化学发光法与酶联免疫法在乙肝病毒血清学检验中的临床对比研究

谢金花

【摘要】 目的 比较化学发光法与酶联免疫法在乙肝病毒血清学检验中的应用价值。方法 选择2021年1月—2021年12月广昌县中医院收治的100例疑似乙肝病毒感染患者进行研究，在确认所有患者病例资料完整后抽取其空腹血，分别采用化学发光法和酶联免疫法对患者乙肝五项进行检测，对比2类检测方法对乙肝五项阳性检测率的差异，以实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）检测结果作为金标准，对比化学发光法及酶联免疫法检测HBV的诊断效能。结果 化学发光法检测乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝e抗体（hepatitis B eantibody，HBeAb）的阳性检出率高于酶联免疫法（P＜0.05）；2类方法在乙肝表面抗体（hepatitis b surface antibody，HBsAb）、乙肝e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝核心抗体（hepatitis B core antibody，HBcAb）及总阳性检出率方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%，与PCR检验的Kappa值为0.801；化学发光法检验HBV阳性的灵敏度为96.92%、特异度为88.57%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.03%、阴性预测值为93.94%，与PCR检验的Kappa值为0.866；化学发光法具有更优的诊断效能。结论 相较于酶联免疫法，化学发光法在对乙肝病毒五项血清检测中表现出更高的诊断价值，值得推广。

【关键词】 化学发光法；酶联免疫法；乙肝病毒；乙肝五项

文章编号：1672-1721（2024）10-0105-03     文献标志码：A     中国图书分类号：R446.6

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV）持续感染引起的一种严重疾病，参与着肝硬化、肝纤维化、肝细胞衰竭及肝癌等多种肝脏疾病机制，在发展中国家人群中较为常见，是全世界十大死亡原因之一。HBV主要传播途径为血液、体液及性传播，也被列为性传播疾病[1]。大多数情况下，HBV病毒潜伏期无症状，通常在体检中发现。当前临床主要可通过乙肝五项对患者HBV感染情况进行分析，而乙肝五项的检测方法主要包括化学发光法和酶联免疫法。酶联免疫法是一种更广泛使用的临床检测方法，主要医疗设备具备试验条件，价格便宜，适用于公共测试，但在定量分析中有一些弊端，特别是当血清样品浓度太高时，假阴性因素影响疾病的诊断[2]。化学发光免疫测定法是一种新型的免疫测定技术，可以高精度地进行定量分析[3]。本研究比较化学发光和酶联免疫吸附法对检测乙型肝炎感染血清的差异，为临床检验提供参考，报告如下。

1 资料与方法

1.1 基础资料

选取2021年1月—2021年12月广昌县中医院收治治疗的100例疑似乙肝病毒感染患者，男性患者52例，女性患者48例，年龄18～60岁，平均年龄（39±21）岁；所有患者均有完整病例资料，在治疗期间抽取空腹静脉血进行乙肝五项检查。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

纳入标准：（1）有HBV感染者接触史，且伴有肝痛、乏力等肝病症状；（2）年龄18～60岁；（3）患者对于研究相关信息已掌握，并且愿意配合相关研究。

排除标准：（1）近期已使用相应的抗病毒治疗药物；（2）免疫经患者；（3）全身或局部急慢性感染患者；（4）既往乙肝或其他类型病毒感染史；（5）血液系统疾病。

1.2 方法

血样采集。所有患者均在空腹状态下接受静脉血采集，抽取静脉血样本时需保证在无菌环境下进行，抽血器械需要在消毒后使用。抽取血液样本后置于离心机，以3 000 r/min速度离心10 min后，采用移液器取上层血清检测。若当时条件不允许或需要长时间保存血样本时，必须将血样放于低温状态下进行保存，低温可低至-80 ℃。检测-80 ℃冰箱中的血样本时，应将样本在室温中复温、复融、充分混合，切勿将样本反复冻融。将收集到的15 mL血分为3份，2份分别采用化学发光法、酶联免疫吸附法对乙肝五项进行检测，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）等指标[4]；1份采用PCR对HBV进行自动化检测，根据配套试剂盒操作即可。

化学发光法。主要通过迈瑞CL-2000i仪器检测进行自动化检测，依次对各项目试剂盒及校准品的二维码执行仪器校准测试得到系统校准曲线，试剂和校准品在37 ℃条件下孵育30 min，试剂加入仪器试剂盘中，校准品按仪器校准操作执行，校准通过之后再执行质控品经行质控检测，质控在可控范围之内方可检测待测样品，待测品按序号依次放入样本架进入轨道即可。

酶联免疫吸附法。根据试剂盒说明书分别采用双抗体夹心法、双抗原夹心法、中和竞争法、竞争抑制法进行检验，将室温放置后的实际分入空白对照孔、阴阳性对照孔，并使得标准液和特异酶加入，除空白对照孔外其他加入待测样品，充分混匀后盖上专用膜，37 ℃孵育30 min后洗涤拍干，加入顯色剂并通过覆膜避光反应15～30 min后加入终止液进行终止反应，并于酶标仪对分光度值进行读取。

实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）。主要通过荧光定量测定仪进行自动化检测，根据配套试剂盒操作即可。

1.3 观察指标

对2类方法的阳性检测。化学发光法，HBsAg检测值大于0.08 U/mL，HBsAb检测值大于10 U/mL，HBeAg相对光强度/临界相对光强度水平不小于1，HBeAb和HBcAb的相对光强度/临界相对光强度水平不大于1均可判定为阳性。酶联免疫吸附法，HBeAb、HBcAb相对CUTOFF相对光强度水平不高于0.8，HBsAg、HBsAb、HBeAg不低于0.8，则可以判定为阳性。根据判定结果，比较对HBV血清标志物的阳性检出率，从阳性结果准确率分析2类方法检测效果的差异性。

以PCR检测作为金标准，采用Kappa检验分别对化学发光法及酶联免疫法检测HBV阳性水平的灵敏度、特异度和准确率进行比较。将2类检测方法与金标准的一致性Kappa值进行对比，PCR检测HBV定量测量值＞1.0×102拷贝/mL即可将患者判定为阳性。

1.4 统计学方法

应用SPSS 22.0统计软件处理数据，计数资料用百分比表示，采用χ2检验；一致性分析采取Kappa检验，Kappa值＜0.4为一致性较差，0.4～0.75为一致性一般，＞0.75为一致性较好；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2类方法乙肝五项检测结果比较

化学发光法HBsAg、HBeAb阳性检出率比酶联免疫法更高（P＜0.05）；2类方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及总阳性检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 2类方法检验HBV阳性的一致性分析

100例研究对象经PCR检验显示，HBV阳性为65例。酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%，与PCR检验的Kappa值为0.801。化学发光法检验HBV阳性的灵敏度为96.92%、特异度为88.57%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.03%、阴性预测值为93.94%，与PCR检验的Kappa值为0.866。化学发光法具有更优的诊断效能，见表2、表3。

3 讨论

乙肝发生率非常高，严重阻碍了人们的生活和健康[5]。乙肝传染方式主要是血液感染、性传染、母婴感染等。对肝炎患者进行治疗和诊断时，科学且有效的诊断和评价很重要。随着医学技术发展，乙肝五项及HBV-DNA检验技术的提高，使得该病发生及动态定量分析的准确性大大提高。目前乙肝临床检测方法主要有乙肝单一五项检查、与HBV前s抗原组合的乙肝五项检查、与HBV-DNA检测组合的乙肝五项检查等，较大程度降低了乙肝临床检测失误率，对于更早发现疾病或帮助医师制定临床治疗方案具有一定价值[6]。

本研究结果显示，化学发光法HBsAg、HbeAb阳性检出率高于酶联免疫法（P＜0.05），2类方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及总阳性检出率上比较，差异无统计学意义（P＞0.05），提示化学发光法在可通过HBsAg、HBeAb阳性异常检出来提高对患者乙肝检测的准确性。化学发光法是根据被测物质与相应的检测试剂发生化学反应所产生的发光强度来判断被测物质的浓度。因为检测发光强度与被测物质存在线性定量关系，所以化学发光法灵敏度很高[7]。相关实验表明，化学发光法检测灵敏度高，对于被测标志物的检测准确率高、误诊率低。随着化学发光免疫分析技术的发展，该技术在乙型肝炎五项标志物检测中具有重要的应用价值。HBsAg主要属于HBV的外壳蛋白成分，其水平可在HBV感染后1～2周出现异常，并因病情进展而持续变化；HBeAb主要受到HBsAg刺激而产生抗体，对于HBV复制过程的反映也有一定效果。化学发光法更灵敏的检测使得该类方法对HBV阳性检出更具价值[8]。

本次研究显示，酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%，与PCR检验的Kappa值为0.801；化学发光法检验HBV阳性的灵敏度为96.92%、特异度为88.57%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.03%、阴性预测值为93.94%，与PCR检验的Kappa值为0.866；化学发光法具有更优的诊断效能。酶联免疫吸附法根据抗原与抗体的特异性结合现象，可以利用酶与基质之间的催化作用和对待测物的定量测定，同时测定抗原和抗体，在临床应用广泛，但该方法对抗原抗体结合位点较为看重，否则难以发生反应。该方法适用于不适合标记的抗体，可以保持初级抗体的最强免疫，缺点是容易发生交叉反应。试验物质的浓度越高，酶标抗原或抗体越少，用仪器测定的吸光度值越低[9]。化学发光免疫分析主要由抗原抗体检测系统和化学发光系统构成，免疫反应特异性强，化学发光灵敏度高，通过与发光试剂标记的抗原和抗体组合的免疫反应产生免疫现象，加入化学基质，在聚乙烯醇的催化反应下发生电子转移，氧化成刺激的中间体，用化学发光检测器检测一定程度的光信号强度，从而实现对被测对象定性定量的检测。

化学发光法主要包括化学发光免疫检测技术、化学发光酶免疫技术、电化学发光免疫检测技术3类，各类方法标志物有所不同。化学发光免疫检测技术反应机理为氧化还原反应，不会对人体产生明显损害。化学发光酶免疫技术结合的底物与前者有所区别，在与结合抗原抗体分离后可发生能量跃迁，从而发生相应强度的光，从而进行定量。电化学发光免疫检测技术兼具前两者的高特异性和点化学发光高敏感性。其中，电化学发光试剂主要用于抗体和抗原的标记，磁珠作为将检测对象及其相应的抗体固定在磁微球上的固体载体。免疫结合后，抗体免疫组合物在磁珠上生成，磁场施加到反应介质的外侧，复合體被磁性机架吸附凝聚，通过洗涤去除弹跳物质，测量磁珠结合物的发光强度，从而准确测量未知浓度的抗原[10]。

综上所述，相较于酶联免疫法，化学发光法在对乙肝病毒五项血清检测中表现出更高的诊断价值，值得推广。

参考文献

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[3] 高永庆.化学发光酶免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物的比较[J].临床军医杂志，2019，2（47）：215-216.

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[5] 刘聪，付帮雷.比较两种不同免疫方法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的临床效果[J].智慧健康，2019，5（20）：5-6.

[6] 李付奎，齐志刚，曾华巧，等.酶联免疫吸附与磁微粒化学发光法检测乙肝病毒的对比研究[J].临床检验杂志，2020，9（1）：41-42.

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[8] 马晶晶，孟雨.实时荧光定量PCR检测HBV-DNA与化学发光磁微粒法检测乙肝五项的关系[J].基层医学论坛，2021，25（7）：970-972.

[9] 毕玉超，王吉，任莹，等.核酸检测法与酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒血清学检验中的应用分析[J].中国医药指南，2019，17（5）：146-147.

[10] 何成山，马晨芸，陆志成.化学发光免疫分析法检测HBcAb阳性、HBsAg阴性血清中隐匿性乙型肝炎病毒感染的分析[J].标记免疫分析与临床，2019，26（1）：130-133.

（编辑：张兴亚）