人工推片法评估不同大血小板比率的血小板计数及形态研究

庞冲敏 张宗凯 韦家秀 王燕 刘兰

【摘要】 目的 研究不同大血小板比率（platelet-larger cell ratio，P-LCR）的血小板（Platelets，PLT）计数及血小板形态。方法随机收集2020年10月—2021年3月期间检测成人血常规的252份标本，根据血小板相关参数结果分为4组，A组血小板分布宽度（platelet distribution width，PDW）、血小板平均容积（mean platelet volume，MPV）、血小板压积（platelet hematocrit，PCT）、P-LCR未显示数值血标本61份，B组PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＜13%血标本33份，C组PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR在13%～43%血标本61份，D组PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＞43%血标本97份。采用Sysmex-XN1000五分类血细胞分析仪进行荧光核酸染色法（PLT-F）计数血小板，手工推片法评估血小板数，并观察血小板形态、大小及聚集情况，计算各组中PLT＜125×109/L、125×109/L～350×109/L、＞350×109/L的百分比。結果  A组中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B组中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板较多；C组中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均匀；D组中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板较多。结论  血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR未显示数值时，无论是否满足3项中的其中之一（血球仪有异常报警提示，计数值低于实验室确认的仪器线性范围，首次计数结果＜100×109/L或＞1 000×109/L），都需检查标本并推片复检。血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值时，如满足以上3项中的其中之一，需检查标本并推片复检，如不满足，可不推片复检。

【关键词】 人工推片；大血小板比率；血小板计数；血小板形态

文章编号：1672-1721（2024）10-0130-03     文献标志码：A     中国图书分类号：R512.91

血小板是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持血管内皮完整性、黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能。血小板计数是指测定单位容积血液中血小板的数量。血小板计数是止血、凝血检查的常用筛选试验之一，参考区间为125×109/L～350×109/L[1]。血小板计数可用血细胞分析仪、显微镜或流式细胞仪检测。目前医学实验室主要用血细胞分析仪计数血小板，该方法具有重复性好，速度快等优点。当仪器报告显示血小板数量、图形异常或报警提示时，应使用显微镜或流式细胞仪检测法对血小板计数结果复核。国际血液学标准委员会推荐流式细胞术检测为参考方法[2]。大血小板的比率一般与血小板体积的分布宽度和血小板的平均体积同时检测，主要用于表达血小板的形态，对判断骨髓造血功能有一定的临床意义[3]。正常的血小板呈两面微凸的圆盘状，直径1.5～3.0 μm，大血小板直径4～7 μm，巨型血小板直径＞7μm。大血小板比率（P-LCR）是指大血小板与总血小板的比率，参考范围为13%～43%[4]。使用自动血液分析仪检测血小板时，血小板相关参数检测（包括P-LCR）未显示数值的情况偶尔发生。为了解不同

P-LCR时PLT计数结果及血小板形态，本研究对不同P-LCR的血标本进行了人工推片法评估血小板计数及血小板形态观察，报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择2020年10月—2021年3月贵阳市公共卫生救治中心门诊、住院成人患者及体检者含有乙二胺四乙酸二钾的静脉抗凝全血标本，共252份，按照血小板相关参数PDW（血小板体积分布宽度）、MPV（血小板平均体积）、PCT（血小板比容）、P-LCR（大血小板比率）结果分为4组。

A组为血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR未显示数值，B组为血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＜13%，C组为血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR在13%～43%，D组为血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＞43%。

1.2 仪器与试剂

Sysmex-XN1000五分类血细胞分析仪及其配套的溶血剂、稀释液、清洗剂均为日本Sysmex公司生产，仪器定期校准、各项指标均符合要求，室内质控均在控。双目显微镜CX-23（日本OLympus），采血针及EDTA-K2抗凝真空管（紫），瑞氏-吉姆萨染液一、二。

1.3 检测原理

全自动血液分析仪主要用2种通道检测血小板，分别是电阻抗法和荧光染色法检测通道。PLT-F通道是作为检测血小板的专用通道，与以往分析仪（XE系列）的PLT-O检测用试剂相比，该通道所用的改良试剂可对血小板特异性染色，从而尽可能更精准地检测血小板。PLT-F试剂染色血小板内含有大量核酸的线粒体和内质网。PLT-F试剂只浓染含有细胞器的血小板，几乎不染色细胞膜。PLT-F试剂的荧光强度可明确区别血小板和红细胞碎片。

1.4 检测方法

成人在空腹的状态下抽取静脉血2 mL，加入含有EDTA-K2的真空抗凝管中，轻轻颠倒混匀8次，用PLT-F法计数PLT，2 h完成检测。每次检验标本前，做质控，保证仪器相关监测指标在控前提下检测标本。

人工推片法制作血涂片：用楔形技术制作血涂片，在玻片一端的1/3处，加1滴（约0.05 mL）充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片。以30°～45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳推动推片至载玻片的另一端，制作头、体、尾分明的舌状的血膜，厚薄适宜的血涂片。

瑞氏-吉姆萨染色：待血膜干透后，滴加瑞氏-吉姆萨染色液，让染液完全遮盖血膜，再滴加缓冲液，用洗耳球将染液与缓冲液混匀，静止染色10 min，然后用中性流动水冲去染液。

评估血小板数量及形态：选择血片中分布均匀，无异常聚集或纤维蛋白丝区域，通过血涂片估算血小板数量，血小板数（109/L）≈每个油镜视野中血小板平均个数×15（109/L）[5-6]，同时观察血小板大小及形态。

2 结果

A组61份，其中PLT＜125×109/L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均；B组33份，其中PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板较多；C组61份，其中PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.63%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小均匀；D组97份，其中PLT＜125×109/L的占29.89%，125×109/L～350×109/L的占71.11%，＞350×109/L的占0%，大血小板较多。

3 讨论

血小板计数是血常规检验中一项重要的指标。当血管受损破裂时，血小板会在血管破裂处相互黏附，聚集形成血小板血栓，堵住破损的伤口，并释放ADP、肾上腺素、花生四烯酸等血管活性物质，最终达到止血的作用。当血小板数量减少到一定程度时，可引起出血症状，出血量达到一定程度时是可以致命的。临床医生收到血小板计数减少报告时，会积极查找病因治疗。当血小板计数出现异常时，血小板形态的异常更具有临床意义[7]。

在本研究中，当血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR未显示数值时，PLT＜125×109 /L的占55.73%，125×109/L～350×109/L的占41.00%，＞350×109/L的占3.27%，血小板大小不均，说明A组血小板计数低于参考区间的发生率最大，其次是血小板计数在参考区间范围内，发生率最小的是血小板计数高于参考区间；当血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＜13%，PLT＜125×109/L的占3.03%，125×109/L～350×109/L的占63.63%，＞350×109/L的占33.34%，小血小板较多，说明B组血小板计数低于参考区间的发生率最小，血小板计数在参考区间范围内发生率最大，血小板计数高于参考区间发生率位于本组第2名；当血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR在13%～43%时PLT＜125×109/L的占14.75%，125×109/L～350×109/L的占83.62%，＞350×109/L的占1.63%，血小板大小较均匀，说明C组血小板计数在参考区间范围内发生率最大，血小板计数低于参考区间的发生率位于本组第2名，血小板计数高于参考区间发生率最小；当血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值且P-LCR＞43%时，PLT＜125×109/L的占29.89%，PLT125×109/L～350×109/L的占70.11%，PLT＞350×109/L的占0%，大血小板較多，说明D组血小板计数在参考区间范围内发生率最大，血小板计数低于参考区间的发生率位于本组第2名，血小板计数高于参考区间发生率最小。

本研究大血小板比率与血小板计数及形态大小之间存在一定的关系，在无聚集、小红细胞或细胞碎片的影响下，荧光核酸染色法计数与人工推片法评估血小板数计数结果相近。人工推片法评估是血小板计数估计和形态学观察重要方法之一。

4 结语

血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR未显示数值时，无论是否满足血球仪有异常报警提示、计数值低于实验室确认的仪器线性范围、首次计数结果＜100×109/L或＞1 000×109/L这3项的其中之一，都需检查标本并推片复检。血常规检测后PDW、MPV、PCT、P-LCR显示数值时，如满足以上3项中的其中之一，需检查标本并推片复检；如不满足，可不推片复检。

有文献报道，对血小板形态异常进行描述时，可对血小板的大小、形状、颗粒是否减少或缺乏以及分布情况进行描述，对巨大血小板需采用分级方式进行报告[8]。检验技师在用血液分析仪检测血小板时，应关注血小板计数结果和异常报警，需注意标本是否受到因素干扰血小板数值（例如血液凝块、血小板聚集、血小板卫星现象、冷球蛋白、细胞碎片等），及时推片复检。

参考文献

[1] 许文荣，林东红，李山，等.临床基础检验学技术[M].北京：人民卫生出版社，2019：56-79.

[2] 尚红，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程[M].4版.北京：人民卫生出版社，2015：14-25.

[3] 谢红珍，薛凯.冠心病患者凝血和血小板状态的临床研究[J].江苏大学学报（医学版），2004，14（6）：534-535.

[4] 胡恩亮，赵媛，王妍，等.血小板聚集影响因素在血细胞计数中的临床应用[J].国际检验医学杂志，2016，37（6）：749-753.

[5] 张时民，王庚.血象-外周血细胞图谱[M].北京：人民卫生出版社，2016：1-5.

[6] 王霄霞.外周血细胞形态学检查技术[M].北京：人民卫生出版社，2010：98-99.

[7] 中华医学会检验医学分会血液学与体液学学组.血细胞分析报告规范化指南[J].中华检验医学杂志，2020，43（6）：619-627.

[8] PALMER L，BRIGGS C，MCFADDEN S，et al.ICSH recommendations for the standardization of nomenclature and grading of peripheral blood cell morphological features[J].Int J Lab Hematol，2015，37（3）：287-303.

（编辑：张兴亚）