肉制品中酸性红和诱惑红含量测定盲样考核探究

薛晓伟

摘 要：目的：通过参加实验室认可CNAS现场评审考核肉制品中酸性红和诱惑红的测定，证实并提高实验室的着色剂测定能力。方法：参照《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35—2023），优化了提取方法和色谱条件，采用外标法定量。结果：肉制品中酸性红和诱惑红的测定结果分别为1.92 mg·kg-1 、5.37 mg·kg-1，盲样真值分别为2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1。结论：盲样考核结果满意，本实验室具备一定的着色剂检测能力。

关键词：酸性红；诱惑红；高效液相色谱法

Validation of the Determination Ability of Acid Red and Alluring Red in Meat Products

Abstract： Objective： To confirm and improve the ability of the laboratory to determine the acid red and alluring red in meat products by participating in CNAS field assessment. Method： According to the GB 5009.35—2023， the extraction method and chromatographic conditions were optimized， and external standard method was used for quantification. Result： The determination results of acid red and alluring red in meat products were1.92 mg·kg-1 and 5.37 mg·kg-1，the true values of blind samples were 2.07 mg·kg-1 and 5.35 mg·kg-1，respectively. Conclusion： The result of blind sample examination is satisfactory， and the laboratory has certain capabilities in detecting colorants.

Keywords： acid red; alluring red; high-performance liquid chromatography

肉制品含有豐富的营养成分，对人体健康有益。随着生活水平的逐步提升，人们的要求也越来越高。除了最基本的卫生要求外，也会对色、香、味有所要求[1]。而合成色素因具有改善色泽的特点，在现代食品加工业中有非常广泛的应用[2]。但合成色素大多数是由苯、甲苯、萘等化工产品经化学合成而来，具有潜在的致泻性、脏器功能损害与致癌性，因此对化学色素的检测监管相当重要[3]。针对合成着色剂含量检测，部分文献、专利中已经有过相关的报道，且我国也有相应的检测标准。但GB 5009.35—2023中样品前处理过程过于复杂，试验所用时间较长，在日常面对大批量的检验任务时效率太低。本文通过优化提取方法和色谱条件，使得方法的实用性更强，能有效排除基质干扰，同时显著提高回收率。

盲样考核是对未知样品进行测定，是为了验证实验室检测能力，确保日常检测结果的准确可靠而必须进行的一项质量控制活动。它是中国合格评定国家认可委员会（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）和中国计量认证（China Metrology Accreditation，CMA）认证评审的考核内容，能直接反映实验室仪器设备和人员检测技术的实际水平和出具报告的能力[4-7]。本次盲样评估是通过参加实验室认可CNAS现场评审考核肉制品中酸性红和诱惑红的测定，检验实验室的着色剂检测能力，提高实验室在着色剂检测技术上的竞争力。本实验参照《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35—2023），优化了提取方法和色谱条件，采用外标法定量。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

酸性红（1 000 ?g·mL-1）、诱惑红（1 000 ?g·mL-1），北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司；甲醇（色谱纯）；乙酸铵（色谱纯）；无水乙醇（分析纯）；氨水（分析纯）；超纯水；XS204梅特勒-托利多电子天平；IKA? MS3漩涡混合器；HC-3018高速离心机；KQ-500DE 超声波清洗器；戴安U3000 高效液相色谱仪（DAD 检测器）。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），序列号：USCL134794；流动相A为20 mmol·L-1乙酸铵溶液，B为甲醇；梯度洗脱；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。检测器：二极管阵列检测器波长范围400～800 nm，检测波长：520 nm。

1.2.2 标准曲线的制备

分别精密量取0.5 mL酸性红、诱惑红标准溶液，加超纯水定容至10 mL，得到酸性红、诱惑红质量浓度均为50 ?g·mL-1的混合标准储备液。分别吸取一定量的上述混合标准储备液于容量瓶中，用超纯水定容至10 mL，得到质量浓度分别为0.2 ?g·mL-1、0.5 ?g·mL-1、1.0 ?g·mL-1、2.0 ?g·mL-1、5.0 ?g·mL-1和10.0 ?g·mL-1的混合标准工作溶液。

1.2.3 样品制备

准确称取试样2 g（精确至0.00l g），置于50 mL具塞离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，涡旋混匀，于80 ℃水浴超声30 min，8 000 r·min-1离心5 min，取10 mL上清液于50 ℃氮气浓缩至近干，准确加入2 mL pH值为9.0的乙酸铵缓冲溶液溶解，溶液用针筒过滤器，孔径0.45 μm的滤膜过滤，弃去5滴滤液，取续滤液作为待测液。空白试验同上。

2 结果与分析

2.1 提取条件的选择

选取已知酸性红和诱惑红含量的卤肉阳性样品，以乙醇氨水溶液为提取剂，在相同提取时间下，比较不同温度超声水浴的提取效率，实验结果如表1所示。当温度≥80 ℃后，提取效果趋于稳定，回收率≥92%，符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）要求。綜合考虑节约能效以及实验安全问题，决定选择80 ℃水浴超声提取方式。

2.2 流动相的选择

试验以甲醇和20 mmol·L-1乙酸铵溶液为流动相，以色谱图为依据，考察了不同洗脱梯度对实验的影响，在保证分离效果的情况下，综合考虑酸性红和诱惑红保留时间、峰形、峰面积以及灵敏度等因素，选择流动相梯度比例如表2所示。

2.3 标准曲线的绘制

按1.2.2项方法配制标准系列溶液，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程及相关系数。酸性红：y=0.463 1x-0.063 7（r=0.999 6）；诱惑红：y=0.429 9x-0.010 7（r=0.999 9）。在质量浓度为0.2～10.0 μg·mL-1 时，酸性红、诱惑红的峰面积线性关系良好。

2.4 方法验证

2.4.1 回收率试验

称取卤肉阴性样品9份，添加3个不同水平的酸性红和诱惑红混合标准储备液（50 ?g·mL-1）进行回收率实验：第1、2、3份加入标准储备液0.04 mL，第 4、5、6份加入标准储备液0.08 mL，第7、8、9份加入标准储备液0.40 mL。回收率测定结果见表3。由3表可知，回收率符合国家标准《实验室质量控制规范食品理化检验》（GB/T 27404—2008）附录F要求[5]。

2.4.2 精密度试验

取回收试验卤肉加标样品3份（每个水平各1份），连续测定6次，记录峰面积，计算精密度。结果见表4。

2.4.3 检出限确定

称取卤肉阴性样品1份，取混合标准储备液（50 ?g·mL-1）0.01 mL，按试样分析步骤处理测定，目标物各组分色谱峰信噪比：酸性红为S/N=8.2（＞3），诱惑红为S/N=12.3（＞3）。由实验结果可知，当称样量为2 g，各目标组分的方法检出限为酸性红：0.3  mg·kg-1，诱惑红：0.3  mg·kg-1。

2.5 盲样考核试验

实验室盲样考核能力验证一般以《ISO13528实验室间能力比对试验》经典Z值法评估实验室的检验检测水平，Z值的大小代表实验室的结果与中位值的偏离程度，而符号“+”和“-”代表与中位值的偏离方向，一般|Z|≤1为结果满意[6]。

本次对盲样进行检测，称取两份盲样考核卤肉制品进行试验，采用已建立的方法进行测试，做2次平行试验。酸性红和诱惑红测定结果分别为1.92 mg·kg-1、5.37 mg·kg-1，盲样真值分别为2.07 mg·kg-1 、5.35 mg·kg-1，Z值分别为-0.65和0.17，|Z|均小于1，结果均为满意。

2.6 方法应用

随机抽取市内各大市场及商超的卤肉样品共30批次，应用本方法进行合成着色剂的测定。其中1份样品检出酸性红，检出浓度为0.92 mg·kg-1，其余29批均未检出。该方法更适用于实验室日常大批量的监督抽检任务。

3 结论

盲样考核能够在一定程度上评价实验室的管理水平和检测者的综合检测能力。本次参加实验室认可CNAS现场评审考核肉制品中酸性红和诱惑红的测定，准确性较高，考核结果为满意。本研究总结了该盲样评估试验的实验过程，优化后的方法简便高效、精密度好，回收率高，能准确且快速地测定卤肉制品中着色剂的含量。

参考文献

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[2]梁提松，敬璞.糖果中食用色素使用情况调查[J].农产品加工，2020（12）：79-82.

[3]欧阳燕玲，陈玲，谢维平.肉制品中人工合成着色剂测定前处理方法的研究[J].中国卫生检验杂志，2006，16（10）：1269.

[4]陈士恒，史晓梅，吕岳文，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联四级杆质谱法快速检测番茄酱中19种常见农药残留量[J].食品安全质量检测学报，2015（4）：1128-1135.

[5]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.

[6]周浩，凌秀梅，李俊霞，等.菌落总数与金葡菌检测能力验证结果与分析[J].食品研究与开发，2017，38（16）：149-152.

[7]宋珺洁.粉尘中游离二氧化硅盲样考核中质量控制[J].中国检验检测，2023，31（5）：70-72.