肝细胞癌患者血清ECM1、MMP-9 和VEGF 水平的变化及其意义

郭雅明 陈艳哲 李艳杰 李国超 张国友 陈博

肝细胞癌死亡率较高, 常会累及患者的肝脏, 若其发生转移, 还会对患者的大脑、胃肠道以及肾脏等器官造成严重影响［1］。临床早期手术或者移植等办法能够治愈该疾病, 但若发展至晚期, 其治疗难度较大, 且术后极易发生转移和复发, 所以了解患者肝细胞癌发展情况对于术后患者恢复情况有重要意义［2］。临床上首次发现小鼠成骨基质细胞中细胞外基质蛋白-1(serum extracellular matrix-1, ECM1) 能够参与细胞增生、皮肤分化以及肿瘤发展的多个过程中, 故临床对此进行了进一步研究, 发现其在多种恶性肿瘤中具有高表达；以及随着对肝细胞癌的深入钻研, 发现基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤转移过程中也有重要意义［3-5］, 所以本文选择了60 例肝细胞癌患者进行实验, 现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对本院2021 年9 月～2022 年12 月收治的60 例肝细胞癌患者进行回顾性分析, 其中, 男39 例, 女21 例；年龄30～90 岁, 平均年龄(60.00±10.10)岁；TNM 分期［6］：Ⅰ～Ⅱ期33 例, Ⅲ～Ⅳ期27 例；24 例患者血管遭到侵犯, 36 例血管无碍；Edmondson分期［7］：Ⅰ～Ⅱ期24 例, Ⅲ～Ⅳ期36 例；肿瘤直径：≥5 cm 45 例, <5 cm 15 例；24 例出现淋巴结转移,36 例未出现淋巴结转移；肿瘤包膜情况：包膜完整42 例, 无或不完整18 例；Child-Pugh 分级［8］：A 级50 例, B 级10 例。本实验已经过医院伦理委员会同意。

纳入标准：①对本次实验均已知情, 并自愿签订同意书；②临床资料完善者, 可供参考；③无视觉、听觉功能障碍；④患有肝细胞癌患者, 且在入组前未接受放疗、化疗治疗。

排除标准：①无故退出实验者；②患有自身免疫性疾病者；③交流沟通功能障碍者。

1.2 方法 患者主要使用甲磺酸阿帕替尼进行治疗,必要时也可联合GEMOX 方案肝动脉化疗栓塞术进行治疗。采用经酶联免疫吸附法检测患者治疗前后血清ECM1、MMP-9 和 VEGF 水平。在微孔中加入提前配制好的标准液与样本, 将其摇匀, 在37℃下保存0.5 h,之后使用冲洗液冲洗微孔板, 并加入50 μl 的标记二抗,之后在室温下保存放置0.5 h, 在冲洗5 次后, 加入底物,放置黑暗环境下0.5 h, 之后加入终止液停止反应, 振荡摇匀后, 在酶标仪器下进行比色, 得出相应的OD 值,并根据其计算浓度。该实验中使用的仪器、液体和操作均按照说明书进行。

1.3 观察指标 ①比较患者治疗前后ECM1、MMP-9和 VEGF 水平。②比较不同临床病理特征(年龄、性别、血管侵犯、淋巴结转移、TNM 分期、Edmondson 分期和肿瘤直径)患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0 软件分析及处理数据。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t检验。以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患者治疗前后 ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比较 治疗前, 患者ECM1 水平为(215.56±30.80)pg/ml、MMP-9 水 平 为(499.56±30.56)μg/L、VEGF 水 平 为(798.02±50.79)pg/ml；治疗后, 患者ECM1、MMP-9以及VEGF 水平分别为(135.23±44.58)pg/ml、(421.25±87.56)μg/L 和(657.56±54.56)pg/ml。治疗后, 患者癌组织ECM1、MMP-9 和VEGF 水平低于治疗前(t=11.483、6.541、14.596, P<0.001)。

2.2 不同临床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF水平比较 不同年龄、性别患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；不同血管侵犯、淋巴结转移、TNM 分期、Edmondson 分期和肿瘤直径患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比较( ±s)

表1 不同临床病理特征患者ECM1、MMP-9 和VEGF 水平比较( ±s)

注：不同血管侵犯、淋巴结转移、TNM 分期、Edmondson 分期和肿瘤直径比较, P<0.05

项目 类别 例数 ECM1(pg/ml) MMP-9(μg/L) VEGF(pg/ml)数值 t P 数值 t P 数值 t P年龄 ≥60 岁 35 214.56±30.05 0.339 0.735 503.68±31.02 1.040 0.302 800.58±50.48 0.381 0.705<60 岁 25 217.23±30.02 495.28±30.56 795.56±50.05性别 男 39 215.03±30.02 0.109 0.913 501.79±30.58 0.458 0.649 799.56±50.23 0.204 0.839女 21 215.92±30.13 497.99±30.89 796.79±50.32血管侵犯 有 24 239.22±30.56 5.970 0.000 539.59±30.64 10.079 0.000 869.98±50.98 10.742 0.000无 36 191.16±30.54 459.20±30.02 726.23±50.65淋巴结转移 有 24 231.10±30.02 3.783 0.000 563.26±30.02 16.036 0.000 856.74±50.32 8.811 0.000无 36 201.05±30.23 435.63±30.32 739.56±50.56 TNM 分期 Ⅰ～Ⅱ期 33 189.68±30.56 6.574 0.000 450.69±31.03 12.237 0.000 696.42±50.23 15.591 0.000Ⅲ～Ⅳ期 27 241.56±30.23 548.56±30.56 899.65±50.23 Edmondson 分期Ⅰ～Ⅱ期 24 179.62±30.98 7.376 0.000 452.73±30.46 11.637 0.000 697.02±50.46 15.291 0.000Ⅲ～Ⅳ期 36 239.35±30.56 546.49±30.65 898.39±49.65肿瘤直径 ≥5 cm 45 239.98±41.37 7.630 0.000 518.35±29.98 8.407 0.000 831.34±50.66 8.633 0.000<5 cm 15 151.49±30.56 443.12±30.12 700.59±51.23

3 讨论

肝细胞癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤, 手术虽然能够延长患者的生命, 但极易复发, 肿瘤转移和侵袭是该病复发的重要影响因素, 所以了解有关肿瘤转移和侵袭相关的指标, 以便寻求相关干预措施［9］。

李长生等［10］选择了153 例患者分3 组进行实验,将其3 组治疗前后的MMP-9 和VEGF 水平进行对比发现, 治疗后, 肝细胞癌患者的MMP-9 和VEGF 水平均有所下降, 在本文实验中, 同样发现与治疗前相比,患者的MMP-9 和VEGF 水平得到降低, 本文实验结果与李长生等［10］结果一致, 这说明通过治疗, 可改善患者的MMP-9 和VEGF 水平, 所以通过检测MMP-9 和VEGF 水平情况, 即可判断患者肝细胞状况。此外, 在本实验中还发现ECM1 的水平变化也能反映患者肝细胞健康情况。分析原因如下：血管不仅能够为肿瘤细胞提供充足的营养物质, 还能够为各个器官组织输送癌细胞, 进而使得其发生转移和分化［11］。内皮细胞的生长发育、浸润以及基底膜的降解过程是血管形成过程最为重要的环节, MMP-9、VEGF 是血管形成过程中的不可缺少的因子, 能够保障血管的再生和发展, 其中VEGF 是对于血管调控能力较强的一种因子, 特异性高, 能够与血管内皮细胞表面的受体特异性结合, 进而促进细胞发生有丝分裂, 促进内皮细胞增殖, 提升血管的通透性, 促进新生血管生成, 进而会满足肿瘤细胞转移、生长的需要, 所以, 在患有肿瘤的患者体内,VEGF 水平较高［12］。MMP-9 是一种蛋白水解酶, 能够有效降解、破坏细胞质基质, 促进肿瘤细胞的转移和侵袭, 同时, 其还能够提高内皮细胞的活性, 参与到肿瘤细胞血管的生长中, 有效促进肝癌细胞的生长和转移, 所以其在肿瘤患者体内水平也比较高［13］。ECM1是一种分泌性糖蛋白, 能够参与血管生成、肿瘤细胞分化过程, 促进肿瘤细胞发生转移, 主要指通过抑制金属蛋白酶组织抑制剂表达, 进而使得MMP-9 水平提升, 加速细胞质基质的降解, 从而促进肿瘤细胞发生转移［14］, 而本次实验采用的治疗药物为甲磺酸阿帕替尼,其能够抑制酪氨酸激酶激活, 阻碍细胞周期进程, 且能够有效抑制肝癌细胞的增殖过程, 杀灭肿瘤细胞, 从而VEGF、ECM1、MMP-9 的水平均下降, 所以通过检测机体血清中VEGF、ECM1、MMP-9 水平, 即可判断机体患病状况。

此外, 在本实验中发现患者的年龄、性别均与ECM1、MMP-9、VEGF 水平无关, 但不同血管侵犯、淋巴结转移、TNM 分期、Edmondson 分期和肿瘤直径患者ECM1、MMP-9、VEGF 水平比较差异具有统计学意义(P<0.05)。分析原因如下：随着患者年龄的增加, 其各项生理机能会发生退化, 但是癌细胞发展情况以及直径大小等并不会有所变化；同样, 性别也和癌细胞的生长发育情况无关, 所以患者血清中的ECM1、MMP-9、VEGF 水平并不会因为年龄、性别的不同而有所差异［15］。由于淋巴结系统是人体免疫防御屏障,能够保护机体免受侵害, 具有杀灭肿瘤、炎症作用, 因此当其发生转移时, 将会导致患者病情恶化, 肿瘤发生转移, 所以患者血清中的ECM1、MMP-9、VEGF 水平会受到影响；肿瘤直径越大, 其分化的速度越快, 所以患者的肿瘤生长越快, 肿瘤越严重, 故患者的血清指标会发生变化；一般良性肿瘤并不会发生血管侵犯,受到侵犯的多为恶性肿瘤, 说明此时患者的癌细胞已穿透患者的血管壁, 在血管内部形成癌栓, 进而会随血液留至患者各处器官和组织中, 病情恶化, 进而其ECM1、MMP-9、VEGF 水平较高；TNM 分期是根据肿瘤大小、血管侵犯程度以及淋巴结转移情况进行评估的, 由于上文已介绍血管侵犯程度、淋巴结转移情况和肿瘤直径情况均会影响患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 水平, 所以TNM 分期不同, 患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 水平也会有所变化；同时, Edmondson分期反映的是肝细胞癌的恶化程度, 其等级越高, 说明患者病情恶化越严重, 所以根据Edmondson 分期, 可判断患者病情情况, 故分期变化会影响患者血清ECM1、MMP-9、VEGF 指标水平变化［16］。

综上所述, ECM1、MMP-9、VEGF 三者相互作用可促进肝癌细胞的转移, 可根据其水平情况, 了解患者肝细胞、肝功能健康状况。