儿童支原体大叶性肺炎三种病原体检测方法的对比分析

摘要：目的" 研究肺炎支原体感染所致大叶性肺炎的早期实验室检查结果，探讨相关指标的疾病预测价值。方法" 回顾性分析南京医科大学第二附属医院2023年1月-8月收治的疑似肺炎支原体感染致大叶性肺炎患儿的实验室检测结果，分析三种支原体病原体和血清学检测方法对儿童支原体大叶性肺炎的早期诊断意义。结果" 核酸检测法的MP阳性检出率最高，化学发光法、间接免疫荧光法和核酸检测法的MP检测阳性率分别为37.78%、28.89%和82.22%；三种检测方法的一致性较差，两两比较的Kappa值分别为0.089、-0.444和-0.533。不同性别患儿化学发光法MP检测结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄、不同拷贝数三种检测方法MP阳性检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论" 同步进行核酸和抗体检测有助于及早、准确诊断儿童支原体肺炎，为该疾病的早期诊断和治疗提供依据。

关键词：肺炎支原体；大叶性肺炎；肺炎支原体DNA；肺炎支原体抗体

中图分类号：R725.6" " " " " " " " " " " " " " " " 文献标识码：A" " " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.18.015

文章编号：1006-1959（2024）18-0083-05

Abstract：Objective" To study the early laboratory examination results of lobar pneumonia caused by Mycoplasma pneumoniae infection， and to explore the predictive value of related indicators.Methods" The laboratory test results of children with lobar pneumonia caused by suspected mycoplasma pneumoniae infection admitted to the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from January to August 2023 were retrospectively analyzed. The significance of three mycoplasma pathogens and serological detection methods in the early diagnosis of mycoplasma lobar pneumonia in children was analyzed.Results" The positive detection rate of MP by nucleic acid detection method was the highest， the positive detection rates of MP by chemiluminescence method， indirect immunofluorescence method and nucleic acid detection method were 37.78%， 28.89% and 82.22%， respectively， the consistency of the three detection methods was poor， and the Kappa values of pairwise comparison were 0.089， -0.444 and-0.533， respectively. There was a statistically significant difference in the results of MP detection by chemiluminescence in children of different genders （Plt;0.05）.Conclusion" Simultaneous nucleic acid and antibody detection is helpful for early and accurate diagnosis of mycoplasma pneumonia in children， and provides a basis for early diagnosis and treatment of the disease.

Key words：Mycoplasma pneumonia;Lobar pneumonia;Mycoplasma pneumoniae DNA;Mycoplasma pneumoniae antibody

肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia， MPP）是儿童时期常见的肺部严重感染性疾病，病变可累及肺段甚至全叶，一般具有起病急、病情进展快、症状较严重、累及范围较广、病程较长等临床特点[1-4]，可出现肺不张及大量胸腔积液、肺脓肿，以及肺外多器官系统功能损害等并发症，甚至可导致呼吸衰竭，严重威胁儿童的健康[5-7]。如何早期发现重症和危重症病例、合理救治、避免死亡和后遗症的发生是MPP诊治的核心和关键问题。本研究比较了同一住院MPP患儿三种支原体病原学和血清学的首次检查结果，分析相关指标对儿童支原体大叶性肺炎的预测价值，以期为该疾病的早期诊断提供依据，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料" 选择2023年1月-8月在南京医科大学第二附属医院确诊为大叶性肺炎，且送检深部呼吸道分泌物MP-DNA的住院患儿45例为研究对象。纳入标准：所有患儿经过确诊，符合儿童支原体大叶性肺炎诊断标准；患儿有发热和（或）咳嗽等呼吸道感染症状，肺部X线或CT呈肺叶或节段性片状致密影或肺实质浸润性病变等症状。排除标准：细菌性肺炎、病毒性肺炎、衣原体肺炎、军团菌肺炎、肺结核、支气管哮喘、先天免疫系统缺陷等[8]；临床资料不全患儿。本研究经医院伦理委员会批准，患儿家属知情同意，并签署同意书。

1.2方法" 所有患儿入院当日采集静脉血进行化学发光法和间接免疫荧光检测（MP-IgM），入院24 h内采用咽拭子取痰法取深部呼吸道分泌物，进行肺炎支原体DNA检测，操作方法均按试剂说明书操作。化学发光法采用亚辉龙iFlash 3000-H化学发光免疫分析仪及配套试剂，试剂批号20230401，检测结果判定标准：COI≥1.1为阳性，＜0.9为阴性，0.9≤COI＜1.1为可疑。若检测显示可疑则重复检测，并取两次测量平均值判定。间接免疫荧光法使用德国欧蒙Sprinter XL全自动间接免疫荧光/酶联免疫一体机和试剂，批号F221207CC和批号F230616CG，检测结果使用OLYMPUS BX43荧光显微镜严格规范判读。核酸检测使用美国ABI7300 Real Time PCR System和试剂，批号202306296，PCR拷贝数≥1.0×103 copies/ml为阳性。收集研究对象的性别、年龄、入院后同时接受三种检测方法检测的首次检测结果等资料。

1.3统计学方法" 采用SPSS 20.0软件进行统计描述，计量资料采用（x±s）表示，计数资料采用[n（%）]来表示，使用？字2检验和Fisher's确切概率法检验来比较组间差异，P＜0.05表示差异有统计学意义。使用Kappa系数分析比较两种检测方法的一致性。

2结果

2.1大叶性肺炎患儿的检测结果" 45例大叶性肺炎患儿中，男19例，女26例，男女比0.73∶1；患儿年龄4个月～11岁，平均年龄（6.78±2.79）岁，0～3岁8例（17.78%），3～6岁9例（20.00%），7～11岁28例（62.22%）。其中有19例（42.22%），三种检测方法的检测结果完全相符。在所有8例（17.78%）核酸检测结果为阴性的标本中，化学发光法和间接免疫荧光法的检测结果均为阴性；26例（57.78%）三种检测方法的检测结果不相符的结果中，核酸检测结果均为阳性，化学发光法和间接免疫荧光法为阳性或为阴性，其中核酸检测结果阳性，化学发光法阴性和间接免疫荧光法阴性的标本18例（40.00%），核酸检测结果阳性，化学发光法阳性和间接免疫荧光法阴性的标本6例（13.33%），酸检测结果阳性，化学发光法阴性和间接免疫荧光法阳性的标本2例（4.44%）见表1。

2.2三种方法MP检测阳性率比较" 三种方法MP检测阳性率比较见表2。45例大叶性肺炎患儿中，化学发光法的MP检测阳性例数为17例（37.78%），间接免疫荧光法为13例（28.89%），核酸检测法为37例（82.22%）。三种检测方法的两两比较中，化学发光法与间接免疫荧光法比较，差异无统计学意义，一致性较差（？字2=0.800，P=0.371，Kappa=0.089）；化学发光法与核酸检测法比较，差异有统计学意义，不一致性中等（？字2=18.519，P=0.000，Kappa=-0.444）；间接免疫荧光法与核酸检测法比较，差异有统计学意义，不一致性中等（？字2=25.920，P=0.000，Kappa=-0.533），见表2。

2.3不同性别三种方法检测MP阳性率比较" 不同性别化学发光法MP检测结果比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；间接免疫荧光法和核酸检测法不同性别MP检测结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

2.4不同年龄三种方法检测MP阳性率比较" 三种方法在年龄＜3岁、3～6岁、＞6岁组MP检测阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同年龄核酸检测法MP检测结果比较，差异有统计学意义（？字2=15.423，P=0.000），化学发光法和间接免疫荧光法MP检测组内和组间阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。

2.5不同拷贝数三种方法检测阳性率比较" 45例样本中＜103拷贝数样本8例（17.78%），103～106拷贝数样本21例（46.67%），＞106拷贝数样本16例（35.55%）。不同拷贝数三种检测方法MP检测阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同拷贝数化学发光法和核酸检测法MP检测比较，差异有统计学意义（P=0.041、0.000），不同拷贝数间接免疫荧光法检测MP检测结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。三种方法的组间两两比较，化学发光法＜103组与103～106组、核酸检测法＜103组与103～106组，以及＜103组、＞106拷贝数的MP检测结果比较，差异有统计学意义（P=0.000），见表5。

3讨论

肺炎支原体可引起儿童上或下呼吸道感染，是社区获得性肺炎的重要病原。10%～40%的儿童社区获得性肺炎（CAP）由肺炎支原体所引起，早期如何准确诊断并合理选择抗菌药物一直是临床中诊治儿童MPP亟需解决的难题。

支原体培养是鉴定MP感染的金标准[9]，但因为生长营养要求高，生长时间缓慢，阳性率低，所以在临床上不具备早期诊断价值。MP感染的潜伏期为2～3周，人体一般在感染MP后4～5 d才出现IgM类抗体，3～4周达高峰，以后逐渐降低，因此IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标[10-12]。而lgG较IgM出现晚，无早期诊断价值，如显著升高提示近期感染，显著降低说明处于感染后期。婴幼儿由于免疫功能不完善、产生抗体的能力较低，可能出现假阴性或低滴度的抗体，即使IgM抗体检测阴性，也不能否定MP感染，需进行MP核酸检测或检测lgG抗体，可结合患儿的病程及年龄综合考虑；当恢复期和急性期MP抗体滴度呈4倍或4倍以上增高或减低时，可确诊支原体感染[8]。

血清学和核酸检测是目前诊断MP感染的常规实验室手段[13-15]。化学发光法具有高灵敏度、高特异性、自动化快速检测和性价比高等特点，较间接免疫荧光法的灵敏度更高，费用低，且操作简便、耗时短等多种优势[16-18]。核酸扩增诊断技术（RNA、DNA、高通量测序）灵敏度高、特异性强、快速，不受年龄、产生抗体的能力、病程早晚及用药等因素的影响[19，20]，在MP感染早期的检出率最高，可用于早期诊断；而血清学检测具备简便快速、重复性好的特点，因此核酸检测与IgM同时测定，并将二者的结果联合解读，可提高儿童支原体肺炎的早期诊断率，达到指导用药和提高疗效的目的。本研究使用的三种检测方法中，核酸检测法的MP检测阳性率最高，化学发光法次之，间接免疫荧光法最低，且核酸检测法的MP检测阳性率是后2种方法的2倍以上，能够检出化学发光法和间接免疫荧光法检测为阴性的假阴性标本，故核酸检测法是MP早期实验室诊断首选的检测方法。尽管MP的病原体核酸检测对于MPP的早期诊断和早期治疗干预非常重要，但MP的抗体检测也是MPP早期诊治非常必要的补充手段。通过对三种方法对MP检测的一致性分析显示，尽管三种检测方法的一致性较差，从检出率及不同性别组、不同年龄组和不同拷贝数组MP检测结果的统计学分析结果看，化学发光法比间接免疫荧光法对患儿IgM类抗体的检测更具优势。因此，化学发光法是本院特异性MP-IgM血清学检测的推荐方法，对儿童支原体大叶性肺炎的早期诊治具有重要作用。

综上所述，以上三种方法对儿童支原体大叶性肺炎实验室早期诊断的一致性较差，其中核酸检测法的阳性检出率最高，间接免疫荧光法最低，化学发光法检测MP-IgM优于间接免疫荧光法。联合以上三种方法对于儿童支原体大叶性肺炎的早期诊断不是必须的，核酸检测法最具诊治价值，同步进行MP核酸和抗体检测有助于及早、准确诊断儿童支原体肺炎。如果没有条件开展核酸检测，利用化学发光法检测特异性MP-IgM，对于降低儿童支原体大叶性肺炎的漏检率，提高该疾病的诊断率具有一定的临床应用价值，是临床优先考虑使用的MP检测方法。

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收稿日期：2023-09-20；修回日期：2023-10-10

编辑/肖婷婷

作者简介：王琳（1974.4-），女，江苏滨海县人，本科，副主任技师，主要从事医学检验工作

通讯作者：王笔金（1969.9-），男，江苏南京人，本科，主任技师，主要从事医学检验工作