荷梗的化学成分研究

周传顺 饶高雄

1.益阳医学高等专科学校，湖南 益阳 413000；2.安化多花黄精加工技术及其产品开发重点实验室，湖南 益阳 413000；3.云南中医药大学云南省高校药食同用资源养生产品工程研究中心，云南 昆明 650500

荷梗为睡莲科(Nymphaeaceae)植物莲(NelumbonuciferaGaertn.)的叶柄或花柄[1]。荷梗味苦、性平，归脾、胃经。具有解暑清热、理气化湿的功效；主治暑湿胸闷不舒、泄泻、痢疾、淋病、带下。在经典处方“清署益气汤”“加味茵陈汤”和“复方犀角地黄汤”中均有荷梗的使用[2-4]。目前研究[5-7]表明荷梗中含有黄酮类和生物碱类化学成分；同时荷梗的药理研究较少，只涉及到单体化合物的细胞毒活性作用研究。另外，荷梗在各省中药材标准中只有性状鉴别，没有指标性成分对其进行定性和定量，与其物质基础未得到充分认识有关。在临床应用中，莲各个部位都可入药，而目前的相关研究多集中于其果实和叶子部位。为了进一步开发荷梗的药用价值，阐明其药效物质基础，完善其质量标准提供理论依据，本实验运用各种色谱方法对荷梗进行提取分离，并对得到的单体化合物进行结构解析。从荷梗中分离鉴定出10个化合物，分别为次大风子素(hydnocarpin，1)，木犀草素(luteolin，2)，山楂酸(maslinic acid，3)，白桦脂酸(betulinic acid，4)，反式-N-对羟基香豆酰酪胺(N-trans-coumaroyltyramine，5)，5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural，6)，单棕榈酸甘油(2，3-dihydroxypropyl palmitate，7)，棕榈酸(palmitic acid，8)，β-谷甾醇(β-sitosterol，9)，胡萝卜苷(daucosterol，10)。10个化合物均是荷梗中首次分离得到，化合物1和6是莲中首次分离得到。

1 材料

Bruker Avance III 400 MHz核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)，硅胶、薄层色谱硅胶板(青岛海洋化工厂，烟台大学生物科学与工程研究所)，Sephadex LH-20(Pharmacia公司)，RP-C18(日本富士硅化工)，HP-20型树脂(日本三菱化工)，分离纯化用试剂均由工业纯重蒸处理后使用。

实验药材购于云南省文山市，经云南中医药大学中药学院陈绍田研究员鉴定为植物莲(NelumbonuciferaGaertn.)的叶柄部。

2 提取与分离

荷梗鲜品225 kg切成细短样阴干，再经粉碎后得样品36 kg；样品使用95%EtOH加热回流提取2次，每次2 h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得浸膏。浸膏用95%EtOH溶解，过滤，回收溶剂后浸膏再以水溶解，得水溶部分Fr.A和水不溶部分Fr.B；Fr.A经 HP-20 柱分离(水-95%EtOH梯度)，得组分Fr.A1～A2，Fr.A2 经硅胶柱层析(氯仿-甲醇梯度)洗脱后得到化合物6(11.1 g)。Fr.B经甲醇溶解后经MCI柱分离，以甲醇梯度洗脱，薄层层析显示该步骤未有分离效果，故合并以硅胶柱层析(氯仿-甲醇梯度)洗脱，得组分Fr.B1～B2，同时得化合物9(830 mg)，10(265 mg)。Fr.B1经Sephadex LH-20 柱色谱(甲醇)和Sephadex LH-20 柱色谱(氯仿-甲醇=1∶1)得到化合物1(17.7 mg)，3(143 mg)，4(3.2 mg)，7(52 mg)，8(20 mg)。Fr.B2经经硅胶柱层析(氯仿-甲醇梯度)和Sephadex LH-20 柱色谱(氯仿-甲醇=1∶1)后得到化合物2(18 mg)，5(18 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末，溶于甲醇。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：6.21(1H，d，J=2.0Hz，H-6)，6.52(1H，d，J=2.0Hz，H-8)，7.67(1H，d，J=2.2Hz，H-2′)，7.09(1H，d，J=8.6Hz，H-5′)，7.61(1H，dd，J=8.6，2.2Hz，H-6′)，7.04(1H，d，J=1.8Hz，H-2″)，6.82(1H，d，J=8.0Hz，H-5″)，6.88(1H，m，H-6″)，5.02(1H，d，J=7.8Hz，H-7″)，4.28(1H，m，H-8″)，3.59(1H，d，J=12.9Hz，H-9″a)，3.38(1H，s，H-9″b)，12.92(1H，s，5-OH)，10.89(1H，s，7-OH)，3.78(1H，s，3″-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：163.4(C-2)，104.4(C-3)，182.2(C-4)，161.9(C-5)，99.4(C-6)，164.7(C-7)，94.6(C-8)，157.9(C-9)，104.3(C-10)，124.2(C-1′)，115.3(C-2′)，144.1(C-3′)，147.6(C-4′)，115.8(C-5′)，118.0(C-6′)，127.4(C-1″)，112.3(C-2″)，148.1(C-3″)，147.7(C-4″)，115.8(C-5″)，121.1(C-6″)，76.8(C-7″)，78.5(C-8″)，60.6(C-9″)，56.2(OCH3)。以上数据与文献[8]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为次大风子素(Hydnocarpin)。

化合物2：黄色粉末，溶于甲醇。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：6.67(1H，s，H-3)，6.19(1H，s，H-6)，6.45(1H，s，H-8)，7.40(1H，s，H-2′)，6.89(1H，d，J=8.0Hz，H-5′)，7.43(1H，s，H-6′)，12.99(1H，s，5-OH)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：164.4(C-2)，103.3(C-3)，182.1(C-4)，161.9(C-5)，99.3(C-6)，164.6(C-7)，94.3(C-8)，157.7(C-9)，104.2(C-10)，122.0(C-1′)，113.8(C-2′)，146.2(C-3′)，150.1(C-4′)，116.5(C-5′)，119.4(C-6′)。以上数据与文献[9]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为木犀草素(Luteolin)。

化合物3：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：2.24(1H，dd，J=12.4，4.1Hz，H-1)，4.09(1H，td，J=11.0，4.2Hz，H-2)，3.39(1H，d，J=9.4Hz，H-3)，5.44(1H，m，H-12)，3.27(1H，dd，J=13.7，3.8Hz，H-18)，1.25(3H，s，H-23)，0.99(3H，m，H-24)，0.98(3H，m，H-25)，1.06(3H，s，H-26)，1.24(3H，s，H-27)，0.96(3H，s，H-29)，0.94(3H，s，H-30)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)δ：47.5(C-1)，68.4(C-2)，83.6(C-3)，39.6(C-4)，55.7(C-5)，18.6(C-6)，33.0(C-7)，39.6(C-8)，47.9(C-9)，38.3(C-10)，23.5(C-11)，122.2(C-12)，144.6(C-13)，42.0(C-14)，28.0(C-15)，23.7(C-16)，46.5(C-17)，41.8(C-18)，46.2(C-19)，30.7(C-20)，34.0(C-21)，33.0(C-22)，29.1(C-23)，17.4(C-24)，16.6(C-25)，17.2(C-26)，25.9(C-27)，180.0(C-28)，33.0(C-29)，23.5(C-30)。以上数据与文献[10]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为山楂酸(Maslinic acid)。

化合物4：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：3.13(1H，m，H-3)，0.75(3H，s，H-23)，0.86(3H，s，H-24)，0.95(3H，s，H-25)，0.97(3H，s，H-26)，1.01(3H，s，H-27)，4.71(1H，s，H-29a)，4.59(1H，s，H-29b)，1.70(3H，s，H-30)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：40.3(C-1)，28.2(C-2)，79.8(C-3)，40.1(C-4)，57.1(C-5)，19.6(C-6)，35.8(C-7)，42.1(C-8)，52.2(C-9)，38.5(C-10)，22.3(C-11)，27.1(C-12)，39.8(C-13)，43.8(C-14)，31.9(C-15)，33.5(C-16)，57.7(C-17)，48.7(C-18)，50.6(C-19)，152.2(C-20)，31.0(C-21)，38.3(C-22)，28.8(C-23)，16.9(C-24)，16.8(C-25)，16.3(C-26)，15.3(C-27)，180.7(C-28)，110.3(C-29)，19.7(C-30)。以上数据与文献[11]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为白桦脂酸(Betulinic acid)。

化合物5：白色粉末，溶于甲醇。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.38(2H，d，J=8.0Hz，H-2，6)，6.78(2H，d，J=8.0Hz，H-3，5)，7.31(1H，d，J=15.7Hz，H-7)，6.39(1H，d，J=15.7Hz，H-8)，7.01(2H，d，J=8.0Hz，H-2′，6′)，6.69(2H，d，J=8.0Hz，H-3′，5′)，2.64(2H，t，J=7.4Hz，H-7′)，3.33(2H，m，H-8′)，8.01(1H，t，J=5.4Hz，NH)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：126.4(C-1)，129.6(C-2)，116.2(C-3)，159.2(C-4)，116.2(C-5)，129.6(C-6)，139.0(C-7)，119.2(C-8)，165.8(C-9)，130.0(C-1′)，129.9(C-2′)，115.6(C-3′)，156.1(C-4′)，115.6(C-5′)，129.9(C-6′)，34.9(C-7′)，41.1(C-8′)。以上数据与文献[12]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为反式-N-对羟基香豆酰酪胺(N-trans-coumaroyltyramine)。

化合物6：红棕色油状物，溶于氯仿。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.49(1H，s，H-1)，6.52(1H，s，H-3)，7.26(1H，s，H-4)，4.67(2H，s，H-6)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：178.1(C-1)，152.0(C-2)，124.0(C-3)，110.1(C-4)，161.4(C-5)，57.0(C-6)。以上数据与文献[13]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural)。

化合物7：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：4.21(1H，m，H-1a)，3.71(1H，m，H-1b)，3.94(1H，m，H-2)，4.14(1H，m，H-3a)，3.62(1H，m，H-3b)，2.35(2H，t，J=7.5Hz，H-2′)，1.62(2H，m，H-3′)，1.26(24H，m，H-4′～15′)，0.88(3H，t，J=6.6Hz，H-16′)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：65.2(C-1)，70.3(C-2)，63.4(C-3)，174.4(C-1′)，34.2(C-2′)，31.9(C-3′)，29.7～29.1(C-4′～13′)，24.9(C-14′)，22.7(C-15′)，14.1(C-16′)。以上数据与文献[14]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为单棕榈酸甘油(2，3-dihydroxypropyl palmitate)。

化合物8：白色粉末，溶于氯仿。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：2.35(2H，t，J=7.4Hz，H-2)，1.63(2H，m，H-3)，1.30(24H，m，H-4～15)，0.88(3H，t，J=6.5Hz，H-16)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：179.7(C-1)，34.0(C-2)，24.7(C-3)，29.7～29.1(C-4～13)，31.9(C-14)，22.7(C-15)，14.1(C-16)。以上数据与文献[15]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为棕榈酸(Palmitic acid)。

化合物9：白色针晶(氯仿)，使用10%硫酸乙醇显色呈紫红色，与β-谷甾醇标准品共薄层对照时Rf 值相同，故鉴定化合物9为β-谷甾醇。

化合物10：白色粉末(丙酮)，使用10%硫酸乙醇显色呈紫红色，与胡萝卜苷标准品共薄层对照时Rf 值相同，故鉴定化合物10为胡萝卜苷。

4 讨论

本实验从荷梗中分离鉴定出10个化合物，其中次大风子素(hydnocarpin，1)、木犀草素(luteolin，2)属于黄酮类成分；山楂酸(maslinic acid，3)、白桦脂酸(betulinic acid，4)属于五环三萜类成分；β-谷甾醇(β-sitosterol，9)、胡萝卜苷(daucosterol，10)为甾体类成分；其他化合物反式-N-对羟基香豆酰酪胺(N-trans-coumaroyltyramine，5)、5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural，6)、单棕榈酸甘油(2，3-dihydroxypropyl palmitate，7)、棕榈酸(palmitic acid，8)分别属于香豆素类、呋喃衍生物、脂肪酸酯和脂肪酸成分。现代药理表明木犀草素、白桦脂酸和β-谷甾醇具有抑菌作用[16-19]；山楂酸具有抑制寄生虫的作用[20]。这些药理作用为荷梗治疗泄泻、痢疾、淋病提供了一定理论依据。另外，本文的研究丰富了荷梗的成分类型，为其后续药效评价、质量标准完善和开发利用提供了部分理论基础。