不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗免疫效力对比实验

王鹏江 曹剑 刘强德 王钢 候凤 李新萍 袁科 丁占强 武天增 连凡平 张志鹏 贺笋

摘要：本研究旨在评价不同厂家猪肺炎支原体灭活疫苗的免疫攻毒保护效果。选择4周龄仔猪25头，随机分为5组，每组5头猪，分别免疫四种猪肺炎支原体灭活疫苗（即疫苗A组、疫苗B组、疫苗C组、疫苗D组），E组为攻毒对照组，不做任何处理，在同等条件下隔离饲养。各疫苗按照对应的说明书进行免疫，免疫后第14、28天进行采血，检测支原体抗体水平，一免后28 d时，所有免疫组连同攻毒对照组，各气管注射猪肺炎支原体CJ株5 mL/头（含0.01 g肺组织毒）。攻毒后饲养观察28 d，对所有实验组动物进行观察临床症状。A组实验动物攻毒后未出现咳嗽、腹式呼吸等支原体临床症状，B-D组实验猪攻毒后偶尔出现轻微间隔性咳嗽，E组实验动物攻毒后出现连续性咳嗽，个别猪出现腹式呼吸等临床症状。攻毒后第28天进行病理剖检。结果表明，攻毒对照组猪4/5头出现典型猪肺炎支原体病变，在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶，出现“肉样”或“胰样”实质样病变，界限明显。B～D组解剖后个别猪出现典型猪肺炎支原体病变，A组实验动物解剖后个别猪肺脏出现零星病变，剩余实验动物肺脏均未出现猪肺炎支原体病变。根据肺部病变较少率计算，A～D组病变率分别为71.4%、42.8%、60.7%、44.6%。实验表明，4种猪肺炎支原体灭活疫苗均具有保护效果，但A组灭活疫苗与其他免疫组相比较，免疫效果明显优于其他免疫组，在猪群免疫中能够起到更好的免疫效果。

关键词：猪肺炎支原体毒；灭活疫苗；免疫效力；对比

猪支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由猪肺炎支原体（mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一种慢性、接触性呼吸道传染病，临床上有独特的咳嗽和气喘症状，又称猪气喘病[1]，该病分布十分广泛，世界各地均有发生，也被认为是危害各国养猪业的重要疫病之一[2]。该病发病率高，发病慢且长，以冬春寒冷季节多发。发病猪表现为流涕、咳嗽、气喘[3]。死亡率虽不高但猪肺炎支原体也能够导致由特定病毒性病原包括猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环2型病毒感染所引发的疾病[4]。本实验将市售猪支原体疫苗进行实验室效力对比，了解现有疫苗对猪肺炎支原体免疫效果提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 毒株与疫苗

检验用菌液：CJ株组织毒，含0.01 g肺组织。疫苗A，菌株为猪肺炎支原体（CJ株），由天康生物制药有限公司制备、保存；疫苗B、C、D为市售猪肺炎支原体灭活疫苗。

1.2 实验动物

3～4周龄健康仔猪25头，猪肺炎支原体病原和抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒病原和抗体均为阴性。

2 方法

2.1 实验分组

试验分为五组，每组5头，A～D組为免疫组，另设一组为对照组，25头3～4周龄实验猪按随机分组，并对其进行编号，分配在不同的房间进行隔离饲养，每个实验组动物的编号应如实进行记录。实验分组信息见表1。

2.2 免疫前程序

将实验动物在洁净环境下隔离饲养3～5 d，观察实验猪是否健康以及有无猪支原体肺炎临床症状，包括连续咳嗽和腹式呼吸。

2.3 疫苗免疫

免疫前疫苗回温，分别对A组D组所有仔猪分别按右侧耳后颈部肌肉途径注射疫苗2mL/头，E组为对照组，实验猪注射生理盐水。

2.4 攻毒程序

免疫后28 d，所有实验组连同攻毒对照组，分别通过气管注射猪肺炎支原体CJ株组织毒5 mL（含0.01 g肺组织毒）。

2.5 攻毒后程序

攻毒后28 d，将所有实验动物处死并剖检，患病猪应出现典型的猪支原体肺炎肺部病变，在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶，出现“肉样”或“胰样”实质样病变，界限明显。

3 结果

3.1 抗体检测

实验动物免疫当天、免疫后第14和28天对所有实验动物进行血液采集，分离血清，检测猪肺炎支原体血液抗体水平如图1所示。各组实验动物免疫前猪肺炎支原体血清中抗体S/P值均在0.03～0.09，检测结果均为阴性，免疫后第14、28天猪肺炎支原体抗体水平除了E组攻毒对照组之外其余实验组抗体水平均在持续上升，A组抗体水平在整个免疫组中处于最高，B～D组血清中抗体S/P值均在1.1～1.4之间，E组实验动物血清中抗体水平S/P值均≤0.4。

3.2 临床症状

实验动物攻毒后进行观察临床症状，A组实验动物攻毒未出现猪肺炎支原体临床症状，B组实验猪攻毒后第12天时3/5头出现间隔性咳嗽，C组实验猪攻毒后第14天2/5头出现轻微咳嗽，D组实验猪攻毒后第12天时2/5头出现间隔性咳嗽，E组实验猪攻毒后第10天时4/5头实验猪出现连续性咳嗽，病情严重实验动物出现腹式呼吸临床症状。

3.3 病理变化

攻毒后28 d对所有实验动物进行剖检，剖检后A组实验猪剖检后个别出现零星病变，剩余实验猪未出现猪肺炎支原体病变。B、C、D组部分实验组出现典型猪肺炎支原体病变，在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶，出现“肉样”或“胰样”实质样病变，界限明显。攻毒对照组剖检后4/5头出现典型猪肺炎支原体病变，在肺脏尖叶、心叶、膈叶前1/3部位以及中间叶，出现“肉样”或“胰样”实质样病变，界限明显[5]。

3.4 肺部评分统计

剖检后对所有肺部病变进行评分，评分方法根据28分评分进行评判。如图2所示，A组剖检后肺部评分平均分为3.2，B～D组肺部评分均在4～6分之间，E组攻毒对照组剖检后实验动物肺部出现典型支原体病变，肺部评分平均分为11.2，四组免疫组与攻毒对照组相比，分值明显较低。

3.5 肺部病变较少率统计

通过肺部病变减少率计算[6]，免疫组与攻毒对照组相比，如图3所示，4个免疫组肺部病变减少率分别为：A组71.4%、B组42.8%、C组为60.7%、D组为44.6%，从肺部病变减少率可以看出4个免疫组A组与C组具有明显免疫原性。但A組与C组相比，A组肺部病变较少率明显高于C组。

4 讨论

猪肺炎支原体对各种猪均易感，在新引进猪群多呈急性暴发，其发病率达到30%～50%，感染率达到80%以上[7]。本病发病率高，流行快，除死亡率快还导致病猪长时间带菌，大量消耗机体组织，严重影响猪的生产性能和商品性能，大大增加养殖成本。而且，支原体可以通过空气传播，很难隔离阻断传播途径，极易引起全群发病，是公认的最难净化的猪病，给养猪业带来巨大的损失。本病在我国流行十分广泛，呈上升趋势，已成为危害养猪业最严重的疾病之一，给我国养猪业造成严重的经济损失。

本实验主要通过市售猪肺炎支原体疫苗，进行实验室实验，评价市售疫苗免疫效果，实验结果表明疫苗A、C均具有良好免疫效果，肺部病变减少率均能达到60%以上，但疫苗A组免疫效果明显高于疫苗C组。疫苗作为疾病一项主要防控举措，合理选择使用疫苗才能有效防控疾病发生，通过本次实验，为养殖业选择该疫苗奠定了基础，提高动物健康，减少疾病发生。

参考文献：

[1] 付启欢，丁红雷，吴建云.猪支原体肺炎疫苗研究进展[J].中国兽医学报，2016，36（7）：1251-1255.

[2] 沈青春，宁宜宝，覃青松.猪肺炎支原体的研究进展[J].中国兽药杂志，2003（6）：26-30.

[3] 李秋菊，王丹辉，沈青春，等.猪肺炎支原体灭活疫苗的实验室效力研究[J].当代畜禽养殖业，2021（4）：12-16.

[4] JEFFREY J ZIMMERMAN.猪病学[M].10版.赵德明.中国农业大学出版社，2014.

[5] 倪黎纲，王宵燕，吴信生，等.肺炎支原体感染猪模型的建立及相关指标分析[J].西北农业学报，2019，28（7）：1045-1051.

[6] 朱巧艳，张国良，翟路峰，等.猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗与猪瘟活疫苗混合免疫效果评价[J].中国预防兽医学报，2020，42（9）：938-943.

[7] 王留.猪支原体肺炎活疫苗与灭活苗比较分析[J].兽医导刊，2015（9）：43-44.