MTHFR C677T基因多态性、血清Hcy与下肢动脉硬化闭塞症介入术后再狭窄的关系

[摘要] 目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）C677T基因多态性、血清同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平与下肢动脉硬化闭塞症（arteriosclerosis obliterans，ASO）患者介入术后再狭窄的关系。方法选取2021年1月至2022年7月于温州市中心医院就诊的92例下肢ASO患者作为研究对象，根据术后再狭窄情况分为未再狭窄组和再狭窄组。收集患者的一般资料和手术资料，并检验术前中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、纤维蛋白原、D-二聚体、C反应蛋白、低密度脂蛋白、Hcy、MTHFR C677T基因多态性等，采用²检验及Logistic回归分析比较下肢ASO介入术后再狭窄与MTHFR C677T基因多态性、血清Hcy的关系。构建风险评分系统预测介入术后再狭窄，并评估其有效性。结果两组患者的病变位置、支架置入、支架长度、血清Hcy、MTHFR C677T基因多态性比较，差异有统计学意义（<0.05）。多因素Logistic回归分析显示MTHFR C677T TT型、血清Hcy≥17.15μmol/L、病变位于股动脉、无支架置入是下肢ASO患者介入术后再狭窄的独立危险因素（<0.05）。根据独立危险因素构建的风险评分系统受试者操作特征曲线下面积（area under the curve，AUC）为0.818（95%：0.731～0.905），明显高于其他独立危险因素，具有较高的效能。结论MTHFR C677T基因多态性、血清Hcy与下肢ASO患者介入术后再狭窄密切相关。基于MTHFR C677T基因多态性、血清Hcy、病变位置及支架置入构建的风险评分系统有助于预测下肢ASO患者再狭窄的发生。

[关键词]基因多态性；同型半胱氨酸；下肢动脉硬化闭塞症；再狭窄

[中图分类号] R654.4 [文献标识码] A [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.27.002

Relationship between MTHFR C677T gene polymorphism and serumHcywith restenosis after intervention in lower limbarteriosclerosis obliterans

Dingli Clinical College of Wenzhou Medical University， Department of Vascular Surgery，WenzhouCentral Hospital， Wenzhou Pan VascularDisease Management CenterLaboratory，Wenzhou 325000， Zhejiang， China

[Abstract]ObjectiveTo explore the relationship betweenmethylene tetrahydrofolate reductase（MTHFR） C677T gene polymorphism and serum homocysteine（Hcy） levels with postoperative restenosis in patients with lower limb arteriosclerosis obliterans （ASO） after intervention.MethodsA total of 92 patients with lower limb ASO treated in Wenzhou Central Hospital from January 2021 to July 2022 were divided into non-restenosis group and restenosis groupaccording to whether patients with postoperativerestenosis. General and surgical data from all patientswere collected， and preoperative neutrophils， lymphocytes， platelets， fibrinogen， D-dimer， C-reactive protein， low-density lipoprotein， homocysteine， MTHFR C677T gene polymorphism， etcwere tested.²test and Logistic regression analysis wereused to compare the relationship between lower limb ASO postoperative restenosisafter interventionand MTHFR C677T gene polymorphism and serum Hcy.Arisk scoring system was built to predict postoperative restenosis after interventionand evaluate its effectiveness.ResultsThere were significant differences （<0.05） between the two groups in terms of lesion location， stent placement， stent length， serum Hcy， and MTHFR C677T gene polymorphism.Multivariate Logistic regression analysis showed that MTHFR C677T TT type， serum Hcy ≥17.15μmol/L， lesion location in the femoral artery， and no stent placement were independent risk factors for postoperative restenosis in lower limb ASO patients （<0.05）. The area under the curve（AUC） of receiver operatingcharacteristiccurve of the risk scoring system constructed based on independent risk factors was0.818 （95%：0.731-0.905）， which was significantly higher than those other independent risk factors and hadhigh efficacy.ConclusionThe MTHFR C677T gene polymorphism and serum Hcy are closely related to postoperative restenosis in lower limb ASO patients.A risk scoring system based on MTHFRC677T gene polymorphism， serum Hcy， lesion location， and stent placement can help predict the occurrence of restenosis in lower limb ASO patients.

[Key words]Gene polymorphism; Homocysteine;Lower limb arteriosclerosis obliterans; Restenosis

下肢动脉硬化闭塞症（arteriosclerosis obliterans，ASO）是由于下肢动脉硬化引起的退行性病变，出现肢端麻木、间歇性跛行、静息痛，最终发生溃疡坏死的慢性进展性疾病^[1]。因中国人口老龄化的加快，ASO发病率持续上升，且具有较高的截肢率、致死率^[2]。随着血管腔内技术的发展，血管腔内介入手术因其较好的治疗效果和较高的成功率，目前已成为血管外科医生首选的治疗方式^[3]。然而介入术后再狭窄发生率依然较高，其机制目前尚无明确定论。本研究拟探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）C677T基因多态性、血清同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）与下肢ASO患者介入术后再狭窄的关系，以期为介入术后再狭窄的早期预防及诊治提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2021年1月至2022年7月于温州市中心医院就诊的92例下肢ASO患者作为研究对象，根据术后再狭窄情况分为未再狭窄组（=57）和再狭窄组（=35）。纳入标准：①有明显下肢ASO的症状及体征；②踝肱指数（ankle-brachial index，ABI）<0.9；③下肢CT血管成像（computerized tomography angiography，CTA）或下肢动脉造影检查确诊为下肢ASO；④接受介入开通手术治疗；⑤术后可遵医嘱按时服用抗凝或抗血小板药；⑥可协同完成相关随访。排除标准：①下肢动脉急性血栓形成及急性栓塞者；②其他合并症导致无法耐受手术者。患者均签署知情同意书。本研究经温州市中心医院医学伦理委员会审批通过（伦理审批号：温中心医伦审2022研083号）。

1.2 临床资料收集

收集患者的性别、年龄、体质量指数（body mass index，BMI）、冠心病史、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、病变位置、病变性质、闭塞长度、支架置入、药物球囊使用及术前中性粒细胞、淋巴细胞、血小板、纤维蛋白原、D-二聚体、C反应蛋白、白蛋白、中性粒细胞/淋巴细胞、血小板/淋巴细胞、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白、Hcy等资料。复诊行CTA或超声检查了解下肢ASO患者介入术后1年内再狭窄情况。本研究以治疗段血管腔狭窄率≥50%视为再狭窄。

1.3 MTHFR C677T基因多态性检测

两组患者的外周静脉血白细胞脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）使用DNA提取试剂盒（购自长沙三济生物科技有限公司）提取，采用由反应底物、待测单链、测序引物和4种酶构成的焦磷酸测序技术检测基因型。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）条件：50μl反应体积中含10×Buffer 5μl、3μl dNTPs（each2.5mM），2μl DNA模板，0.5μl Taq DNA聚合酶（5U/μl），1μl正向引物和1μl反向引物（10μM）及部分无菌水，混匀后上机检测。取PCR产物至焦磷酸测序仪（Pyro Mark Q24板）（购自德国QIAGEN公司）中测序，根据测序结果呈现的A/G位点频率明确基因型。碱基G的基因频率85%～100%、碱基A的基因频率0%～15%为CC型；碱基G、A的基因频率35%～65%为CT型；碱基G的基因频率0%～15%、碱基A的基因频率85%～100%为TT型。引物序列见表1。

1.4 &nbsp;统计学方法

采用SPSS22.0统计学软件对数据进行处理分析。计数资料以例数（百分率）[（%）]表示，比较采用²检验；符合正态分布的计量资料以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，组间比较采用独立样本检验，不符合正态分布的计量资料以中位数（四分位数间距）[（₁，₃）]表示，组间比较采用Mann-Whitney检验。采用Logistic多因素回归分析探讨影响下肢ASO患者介入术后再狭窄的独立危险因素。绘制受试者操作特征曲线（receiver operatingcharacteristiccurve，ROC曲线），采用曲线下面积（area under the curve，AUC）评价风险评分系统诊断下肢ASO患者介入术后再狭窄的效能。<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者的一般资料

纳入的92例患者中男65例，女27例，平均年龄72（66，79）岁；其中31例狭窄，61例闭塞，79.3%的患者病变位于股动脉，闭塞中位长度8.5cm。48例患者术中使用药物球囊，51例患者置入支架，平均置入支架1个，支架中位长度4.0cm，发生再狭窄35例，见表2。

2.2 下肢ASO术后再狭窄患者术前相关检验指标比较

两组患者术前的中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、血小板计数、白蛋白、纤维蛋白原、D-二聚体、中性粒细胞/淋巴细胞、血小板/淋巴细胞、低密度脂蛋白、糖化血红蛋白、C反应蛋白比较，差异无统计学意义（>0.05），见表3。再狭窄组患者血清Hcy及MTHFRC677TTT型所占比例较高，差异有统计学意义（<0.05），见图1。

2.3 临床及相关特征单因素及多因素分析

两组患者的病变位置、支架置入、支架长度、血清Hcy、MTHFR C677T基因型比较，差异有统计学意义（<0.05），见表4。将单因素分析有统计学意义的因素作为自变量，再狭窄情况作为因变量，行多因素Logistic回归分析。结果显示下肢ASO患者介入术后再狭窄风险与病变股动脉位置、无支架置入、血清Hcy≥17.15μmol/L和MTHFR C677T TT型显著相关，见表5。

2.4 下肢ASO患者术后再狭窄风险评分系统的构建

选择表5中的独立风险因素，对每个独立风险因素值进行对数转换并×100，进行计算分配。每个变量的计算值相加构建风险评分系统。进一步使用ROC曲线分析各风险因素对下肢ASO患者介入术后再狭窄的预测价值。相比其他独立风险因素，风险评分系统具有更高的AUC，显示其具有更可靠的诊断效能，见表6。

3 讨论

下肢ASO是目前导致中老年患者截肢的重要原因之一，可造成严重的下肢缺血，若不能得到及时有效的治疗，截肢率可高达50%^[4]。目前腔内介入治疗已成为其首选治疗方式，但介入术后再狭窄发生率仍较高，据统计1年再狭窄率为15%～40%，5年再狭窄率可高达30%～50%^[5]。介入术后再狭窄的发生机制较复杂，可能与血管内皮损伤、血栓形成、平滑肌细胞过度增殖、新生动脉粥样硬化、炎症反应等因素相关^[6]。本研究中35例（38.0%）下肢ASO患者介入术后出现再狭窄，与既往研究结果一致^[7]。

研究显示下肢ASO患者血清Hcy水平升高，且与疾病严重程度呈正相关^[8]。Hcy是由肝脏、肌肉等在半胱氨酸和蛋氨酸代谢过程中形成的重要产物。正常情况下体内血清Hcy水平相对较低，当其水平明显升高时可诱发氧化反应损伤血管内皮功能，致使血管内膜增厚、血管平滑肌增生等，最终导致血管狭窄或闭塞^[9-10]。本研究证实再狭窄组患者的血清Hcy水平显著高于未再狭窄组。多因素Logistic回归分析提示血清Hcy水平≥17.15μmo/L是影响下肢ASO介入术后患者再狭窄的独立危险因素。

MTHFR基因主要编码翻译N₅，N₁₀-亚甲基四氢叶酸还原酶，处于常染色体1p36.3，是Hcy重要代谢酶^[11]。MTHFR基因存在多态性，现已证实多态位点近20种，C677T位点在临床上被认为最具有研究价值^[12]。研究表明MTHFRC677T基因多态性与全身多种血管性疾病密切相关^[13]。C677T基因的错位突变包括杂合突变（CT基因型）和纯合突变（TT基因型），是由第4外显子的第677位点核苷酸C基因突变为T基因。该突变使MTHFR酶活性中心位点发生改变，编码产物由原始的丙氨酸变成缬氨酸，是MTHFR酶活性降低最重要的突变类型^[14]。研究显示CT基因型人群MTHFR酶活性约为正常的65%，TT基因型人群MTHFR酶活性仅为正常的30%^[15]。MTHFR酶的生物催化活性降低后，对血清Hcy的代谢作用随之减弱，导致血清Hcy水平升高，TT基因型人群具有更高的血清Hcy水平^[16-17]。本研究对两组患者行MTHFRC677T基因多态性分析，结果显示TT型在两组的分布存在显著差异，非TT型在两组的分布无明显差异。多因素Logistic回归分析证实TT型是介入术后再狭窄的独立危险因素。

同时，本研究发现病变位于股动脉、无支架置入是下肢ASO介入术后再狭窄的独立危险因素。髂动脉介入术后长期通畅率较高，这与相关研究结果一致^[18]。但支架置入是介入术后再狭窄的保护因素，这与既往研究有所不同^[19]；考虑与本研究入组患者的平均病变长度较长、闭塞范围较广相关。本研究对各独立危险因素进行ROC曲线分析发现其对介入术后再狭窄的独立预测效能较低，而构建的风险评分系统具有更高的AUC值，显示其具有更可靠的诊断效能，可作为下肢ASO患者介入术后再狭窄的预测指标。

综上所述，下肢ASO患者介入术后再狭窄与MTHFRC677T基因多态性、血清Hcy水平、病变位置及支架植入明显相关。基于独立危险因素构建的风险评分系统可用于预测下肢ASO患者介入术后再狭窄。由于本研究样本量较小，随访时间尚短，仍需多中心、大样本量的长期随访进一步验证。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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（收稿日期：2024–05–19）

（修回日期：2024–09–06）