自制中草药油对大鼠深度烧伤创面的疗效评价

[摘要]目的：经过建立Wister大鼠深度烧伤模型，探讨自制中草药油机制及促进深度烧伤创面愈合的临床疗效。方法：选取清洁健康雄性Wister大鼠60只为研究对象，将建模成功的大鼠依据治疗方式分为对照组30只和观察组30只。对照组使用生理盐水予以清创后，将凡士林纱布遮盖包裹创面，并用敷贴稳固；观察组采用自制中草药油涂抹，涂抹均匀后予以纱布进行固定，每日进行换药1次。对比两组治疗后第3、7、14、21天创面愈合情况与创面愈合率、HE染色法观察大鼠烧伤创面皮肤成纤维细胞数及毛细血管数，免疫组化染色法检测大鼠烧伤创面皮肤组织表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）水平。结果：治疗后第3、7、14、21天，两组创面愈合率均升高，且观察组明显高于对照组（P＜0.05）；观察组创面愈合面积和渗出液均小于对照组；两组创面成纤维细胞数和毛细血管数均上升，且观察组明显高于对照组（P＜0.05）；两组EGF、VEGF水平均上升，且观察组比对照组高（P＜0.05）。结论：利用自制中草药油治疗大鼠深度烧伤创面，可有效增加创面成纤维细胞数和毛细血管数，提高创面EGF、VEGF水平，促进了创面愈合情况，为临床深度烧伤创面用药提供有力理论价值。

[关键词]自制中草药油；大鼠；深度烧伤；创面愈合；疗效评价

[中图分类号]R285.5 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2024）09-0045-04

Evaluation of Curative Effect of Self-made Chinese Herbal Oil on Deep Burn Wound in Rats

DU Xian1， CAI Xia1， REN Jizhen1， SU Lu'an2， CHEN Zhenyu1

（ 1.Department of Plastic Surgery， Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266000， Shandong， China; 2.Department of Burn Surgery， Qingdao Junliang Burn Hospital， Qingdao 266000， Shandong， China ）

Abstract： Objective To explore the mechanism of self-made Chinese herbal oil and the clinical efficacy of promoting deep burn wound healing by establishing a Wister rat model of deep burn. Methods Sixty clean and healthy male Wister rats were selected for the study， and the modeled rats were divided into 30 control rats and 30 observation rats according to the treatment. After debridement with normal saline， the wound of control group was covered with vaseline gauze and fixed， the observation group was smeared with self-made Chinese herbal oil and fixed with Vaseline gauze after evenly smearing， the dressing was changed once every other day. The wound healing conditions and wound healing rates of the two groups at the 3rd， 7th， 14th and 21st days after treatment were compared， the number of fibroblasts and capillaries on the burn wound of rats was observed by HE staining method， the epidermal growth factor （EGF） and vascular endothelial growth factor （VEGF） levels on the burn wound of rats was detected by immunohistochemical staining method. Results On the 3rd， 7th， 14th and 21st day after treatment， the wound healing rate of the two groups was increased， and the observation group was significantly higher than the control group （P＜0.05）， the wound healing area and exudate in the observation group were smaller than those in the control group. The number of fibroblasts and capillaries increased in the two groups， and the observation group was significantly higher than the control group （P＜0.05）， the levels of EGF and VEGF were increased in the two groups， and the observation group was higher than the control group （P＜0.05）. Conclusion The use of self-made Chinese herbal oil in the treatment of deep burn wounds in rats can effectively increase the number of fibroblasts and capillaries， improve the levels of EGF and VEGF， and promote the healing of wounds.

Key words： self-made Chinese herbal oil; rat; deep burn; wound healing; efficacy evaluation

烧伤为临床外科常见的一种疾病，其程度一般分为浅度烧伤和深度烧伤，其中深度烧伤较浅度烧伤相比，烧伤创面愈合速度和感染程度更长、更严重[1-2]。烧伤创面是指伴有组织坏死的缺损性损伤，临床处理烧伤创面主要以清洁创面、减少感染、及早封闭创面，极大限度恢复外形和功能为治疗原则[3]。因为烧伤后创面暴露、细菌感染等因素，造成烧伤创面愈合缓慢，严重者会引起创面脓毒血症而威胁患者生命安全。所以，深度烧伤创面愈合一直以来是临床关注且重视的问题。因此，为深度烧伤创面愈合寻找更有效的治疗方法非常重要。当前，临床中，对烧烫伤创面愈合尚未有特效药物予以治疗，西医中较常利用银盐、抗菌药等进行镇痛、杀菌、消炎等，但由于近些年来抗生素用药的泛滥、细菌耐受性的增强等情况发生，此类药物的治疗效果已大大降低，同时还有着一定程度副作用[4-5]。中成药和其制剂在烧烫伤创面愈合中有着深厚文化底蕴，并在临床广泛使用，如康复新液、美宝湿润烧伤膏、京万红软膏等外用药物，能有效促进烧烫伤创面组织生长因子的释放与分泌，减少组织含水量，减轻水肿，抑制创面炎症反应；同时能有效调节胶原蛋白的代谢和合成，促进烧烫伤创面胶原含量的提升；中草药还可以通过清除组织中氧自由基，抑制皮脂过氧化反应，进一步促进烧烫伤创面的愈合，同时也体现xwg/jA0fGm4LoFn9XwWDMA==了中医药治疗的优点所在。本文经过建立大鼠深度烧伤模型，在烧伤创面采用自制中草药油擦抹治疗，分析创面愈合情况并探讨其机制，为临床采用自制中草药油促进深度烧伤创面愈合提供有力依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物：选取清洁健康雄性Wister大鼠30只为研究对象，体重190～220 g，平均体重（204.36±1.08）g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK（京）2021-0006，实验前饲养于恒温、通风、安静环境中，定期进行更换垫料。本研究经医院动物实验伦理委员会批准。

1.1.2 试验药物、材料和仪器：自制中草药油（含羞草120 g，博落回100 g，千层塔100 g，藏红花50 g，侧柏叶30 g，苦参50 g，当归80 g，将上述中草药材粉碎处理至100～150目的细粉，然后混合均匀，放入广口玻璃瓶内以备用。准备4倍于中草药总量的香油，加入事先准备好的广口玻璃瓶中，并搅拌均匀，确保中草药粉末充分与香油混合。为保持制备过程的纯净性，使用瓶塞盖严瓶口，并用湿润的石膏绷带将瓶口封闭。为了防止变质，将瓶子移至阴凉处，进行3个月以上的浸泡储存，有助于中草药充分渗透香油，使药物有效成分充分浸出。经过储存后，取出瓶中的上清油）。无菌生理盐水，无菌纱布，凡士林纱布，流式细胞仪（美国BD公司），PCR定量分析仪（东林昌盛科技有限公司），easiSlicer振动切片机（广州竞赢化工科技有限公司），ES500生物组织包埋机（北京佳缘兴业科技有限公司），XC-HD4K超清视频显微镜（深圳星辰光学仪器有限公司），BIOCEN 22R微量台式离心机（北京维根技术有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 烫伤模型构建：大鼠饲养1周后，进行背部皮肤剪毛处置，使用苯巴比妥钠注射液（哈药集团三精制药有限公司，国药准字：H23021166，规格：2 ml∶0.2 g）以3.5 ml/kg用量进行麻醉，将小鼠放于俯卧位，固定大鼠四肢，暴露脱毛处理后背部皮肤，在大鼠背部设计2个大小相同的创面，直径为2 cm，用透明的线格尺标记创伤点。尽量做到每只大鼠背部的创面都是均匀分布，间隔大小相同。砝码加热法建模将直径2 cm的50 g的砝码放到热水里煮沸加热30 min，烫伤15 s。随后为大鼠注射5 ml复方氯化钠注射液（四川太平洋药业有限责任公司，国药准字：H51023960，规格：250 ml）以抗休克，等大鼠苏醒。

1.2.2 分组与给药：对建模成功的每只大鼠背部上两个创面，依据治疗方式不同分为对照组30例和观察组30例，对照组使用生理盐水予以清创后，将凡士林纱布遮盖包裹创面，并用敷贴稳固；观察组在进行生理盐水冲洗创面后，采用自制中草药油涂抹，涂抹界限大于创面范围2 mm，涂抹厚度0.5～1 mm，药物抹匀后使用凡士林纱布进行稳固，每天进行1次换药。两组大鼠正常饲养21 d，并在烧伤治疗后的第3、7、14、21天，从两组中选择3只行CO2处死，加用标尺垂直创口拍照，进行愈合范围测量取材。

1.2.3 标本的取材和处理：于烧伤后第3、7、14、21天用药结束后，取大鼠烧伤部位的皮肤组织进行HE染色。取材：用手术刀和剪刀小心剪取烧伤创面及其周边正常皮肤组织，避免损伤周围组织。固定：将组织放入4%多聚甲醛中固定24～48 h。脱水：将固定后的组织依次放入梯度乙醇（70%、80%、90%、95%、100%）中脱水，每步约30 min。透明：将脱水后的组织放入二甲苯中透明，便于后续浸蜡。浸蜡：将透明后的组织放入熔化的石蜡中，浸蜡2～3 h。包埋：将浸蜡后的组织包埋于石蜡块中，冷却凝固。切片：使用切片机将石蜡块切成薄片（一般厚度为5～8μm），并黏附于载玻片上。HE染色步骤如下。脱蜡至水：将切片依次放入二甲苯和梯度乙醇中脱蜡至水。苏木素染色：将切片放入苏木素染液中染色数分钟，然后用自来水冲洗。分化：用1%盐酸酒精分化，再用自来水冲洗。反蓝：用氨水或弱碱性水反蓝，使细胞核呈现蓝色。伊红染色：将切片放入伊红染液中染色数分钟，然后用自来水冲洗。脱水封片：将切片依次放入梯度乙醇和二甲苯中脱水透明，最后用中性树胶封片。使用光学显微镜观察HE染色切片，评估烧伤创面的愈合情况、炎症细胞浸润、新生血管形成等指标。

1.3 观察指标

1.3.1 创面愈合情况与创面愈合率：选取两只烧伤后Wister大鼠，由专业人员拍照并记录烧伤后第3、7、14、21天两只大鼠创面分泌物、愈合范围、颜色等，且采纳Image-pro plus 6.0图像分析软件计算创面愈合面积，创面愈合率=（原始创面面积-当天创面面积）/原创面始面积×100%[6]。

1.3.2 HE染色法观察大鼠烧伤创面皮肤成纤维细胞数及毛细血管数：于烧伤后第3、7、14、21天用药结束后，将大鼠进行麻醉后，在创面取中央0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm组织块，作为标本，用10%甲醛固定维持细胞本来结构后，分步进行乙醇脱水，常规进行石蜡包埋、切片、染色，选择5个高倍区域，在显微镜分析计算毛细血管数和成纤维细胞数。

1.3.3 对比两组免疫组化染色法检测大鼠烧伤创面皮肤组织EGF、VEGF水平：于烧伤后第3、7、14、21天用药结束后，将大鼠进行麻醉后，在创面取中央0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm组织块，作为标本，以10%甲醛固定，将石蜡包埋切片脱蜡水化后，用3% H2O2除去内源性过氧化物酶，并在柠檬酸盐缓冲液中高压加热对切片样本行抗原修复，采纳SP法按照试剂盒说明严格操作。在切片样本中选取10个高倍视野，采纳Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）、表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）水平测定，检测累计光密度值。

1.4 统计学分析：采用SPSS 21.0软件分析，计量资料使用（x¯±s）描述，两两间使用t检验；计数数据使用n（%）表示，并使用χ2检验；将P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 创面愈合情况与创面愈合率：随着治疗时间增长，两组创面愈合率均升高，且治疗后第3、7、14、21天观察组明显高于对照组（P＜0.05）；观察组创面愈合面积和渗出液均小于对照组，见图1～4、表1。

2.2 创面皮肤成纤维细胞数及毛细血管数：随着治疗时间增长，两组创面成纤维细胞数和毛细血管数均升高，且治疗后第3、7、14、21天观察组明显高于对照组（P＜0.05），见表2。

2.3 创面皮肤组织EGF、VEGF水平：随着治疗时间增长，两组EGF、VEGF水平均升高，且治疗后第3、7、14、21天观察组高于对照组（P＜0.05），见表3。

3 讨论

烧伤后创面愈合是漫长且复杂的过程，对于轻度烧伤来说，正常情形下机体能利用自身调节进行愈合，而烧伤程度较为严重情形下，多由于细胞因子和细胞外基质相互调节作用紊乱，造成烧伤创面愈合缓慢[7]。目前，临床采用中医治疗创面愈合的机制主要集中于煨脓长肉，如去腐生肌膏、生肌红粉膏等药方，这些药方在烧伤创面愈合中可经过降低创面pH值，呈现微酸性环境，从而刺激纤维细胞繁殖，促进创面的愈合[8]。烧伤创面愈合包含细胞外基质的重塑和合成、局部组织凝血、细胞增殖和炎症反应。烧伤处皮肤的细胞增殖常作为影响创面愈合的影响因素，当烧伤创面愈合越晚，造成创面成纤维细胞生成降低，组织生长因子的减少，从而延长创面愈合时间[9]。

既往有研究表明，在大鼠模型创面愈合中应用中药油剂愈溃油治疗，能有效促进创面愈合[10]。本研究通过自制中草药油对大鼠深度烧伤创面进行治疗，结果显示：两组创面愈合率均升高，且观察组明显高于对照组；观察组创面愈合面积和渗出液均小于对照组，与既往研究结果相似，表明中草药油对烧伤创面愈合具有保护和促进作用。分析原因为，油剂联合中草药成分可以在烧伤创面上形成保护膜，以降低细菌对损伤表皮的侵袭，且同时能够抑制创面毛细血管与渗出的亢进，缩减了烧伤创面愈合范围，进一步提高了创面愈合效果。另外，深度烧伤创面细胞增殖中成纤维细胞不仅可影响内皮细胞形态，促进毛细血管生成，其新增的毛细血管，还能为成纤维细胞提供代谢，促进烧伤创面的愈合[11-12]。本研究中结果显示，治疗后，两组创面成纤维细胞数和毛细血管数均上升，且观察组明显高于对照组。分析原因，现代药理学表明，千层塔所含成分有着生肌消肿之效，且在油剂混合下，保护新生创面，维持肌肤张力；苦参所含提取物不仅具有解毒消肿之效，还有着敛疮生肌的作用；侧柏叶中成分具有散肿毒，生肌作用；诸药所含提取物可刺激烧伤创面新毛细血管生成，增加成纤维细胞的增殖，从而改变烧伤创面的微循环状态，促进创面上皮化，加速愈合。

另一方面，VEGF作为创面愈合参与中重要细胞因子，存在于血管内皮细胞中，可使细胞增殖分化，增加血管通透性，在血管外形成细胞基质，促进新血管生成，在创面愈合有着关键作用[13]。EGF由受损的角质形成细胞和血小板释放合成，可加速细胞分裂活性，刺激成纤维细胞和角质形成细胞的分化增殖，加速伤口组织细胞中的蛋白质生成，加速愈合[14]。本研究结果显示，两组EGF、VEGF水平均上升，且观察组比对照组高，这与蔡德南等[15]学者研究中结果相似。表明自制中草药油中药材所含成分能调节组织中EGF、VEGF水平，促进表皮细胞、血管内皮细胞分化增殖，进一步促使肉芽组织生长，促进烧伤创面的愈合。

综上所述，利用自制中草药油治疗大鼠深度烧伤创面，可有效增加创面成纤维细胞数和毛细血管数，提高创面EGF、VEGF水平，促进了创面愈合情况，为临床深度烧伤创面用药提供有力理论价值。

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[收稿日期]2023-12-15

本文引用格式：杜宪，蔡霞，任纪祯，等.自制中草药油对大鼠深度烧伤创面的疗效评价[J].中国美容医学，2024，33（9）：45-48.