杭州某医院高脂血症患者ApoE基因分析

[摘要] 目的 探究高脂血症患者载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因的多态性及其分布情况。方法选取2023年10月至2024年6月于杭州市第九人民医院确诊的370例高脂血症患者，采用荧光聚合酶链式反应对患者的血液预处理样本进行基因多态性检测，比较不同性别、不同年龄段高脂血症患者基因多态性的分布。结果 ①本研究中2个基因位点（ApoE 388T>C、ApoE 526C>T）的多态性分布符合哈迪-温伯格遗传平衡定律，表明具有群体代表性；②本研究中370例高脂血症患者的ApoE基因分布情况为E3/E3 66.49%、E3/E4 20.27%、E2/E3 8.65%、E2/E4 1.89%、E2/E2 1.35%和E4/E4 1.35%，携带E4基因的患者比例约是携带E2基因的1.88倍；③ApoE基因多态性的分布差异与患者的性别和年龄无关（>0.05）。结论杭州市某医院高脂血症患者ApoE的基因多态性分布不均匀且分布与性别及年龄无关，建议在使用他汀类药物治疗前重视对患者ApoE基因的检测以评估治疗效果。

[关键词] ApoE；基因多态性；他汀类药物；高脂血症

[中图分类号] R394 [文献标识码] A [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.27.007

Analysis of ApoE gene in patients withhyperlipidemia in a hospital in Hangzhou

Department of Clinical Laboratory， Hangzhou Ninth People’s Hospital， Hangzhou 311225， Zhejiang， China

[Abstract] Objective To explore the polymorphism and distribution of apolipoprotein E （ApoE） gene in patients with hyperlipidemia. MethodsA total of 370 hyperlipidemia patients diagnosed at Hangzhou Ninth People’s Hospital from October 2023 to June 2024 were selected. Gene polymorphism was detected in the blood samples of the patients using fluorescence polymerase chain reaction， and the distribution of gene polymorphism among different genders and age groups within this population was compared. Results①The polymorphism distribution of the two genetic loci （ApoE 388T>C and ApoE 526C>T） in the studied sample population conforms to Hardy-Weinberg equilibrium， indicating that it is representative of the population; ②Among the 370 patients， the distribution of the ApoE gene was as follows： E3/E3 （66.49%）， E3/E4 （20.27%）， E2/E3 （8.65%）， E2/E4 （1.89%）， E2/E2 （1.35%）， and E4/E4 （1.35%）. The proportion of the patient population carrying the E4 allele was about 1.88 times higher than that of those carrying the E2 allele; ③The distribution differences of ApoE gene polymorphism were not related to the patients' gender and age （>0.05）. ConclusionThe distribution of ApoE gene polymorphism among hyperlipidemia patients at a hospital in Hangzhou is uneven and is not related to gender or age groups. Therefore， it is recommended to prioritize the detection of ApoE gene in patients before using statin medications to assess treatment effectiveness.

[Key words]Apolipoprotein E; Gene polymorphism; Statins; Hyperlipidaemia

随着生活水平的提升，中国人群血脂异常的患病率呈上升态势，成年人中血脂异常总患病率为35.6%，其中高脂血症已成为诸多心脑血管病的主要危险因素^[1-2]。他汀类药物是目前主要的降脂药物和心血管疾病预防药物，尽管大多数患者服用他汀类药物相对安全且耐受性好，但仍有部分患者出现不同程度的肝功能异常及他汀类药物相关肌病等不良反应，如肌肉酸痛、认知障碍、胃肠道反应及血糖升高等^[3-4]。由于他汀类药物的不良反应与疗效存在个体差异，因此服用他汀类药物的患者依从性不足50%，进而导致心血管事件及死亡率升高^[5]。

他汀类药物不良反应的个体差异与遗传因素有关，尤其与载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）存在密切关系。ApoE基因的2个位点（388T>C、526C>T）可形成3种异构体，分别为ApoE2（388T-526T）、ApoE3（388T-526C）、ApoE4（388C- 526C）；在人群中存在6种基因型：ApoEE2/E2、ApoEE3/E3、ApoEE4/E4、ApoEE2/E3、ApoEE2/E4、ApoEE3/E4。不同基因型编码的各异构体与脂蛋白受体的亲和力及其在体内的代谢水平不同，最终造成个体间他汀类药物的疗效及不良反应的差异，其中ApoE4携带者与ApoE2携带者相比疗效减弱^[6]。此外，ApoE基因多态性还与疾病的发生风险相关，ApoE4携带者罹患心血管疾病、神经系统疾病和传染病的风险较高^[7-8]。

鉴于ApoE基因多态性在指导他汀类药物合理使用及评估疾病风险中的重要作用，本研究基于荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）可直扩的SNP基因分型技术，对杭州市第九人民医院确诊的370例高脂血症患者进行检测与分析，明确该医院高脂血症患者ApoE基因多态性的分布及其特征，以期为高脂血症的治疗提供参考，进而优化他汀类药物的临床应用策略，提高疗效，减少药物不良反应的发生。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2023年10月至2024年6月于杭州市第九人民医院确诊的370例高脂血症患者。其中女166例，男204例，年龄13～93岁，平均（54.13±13.69）岁。纳入标准：①高脂血症患者；②白细胞计数1×10⁹～20×10⁹/L。排除标准：①肝、肾功能异常的患者；②严重感染或患有恶性肿瘤、甲状腺或其他血液系统病变的患者；③不愿意参加或无法配合本研究的患者。患者均知情同意并签署知情同意书。本研究经杭州市第九人民医院医学伦理委员会审批通过（伦理审批号：研伦第2023-082）。

1.2 实验方法

1.2.1 样本采集与保存 采集患者2ml静脉血[无具体时间与空腹要求；乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝]，置于2～8℃环境中保存（保存时间不超过2周）。

1.2.2 血液预处理物ApoE分型检测及方法 吸取80μlEDTA抗凝血于1.5ml离心管中，按杭州百迈生物股份有限公司生产的人ApoE基因分型检测试剂盒（荧光PCR法）说明书进行处理。加入1ml纯化水后进行涡旋振荡混匀，随后12000离心1min。每次处理全血时需取80μl阴性对照品（室温融化混匀，快速离心10s）平行参与处理。吸弃上清液（阴性对照品弃上半部液体1ml），加入50μl三羟甲基氨基甲烷（trihydroxymethyl aminomethane，Tris）-EDTA缓冲液，剧烈震荡涡旋充分重悬沉淀，获得血液预处理物。使用美国应用生物系统公司7500实时定量PCR仪，按说明书步骤检测血液预处理物。

1.2.3 结果判定标准 结果分析时，增加背景信号矫正，将参比荧光染料（软件操作界面显示为passive reference）设置为羧基-X-罗丹明（5-carboxy-x-rhodamine，ROX）。荧光PCR反应检测成功应同时满足以下2个条件：①阴性对照。当无扩增信号时，ApoE（T388C），ApoE（C526T）Ct值显示为无法确定（软件操作界面显示为undetermined）；当有扩增信号时，ApoE（T388C）Ct值>33，ApoE（C526T）Ct值>31。②阳性对照品。ApoE（T388C）Ct（FAM）≤31且Ct（VIC）≤31；ApoE（C526T）Ct（FAM）≤29且Ct（VIC）≤29。荧光PCR反应成功后对样本结果进行判定。并统计患者ApoE基因分型结果与等位基因频率的分布。

1.3 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理分析。计数资料以例数（百分率）[（%）]表示，比较采用²检验；采用检验分析各多态性位点是否符合哈迪-温伯格遗传平衡；以>0.05为样本具有群体代表性的标准。＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 哈迪-温伯格遗传平衡检验

本研究中2个基因位点（ApoE 388T>C、ApoE 526C>T）的多态性分布符合哈迪-温伯格遗传平衡定律（²分别为0.288、4.514，>0.05），表明本研究纳入者具有群体代表性，见表1。

2.2 高脂血症患者ApoE基因多态性分布

6种不同基因型所占比例分别为E3/E366.49%、E3/E420.27%、E2/E38.65%、E2/E41.89%、E2/E21.35%、E4/E41.35%。本组患者中E3基因的比例最高，为80.95%，携带E4基因患者比例（12.43%）约是携带E2基因患者比例（6.62%）的1.88倍。

2.3不同性别患者的ApoE基因多态性分布比较

将患者按性别分组，结果显示ApoE基因多态性在不同性别患者中的差异无统计学意义（>0.05），见表2。

2.4 不同年龄患者的ApoE基因多态性分布比较

将患者按年龄分为五组，结果显示各年龄组高脂血症患者数呈倒“U”型变化趋势，不同年龄组患者的各基因型分布差异无统计学意义（=1.601，>0.05），见表3。

3 讨论

中国脑卒中筛查与预防项目数据显示，40岁以上居民血脂异常患病率高达43%，但仅18.9%的血脂异常患者接受降脂治疗，7.2%得到充分控制^[9-10]。他汀类药物作为目前临床应用最为广泛的降脂药，是血脂异常药物治疗的基石，但其临床疗效具有明显的个体差异^[11]。

研究显示使用同等剂量他汀类药物，中国心血管病患者肝脏不良反应发生率明显高于欧洲患者，肝脏转氨酶升高（>正常值上限3倍）率及肌病发生率约为欧洲患者的10倍^[12]。这种差异主要由个体存在他汀类药物代谢酶、转运蛋白及药物靶受体等基因的多态性差异所致，因而中国人群应用他汀类药物的依从性较低。ApoE基因是其中一个重要基因。ApoE基因位于人类第19条染色体上，编码一种胆固醇运载蛋白，对脂质代谢和细胞信号转导等生理过程具有重要影响。携带ApoE2基因的患者服用他汀类药物后降脂效果最佳；携带ApoE3基因的患者则显示正常降脂效果；携带ApoE4基因的患者降脂效果最不明显，药物敏感度最差^[13-14]。

本研究结果显示本组患者中最常见的基因型为E3/E3，占比高达66.49%，和张强^[15]、张延红等^[16]研究报道E3/E3基因型在实验人群中比例最高的结果一致，表明大多数患者在使用常规剂量他汀类药物治疗时即可产生较好的效果，可有效、安全降低血脂。值得关注的是E3/E4、E4/E4基因型的患者比例高达21.62%，该类患者携带风险基因，对他汀类药物治疗的效果不敏感。本研究还分析ApoE基因多态性在不同性别和年龄患者中的分布情况，结果显示不同性别和年龄的患者ApoE基因多态性分布比较，差异无统计学意义，这与以往的文献报道结论一致，表明ApoE基因的多态性与性别和年龄无关^[17-19]。

综上所述，本研究在一定程度上可反映杭州市第九人民医院高脂血症患者ApoE基因多态性的分布特征，可为该院及其他医院的临床用药提供参考。通过对患者进行ApoE基因分型检测可预先判断他汀类药物的疗效，辅助临床制定他汀类药物个体化用药方案，降低药物不良反应风险。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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（收稿日期：2024–07–02）

（修回日期：2024–09–12）