿，盖紧管口，振荡15s混匀，静置5min后于4℃12000r/min离心15min，小心吸取不多于80%的上层水转入新的1.5mLEP管中，加入等量的异丙醇充分混匀，室温静置10min后于4℃12000r/min离心10min，弃去异丙醇，用1mL75%乙醇（DEPC水配制）洗涤沉淀后于4℃12000r/min离心5min，弃上清，短暂离心后吸出残余乙醇，室温下晾干RNA沉淀。用适量DEPC水溶解RNA沉淀，-80℃保存待用。
1.2.3.2反转录合成cDNA。
使用NanoDrop2000（ThermoScientific，Wilmington，DE，USA）测定样品RNA质量与浓度，OD260/OD280值在1.8～2.0的样品为合格样品。RNA浓度调整至400ng/μL后，根据HiFiScriptgDNARemovalRTMasterMix试剂盒说明书，反转录总RNA合成cDNA。20μL反应体系如下：1.0μL10×gDNAEraserBuffer，0.5μLgDNAEraser，1.0μLTemplateRNA，用RNaseFreeWater补充至10μL，混匀离心后42℃孵育2min；加1μLHiFiScript、1μLPrimerMixI、4μL5×RTBuffer和4μLRNaseFreeWater，在PCR反应仪中合成cDNA，反应条件为42℃15min，85℃5min，合成的cDNA于-80℃保存待用。
1.2.3.3荧光定量PCR法测定基因mRNA相对表达。
根据TB GreenTM Premix Ex TaqTM II的使用说明书进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）。反应体系为25 μL，包含cDNA样品2.0 μL、上、下游引物（10 μmol/L）各1.0 μL、SYBR Premix Ex Taq TM 12.5 μL以及灭菌去离子水8.5 μL。qRT-PCR反应条件为95 ℃预变性30 s；40个循环（95 ℃变性5 s；56.9～64.3 ℃退火32 s，65 ℃延伸5 s）。
共测定8个基因，包括HSP70、NQO、keap1、MAPK3、nrf1、caspase3、TPJ和LYZ，qRT-PCR所用引物序列见表2。
1.3数据统计分析
所有试验结果均以“平均值±标准差”表示，采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析，通过LSD法进行多重比较。P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著，P＞0.05表示差异不显著。所得数据用GraphPadPrism8.0进行分析处理并作图。
2结果与分析
2.1不同浓度MS-222对异育银鲫麻醉的影响
由表3可知，MS-222质量浓度影响鱼体麻醉程度、麻醉时间和复苏时间，其随质量浓度的增加而缩短。当MS-222质量浓度为50mg/L时，异育银鲫只能进入麻醉第Ⅰ期，不适合进行生产实践操作和运输；MS-222浓度为60mg/L时，麻醉第Ⅱ期所处的时间最长，并能在2min内复苏；当MS-222浓度为90mg/L时，接近5min时鱼体进入麻醉第Ⅳ期；当MS-222浓度为100mg/L时，鱼体进入麻醉第Ⅳ期时间超过5min，麻醉24h后，该组鱼的复苏率仍为100%；当MS-222浓度为110mg/L时，鱼体虽快于浓度100mg/L组进入麻醉第Ⅳ期，但存活率仅为60%。基于生产实践中鱼体进入麻醉第Ⅱ期时最适宜进行运输，以及科研试验中需要快速进入麻醉期而不引起死亡的实际需要，拟选定60mg/L和100mg/LMS-222浓度组进行深入研究，以确定MS-222是否能引起鲫鳃氧化应激及其损伤程度。
2.2不同浓度MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化酶活性的影响
2.2.1高浓度MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化酶活性的影响。
从图1可见，高浓度MS-222（100mg/L）对异育银鲫鳃中CAT、SOD和POD活性影响不显著，当鱼体处于麻醉第Ⅵ期时，高浓度MS-222可显著提高异育银鲫鳃中GSH-Px活性和MDA含量（Plt;0.05），但复苏0.5hGSH-Px活性下降，显著高于CK（Plt;0.05）；复苏6.0h后GSH-Px活性与CK差异不显著（Pgt;0.05），均复苏到麻醉前水平。复苏0.5hMDA含量与CK差异不显著（Pgt;0.05），复苏到麻醉前水平。
2.2.2低浓度MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化酶活性的影响。
从图2可见，低浓度MS-222（60mg/L）对异育银鲫鳃中CAT、SOD、POD活性和MDA含量影响不显著（Pgt;0.05），但显著影响GSH-Px活性（P＜0.05）。低浓度MS-222麻醉异育银鲫后，鳃中GSH-Px活性显著升高，复苏0.5h后GSH-Px活性下降，但仍显著高于CK（P＜0.05），复苏6.0h时复苏至麻醉前水平。
高浓度组深度麻醉时异育银鲫鳃中GSH-Px活性和MDA含量升高水平高于低浓度组，其分别为CK的4.71倍和1.66倍，而低浓度组MDA含量无明显变化，GSH活性仅为CK2.69倍；高浓度组复苏0.5h时GSH-Px活性升高水平低于低浓度组，高浓度组和低浓度组分别为CK的2.59倍和3.14倍。
2.3不同MS-222浓度对异育银鲫鳃中抗氧化相关基因mRNA表达的影响
2.3.1高浓度MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化相关基因mRNA表达的影响。从图3可见，
高浓度MS-222麻醉异育银鲫5min后，鳃中NQO、TPJ和LYZ的mRNA相对表达量无显著差异，而且复苏0.5h和6.0h后，这些基因的相对表达量仍无显著差异，也就是说这些基因的相对表达量不受MS-222麻醉的影响。高浓度MS-222麻醉后（0h），基因HSP70、keap1、MAPK3、PIK3A1、nrf1和caspase3的mRNA相对表达量显著上调（P＜0.05），keap1、MAPK3、PIK3A1和caspase3的相对表达量分别上调了6.25、2.47、3.06和2.87倍；放入清水复苏后，这些基因的相对表达量逐渐下调，复苏6.0h时复苏到麻醉前水平。
2.3.2低浓度MS-222对异育银鲫鳃中抗氧化相关基因mRNA表达的影响。从图4可见，低浓度MS-222麻醉异育银鲫后，鳃中HSP70、caspase3、TPJ和LYZ基因的mRNA相对表达量无显著差异，而且复苏0.5h和6.0h后，这些基因的相对表达量仍无显著差异，也就是说这些基因的相对表达量不受MS-222麻醉的影响。从图4可见，低浓度MS-222麻醉后（0h），基因NQO、keap1、MAPK3、PIK3A1、nrf1的mRNA相对表达量显著上调（P＜0.05），表达量上调最高的是PIK3A其次为NQO，分别上调了10.5倍和3.19倍；放入清水复苏后，这些基因的相对表达量逐渐下调，复苏6.0h时复苏至麻醉前水平。
与低浓度组相比，高浓度组HSP70和caspase3表达量显著上调，而低浓度组无显著变化；相对低浓度麻醉组，除NQO、PIK3A1外，高浓度组相对表达量的上调倍数更高。
3结论
麻醉剂浓度对鱼类的麻醉效果产生直接影响，浓度过低易引起鱼类的应激反应，浓度过高则容易引起鱼体鳃盖张合停止，休克窒息，甚至死亡［17］。因此，确定不同条件下异育银鲫最适麻醉浓度对运输以及试验工作的有效开展具有重要意义。已有研究表明，体质量为（97.97±9.56） g的大黄鱼在水温为（16±1） ℃下，MS-222质量浓度为50～60 mg/L时，鱼体能进入麻醉Ⅱ期，麻醉24 h后大黄鱼幼鱼复苏率为100%［12］；适用于运输在水温8 ℃条件下，体质量为0.5 kg的大菱鲆（Scophthalmus maximus）的MS-222 浓度为40 mg/L［18］；该研究中在MS-222质量浓度为60 mg /L时，鱼体能够进入麻醉第Ⅱ期，麻醉24 h后异育银鲫复苏率为100%，这与章霞等［12］研究结果一致，却低于罗虎鱼（Rohu labeo rohita）幼鱼的最适麻醉浓度（125 mg/L）［19］，高于黄颡鱼的最适麻醉浓度（20 mg/L）［20］，这种差异与鱼种、个体大小有关。该研究中，体质量为（5.88±0.78）g的异育银鲫在水温为（25.0±0.5）℃下，使用质量浓度为100 mg/L MS-222麻醉3～5 min可进入麻醉第Ⅳ期，存活率为100%；对于体质量为（0.97±0.45） g的圆尾鱼（Cyclopterus lumpus），在水温12 ℃下，60 mg/L MS-222麻醉3～5 min后，鱼体可进入麻醉第Ⅱ期，存活率为100%［8］。因此，在饲养、繁育、捕捞、运输、销售以及试验过程中需辅以科学理论作为参考，进行多次尝试再用药。已有研究表明，麻醉Ⅳ期是试验操作的最佳时期［14，7］，麻醉Ⅱ期是运输的适宜时期［15，16］。因此，异育银鲫运输等生产实践活动时，笔者建议使用60 mg/L MS-222进行浅度麻醉较为适宜；短期科研试验操作时，建议选用浓度小于或接近于100 mg/L MS-222进行深度麻醉较为适宜，而且复苏后对机体影响较小。
MS-222是一种良好的麻醉剂，对异育银鲫鳃中抗氧化酶活性影响较小，主要影响GSH-Px活性，CAT、SOD和POD活性未发生显著变化。当鱼体处于压力环境下，会导致活性氧（ROS）水平的急剧增加，而活性氧水平的增加会导致蛋白质损伤、DNA突变和酶失活等一系列细胞结构与功能的损害，即氧化应激［21］，ROS是常见的机体损伤指标。复苏期0 h时，GSH-Px活性和MDA含量显著上升（P＜0.05），并在0.5 h呈下降趋势，故可推测复苏期0 h时异育银鲫的机体处于氧化应激状态；复苏期0.5 h GSH-Px活性和MDA含量下降，但仍高于CK。因此该试验结果表明，100 mg/L MS-222对异育银鲫抗氧化酶活力有增强作用，这是由于谷胱甘肽（GSH）帮助生物体维持正常的免疫系统功能，是体内清除H2O2和多种有机氢过氧化物的重要酶，具有抗氧化和解毒作用［22］。MS-222麻醉使鱼体产生了应激反应，复苏前期呼吸加快产生大量的自由基，引起GSH-Px活性上升。而MDA作为脂质过氧化的主要产物之一，其可对生物膜产生损伤，与蛋白结合引起蛋白质分子内和分子间的交联，使其具有细胞毒性［23］，MDA含量上升同样可以表明，高浓度MS-222麻醉会对异育银鲫鳃产生一定的氧化应激，但这种应激在复苏0.5 h后出现弱化的趋势，复苏6.0 h下降至对照水平。对比高浓度麻醉结果，60 mg/L MS-222对抗氧化指标的影响较小，此时鱼体生理机能基本为正常水平。由此可见，低浓度MS-222可引起轻微的氧化应激，100 mg/L MS-222对异育银鲫鳃的影响是可复苏的，此时鱼体生理机能尚能复苏至正常水平，这与MS-22作用金头鲷（Sparus aurata L.）的研究结果相似［24］。
MS-222深度麻醉时异育银鲫的一些基因表达上调，但随着复苏时间的延长，基因表达量与对照组差异不显著。HSP70具有抗氧化活性，可使机体内源性抗氧化剂的合成和释放增加［25］。HSPs及其结合物可以激活蛋白激酶，增强蛋白酶活性，促进ATF生成SOD，从而使细胞免受或减轻过氧化物造成的损害［25］。MS-222 100 mg/L试验中HSP70在复苏期0 h时的表达量显著上调（P＜0.05），随着复苏时间下降，变化趋势与抗氧化酶活性一致。Caspase3可通过与众多蛋白因子的相互作用调控细胞凋亡［26］，是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，也是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分［27］。PIK-akt作为细胞凋亡和癌变的重要信号通路，其失调会导致细胞癌变，主要机理是当PIK-akt与生长因子受体结合后，可改变Akt的蛋白结构并使其活化，并以磷酸化作用激活或抑制下游一系列底物如凋亡相关蛋白Caspase9活性，从而调节细胞的增殖、分化、凋亡以及迁移等表型［27］。PIK3CA基因编码的PI3K扩增或其他多种因素导致Akt的过度活化［28］。该研究得出，高浓度深度麻醉显著上调PIK3A1和caspase3的表达，说明鳃细胞凋亡上升，但随复苏时间推移逐渐下调，变化趋势与抗氧化酶活性一致。nrf1属于CNC调节蛋白家族，正常生理情况下，nrf1与其抑制剂Keap1结合，以非活性状态存在于胞浆中［29］。当细胞受到活性氧或其他亲核剂刺激后，nrf1与keap1解偶联，活化的Nrf1转运进入细胞核，与Maf蛋白结合成异质二聚体后与ARE结合，激活靶基因表达，调控Ⅱ相代谢酶、抗氧化酶或药物转运体的转录活性，从而发挥抗氧化损伤作用［30-31］。因此，NQO1能够阻止环境胁迫对DNA造成氧化损伤［30-31］。nrf2是正常内稳态和氧化应激条件下NQO1表达的中心控制因子。该研究中高浓度深度麻醉时keap1和nrf1的相对表达量均显著上调（Plt;0.05），说明此时氧化应激反应激烈，生成的活性氧对细胞产生刺激，与抗氧化酶活性结果一致。
与高浓度麻醉组相比，低浓度麻醉对异育银鲫抗氧化相对基因表达量的影响较小。低浓度麻醉复苏0h时，NQO、keap1、MPAK3、nrf1和PIK3A1相对表达量显著上调，随复苏时间延长逐渐下调，6.0h与CK差异不显著；与高浓度麻醉情况不同的是HSP70无明显变化，说明低浓度麻醉虽对异育银鲫氧化应激产生影响，但影响程度小于高浓度麻醉，与低浓度抗氧化酶活情况一致。该研究表明，适宜异育银鲫的MS-222最适麻醉浓度为60～100mg/L，运输等实践作业时建议使用低浓度麻醉如60mg/L，科研试验等短期快速麻醉时建议使用高浓度麻醉如100mg/L。
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